日粮添加复合甘草素对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

刘 莉，郝福星，韩健宝，衣 蕾，胡元亮，武 毅*

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300；2.南京农业大学，江苏南京 210000）

甘草酸又名甘草甜素，是甘草的主要成分之一，是一种三萜类皂苷，具有抗病毒、抗癌、免疫调节和脂质代谢等多种活性作用（董永军等，2008 ；王丽荣等，2004）。正常情况下，甘草酸在甘草根部以无机盐的形式存在，表现出多种生物活性（杨锐等，2019 ；杨锐等，2016），如甘草酸二铵，可抑制GDF15、AF3 等与细胞凋亡相关基因的表达，阻断HMOX1 的信号传递，由此可用作新型抗氧化剂，来修复胃病和氧化应激造成的黏膜损伤（衣蕾，2019 ；邵琦等，2016）。除此之外，甘草酸还可较明显的改善大鼠体内的脂质代谢，摄入更少的高热量来降低模型的肥胖率（陆伦根等，2004）。研究还发现，甘草酸能有效改善小鼠因药物造成的记忆损伤，并且展现了一定的抗炎和抗氧化作用（刁亚英等，1999）。

为了更深入的了解甘草提取物和磷酸化甘草多糖在体内的免疫调节作用，本研究以甘草提取物及磷酸化甘草多糖为原料制作复合甘草素，以肉鸡作为实验动物，研究其体内活性作用。

1 材料与方法

1.1 试验药物 复合甘草素，原料为质量比1 ：3的磷酸化甘草多糖和甘草提取物，以郑州普罗动物药业购买的乌兹别克甘草水提取液和甘草分别制作提取。

1.2 试验材料 多聚甲醛，批号20200418 ；生理盐水；甲醇（分析纯），批号20200922；怡宝纯净水，批号20200910。IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 ELISA 试剂盒，sIgA 和IL-17 ELISA试剂盒，均购自南京奥青生物科技有限公司。

甘草酸，批号20201021，购自南京道斯夫生物科技有限公司。

1 日龄未免疫健康白羽（817）优质肉鸡，购自南京高淳宏旺养鸡专业合作社。

1.3 疫苗和免疫程序 4 日龄：新- 支二联活疫苗2 倍量滴鼻点眼；中牧股份南京药械厂，批号，20200609。

7 日龄：新- 流二联灭活疫苗0.3mL/ 只份，颈背部皮下注射；中牧股份南京药械厂，批号，20200603。

12 日龄：法氏囊中等毒力活疫苗 2 倍剂量饮水；南京乾元浩生物股份有限公司，批号，20200607。

22 日龄：新城疫-IV 弱毒疫苗 2 倍剂量饮水免疫；南京乾元浩生物股份有限公司，批号，20200607。

1.4 动物分组及处理 试验选用180 只1 日龄未免疫健康白羽（817）肉鸡，随机分为4 组，每组45 只，常规免疫新城疫疫苗。其中，3 个试验组（FGSL、FGSM、FGSH）分别拌料投喂低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）浓度的复合甘草素，对照组采用常规日粮饲养。

1.5 复合甘草素中甘草酸和磷酸化甘草多糖含量的测定 以甘草酸和甘草次酸对照品为标准制作标准曲线，将所用复合甘草素进行处理与其相比对。

1.6 生长性能测定 于7、14、21、28、35 日龄，每组各取5 只称重，比较各组体重变化。

1.7 新城疫抗体效价的测定 于7、14、21、28、35 日龄，每组各取5 只采血，将血样置于37 ℃2 h，分离血清，用HA-HI 法测定血清抗体效价。

1.8 血清细胞因子及十二指肠洗液的sIgA 和细胞因子测定 于7、14、21、28、35 日龄，每组各取5 只翼下静脉采血，分离血清，取5 cm 长的十二指肠，用生理盐水冲洗3 次，收集洗液，4℃ 8000 r/min 离心10 min，收集上清液。按照ELISA 试剂盒说明测定血清中的IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 及十二指肠洗液中sIgA 和IL-17的含量。

1.9 数据分析 数据以“Means±SD”表示，用SPSS 软件中的单因素方差分析程序进行分析，采用Duncan’s 法进行多重比较。P ＜0.05 表示组间差异显著。

2 结果

2.1 体重变化 由表1 可知，在D7、D21，FGSM组体重显著高于对照组（P ＜0.05）；在D14、D28，各组体重无显著差异（P ＞0.05）；在D35，FGSL和FGSM组的体重高于对照组，但无显著差异（P ＞0.05）。

表1 各组体重变化

2.2 血清抗体效价的变化 由图1 可知，在各时间段，试验组效价最高，D7 各组差异不明显（P ＞0.05），但D21、D28、D35，试验组抗体效价均高于对照组（P ＜0.05）。

图1 血清抗体效价的变化

2.3 血清细胞因子含量的变化

2.3.1 IFN-γ 含 量 的 变 化 由 表2 可 知，在D7，FGSH组 血 清IFN-γ 含 量 显 著 高 于 对 照组（P ＜0.05）；在D14、D21、D28，FGSL、FGSM和FGSH组血清IFN-γ 含量显著高于对照组（P ＜0.05）；在D35，FGSM和FGSH组 血 清IFN-γ 含量显著高于对照组（P ＜0.05）。

表2 各组血清IFN-γ 含量的变化 Pg/mL

2.3.2 IL-2 含量的变化 由表3 可知，在D7、D21，FGSL、FGSM和FGSH组 的 血 清IL-2 含量高于对照组，但无显著差异（P ＞0.05）；在D14，FGSH组的血清IL-2 含量显著高于对照组（P ＜0.05）；在D28、D35，FGSL、FGSM和FGSH组血清IL-2 含量显著高于对照组（P ＜0.05）。

表3 各组血清IL-2 含量的变化 Pg/mL

2.4 十二指肠洗液sIgA 和IL-17 含量的变化

2.4.1 sIgA 含量的变化 由表4 可知，在D7、D14、D28 和D35，FGSL、FGSM和FGSH组的血清sIgA 含量显著高于对照组（P ＜0.05）；在D21，FGSL组与对照组血清sIgA 含量无显著差异（P ＞0.05），但FGSM和FGSH组血清sIgA 含量显著高于对照组（P ＜0.05）。

表4 各组血清sIgA 含量的变化 mg/mL

2.4.2 IL-17 含 量 的 变 化 由 表5 可 知，在D7、D14，各 组 血 清IL-17 含 量 无 显 著 差 异（P ＞0.05）； 在D28、D35，FGSL、FGSM和FGSH组的血清IL-17 含量显著高于对照组（P ＜0.05）。

表5 各组血清IL-17 含量的变化 ng/mL

3 讨论

3.1 复合甘草素对肉鸡生长性能的影响 研究表明，中药可通过增强机体免疫力来提高动物的生长性能（王丽荣，2015）。与对照组相比，虽然本试验肉鸡在1 ～35 日龄时肉鸡初始体重偏低，复合甘草素在提高肉鸡机体免疫力的同时也增强了基础代谢，但随着日龄的增加，日粮添加复合甘草素可显著提高肉鸡生长性能。

3.2 复合甘草素对细胞因子的影响 研究表明，细胞因子参与免疫应答与免疫调节，通过结合细胞表面相应的受体来发挥一系列的作用，血清中的细胞因子含量变化与T 细胞的活化有关，某些细胞因子能介导细胞免疫（董永军等，2012）。在本研究中，在各时间段，试验组中的IFN-α、IFN-β 等细胞因子的含量高于对照组。因此可以发现，血清中上述细胞因子的含量变化能更深一步的反应动物的免疫水平。

3.3 复合甘草素对免疫器官指数的影响 法氏囊、胸腺等是鸡的主要免疫器官，免疫器官的良好发育可以为机体提供正常的免疫保护，因此，观察免疫器官形态，分析免疫器官指数，可以很好的反应免疫器官的发育，更进一步的看出免疫器官的发育状况，分析机体免疫水平。本研究结果展示，FGSH组可以在一定时间提升肉鸡免疫器官指数，进一步提升机体免疫水平。

4 讨论

综上所述，在规模化养殖背景下，肉鸡生长性能和免疫能力直接决定了养殖场（户）的养殖效益和肉鸡存活率。本研究在日粮中添加低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）浓度的复合甘草素，可有效改善肉鸡生长性能和免疫功能。考虑整个试验期肉鸡的饲料报酬，日粮添加中浓度的复合甘草素效果最佳。