尼莫地平调控IRS-1对人脑血管外膜成纤维细胞活力和凋亡的影响①

袁 岗 肖宗宇 李文辉 曹立新 惠超杰 （青海大学附属医院神经外科，西宁 810001）

血管外膜成纤维细胞是组成血管外膜的主要成分，抑制血管外膜成纤维细胞增殖及促进其凋亡对防治心血管疾病具有重要作用［1-3］。IFN-α可促进血管内皮细胞凋亡［4］。目前关于人脑血管外膜成纤维细胞增殖及凋亡的分子机制尚未完全阐明，因而探究其分子机制及积极探寻心脑血管增殖性疾病的治疗药物具有重要意义。研究表明尼莫地平可抑制谷氨酸诱导的神经细胞增殖［5］。胰岛素受体底物-1（insulin receptor substrate-1，IRS-1）表达上调可能改善人脑血管内皮细胞功能及促进细胞增殖［6］。但尼莫地平是否可通过调控IRS-1 的表达从而影响人脑血管外膜成纤维细胞活力及凋亡尚未可知。因此，本研究主要探讨尼莫地平对人脑血管外膜成纤维细胞活力、凋亡的影响及其对IRS-1 的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 人脑血管外膜成纤维细胞购自美国ScienCell公司。

1.1.2 药品与试剂 尼莫地平，含量/规格：50 ml/10 mg，生产批号：J20140105，购自拜耳医药保健有限公司广州分公司；IFN-α 购自北京三元基因工程有限公司；DMEM、胎牛血清购自美国Gibco 公司；MTT、DMSO 购自上海碧云天生物技术有限公司；凋亡试剂盒购自美国Sigma公司；Lipofectamine2000与Trizol 购自美国Invitrogen 公司；反转录与实时荧光定量PCR 试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；si-IRS-1、si-con购自上海吉玛制药技术有限公司；兔抗人p21、CyclinD1 抗体购自美国CST 公司；兔抗人Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2 抗 体 购 自 美 国Santa Cruz 公司；兔抗人IRS-1 抗体购自武汉艾美捷科技有限公司。

1.1.3 仪器 7500 型ABI 荧光定量PCR 仪购自美国ABI 公司；……