枇杷清肺饮基于MAPK/NF-κB 信号通路调控HaCaT 细胞炎性损伤机制研究①

韩晓晴 吴景东 侯殿东 张小卿 王靓怡 （辽宁中医药大学，沈阳 110000）

痤疮又称粉刺，是一种毛囊皮脂腺阻塞引发的慢性炎症性疾病，各年龄段均可患病，青少年发病率较高，近年来发病年龄有向中年波及的趋势，痤疮是一种损美性疾病，让患者承受经济压力的同时，也带来一定的心理负担［1-2］。临床数据研究表明，在西医治疗痤疮的基础上配合中医辨证治疗，能取得更好的治疗效果，经方枇杷清肺饮源自《医宗金鉴》，临床上用来治疗肺经风热型痤疮，取得了较好的临床效果［3-5］。中医药治疗疾病具有多成分、多靶点、多途径的特点，目前针对枇杷清肺饮治疗痤疮的机制尚未完全阐明，本研究采用LPS 诱导HaCaT 细胞构建体外炎症模型，通过网络药理学与体外细胞实验验证揭示枇杷清肺饮治疗痤疮的作用机制，为中医药治疗痤疮提供新的研究思路。

1 材料与方法

1.1 材料 人永生化表皮细胞HaCaT（武汉典藏中心，1101HUM-PUMC000373）；枇杷清肺饮（辽宁中医药大学附属医院）；DMEM 高糖培养基（Gibco 公司）；大鼠血清（北京斯贝福公司）；LPS（Aladdin 公司）；PBS（双螺旋公司）；CCK-8（碧云天有限公司）；TNF-α、IL-1β、IL-4、ELISA检测试剂盒（万类生物有限公司）；AKR1B1 ELISA检测试剂盒（酶联生物公司）；TRIpure、Super M-MLV 反转录酶、RNase inhibitor、2×Power Taq PCR MasterMix 及SYBR Green 试剂（北京BioTeke 公司）；NF-κBp65 抗体、P38 抗体、JNK 抗体、p-JNK 抗体、p-P38 抗体（美国CST 公司）；羊抗兔IgG-HRP（美国Thermo 公司）；内参抗体GAPDH（Bioss公司）；引物由生工生物工程（上海）有限公司合成；ELX-800酶标仪（BioTek 公司）；倒置相差显微镜（麦克奥迪公司）；CO2培养箱（上海力申公司）；紫外分光光度计（美国Thermo公司）；荧光定量PCR仪（韩国BIONEER公司）；双垂直蛋白电泳仪及凝胶成像系统（北京六一公司）。……