高效液相色谱法在贻贝黏蛋白检测中的应用

柯林楠 宋茂谦 高敏 陆云龙 母瑞红*

1 中国食品药品检定研究院 （北京 100050）

2 江阴贝瑞森生化技术有限公司 （江苏 无锡 214437）

内容提要： 目的：建立高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC）鉴别检测贻贝黏蛋白（Mussel Adhesive Protein，MAP）的方法。方法：采用Agilent Zobax SB 300A C8（4.6×250mm，5μm）色谱柱，流动相为0.1%三氟乙酸水溶液（A）和含0.1%三氟乙酸乙腈溶液（B）梯度洗脱，检测波长280nm，洗脱温度25°C，流量为0.9mL/min。进样量20μL。考察方法的系统适用性、线性、精密度、检测限及定量限。结果：贻贝黏蛋白供试样品与对照品的HPLC图谱一致。贻贝黏蛋白在0.01～9.79mg/mL范围内峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=1)，峰面积及保留时间RSD均小于5%，最低定量限（LOQ）为0.03mg/mL，最低检出限（LOD）为0.01mg/mL。结论：该方法专属性强，稳定性好，简单易用，适用贻贝黏蛋白的检测。

贻贝是一种能在淡水和海洋环境中附着在如岩石、船体、缆绳等固体表面上和生物表面的海洋生物，可以分泌一种具有卓越黏附性的蛋白质，即贻贝黏蛋白（Mussel Adhesive Protein，MAP）。贻贝黏蛋白具有多巴胺特殊的组成和结构以及优良的黏附特性，其黏合范围广、耐海水腐蚀、强度高、生物亲和性良好，可作为环境友好型胶黏剂，应用于带水条件下的黏合，该特性在医疗领域具有广泛的应用前景。韩国科学家借鉴贻贝能在水下附着的原理，已经研制出一种光活化的以贻贝蛋白为基础的生物胶黏剂[1]。美国西北大学的研究人员正在开发一种与众不同的源自贻贝蛋白的涂层，用于改良医用植入物的生物相容性，并能更好地防止危及生命的血栓和细菌感染[2]。我国贻贝黏蛋白医疗器械、美容产品等领域的研发和在创面修复、肛肠黏膜损伤、皮肤敏感瘙痒等临床的应用已有报道[3-9]。……