佛山地区不良妊娠结局与MTHFR基因C677T位点多态性相关性研究

杨 康，周少雄，欧阳佩雯，庄锡伟，彭健桥

佛山复星禅诚医院检验病理诊断部，广东佛山 528000

不良妊娠结局指除正常妊娠以外的病理妊娠及分娩期并发症，包括胚胎停育、早产、足月低质量新生儿、出生缺陷、自然流产、死胎等，其发生给患者带来巨大的心理及经济负担，已成为严重的社会公共卫生问题之一[1-3]。造成不良妊娠结局的病因迄今尚不明确，多数研究者认为其与遗传因素及环境因素有关[4-5]。伴随分子生物学飞速发展，近几年遗传因素的研究成为热点之一，尤以亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T位点多态性与不良妊娠结局的关系研究最为突出。但目前国内外研究表明，MTHFR基因C677T位点多态性存在人群和地区差异[6-8]，且鲜见佛山地区的相关研究报道。本研究通过了解佛山地区不良妊娠结局女性和正常妊娠女性的MTHFR C677T基因型及基因频率，探讨佛山地区不良妊娠结局与MTHFR基因C677T位点多态性的关系，为临床医生预防不良妊娠及不良妊娠结局患者的治疗提供科学依据，以期减少不良妊娠结局的发生。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性收集2019年6月至2021年5月于本院行MTHFR C677T基因多态性检测的不良妊娠结局女性(病例组)454例和同期正常妊娠女性(对照组)265例。纳入的研究对象均为汉族，籍贯为本市且无血缘关系，本研究获得了研究对象知情同意，且符合医学伦理程序。病例组年龄19～47岁，平均(29.3±5.1)岁；包括不明原因复发性流产、稽留流产、自然流产、胚胎停育、不良孕产史患者。对照组年龄19～56岁，平均(30.8±5.0)岁；纳入标准为无不良生育史且至少一次正常生育史，无家族性遗传病史，生殖系统正常。两组女性的年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂 XO-01漩涡振荡器(北京泰普联合科技开发有限公司)，5424R型高速离心机(德国Eppendorf公司)，TL988型荧光定量PCR仪(西安天隆科技有限公司)。地高辛染色液、样本萃取液、细胞保存液(济南广音医疗科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1MTHFR C677T基因多态性检测 采集研究对象外周血2 mL于乙二胺四乙酸二钾抗凝剂保存，提取白细胞。应用荧光染色原位杂交技术测定白细胞中MTHFR C677T基因位点。经过95 ℃变性解链10 min，60 ℃恒温特异性杂交并实现非酶级联荧光信号放大90 min。经双通道荧光定量PCR仪进行测定结果，MTHFR C677T基因多态性测定结果共计3种，分别为野生型(CC型)、突变杂合型(CT型)、突变纯合型(TT型)，其中CT型和TT型合称突变型。

1.3.2观察指标 通过检测研究对象的MTHFR C677T基因多态性，分析病例组与对照组MTHFR C677T基因型和基因频率的分布差异，各基因型发生不良妊娠结局的差异并作统计分析。

1.4统计学处理 采用SPSS26.0统计学软件进行数据处理及统计分析。使用χ2检验分析基因型频率是否符合Hardy-Weinberg(HWE)遗传平衡定律，以P>0.05为符合。计数资料采用频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以95%置信区间(CI)计算优势比(OR)评估基因型与不良妊娠之间的关系。检验水准α=0.05，以P<0.05(双侧)为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HWE遗传平衡定律检验 使用χ2检验对对照组女性MTHFR C677T基因型频率进行HWE平衡检验，基因型分布符合HWE检验平衡(χ2=0.20，P>0.05),说明入组的佛山地区正常妊娠女性具有区域群体代表性。

2.2MTHFR C677T 基因型和等位基因频率在病例组和对照组分布差异 病例组CC型255例(56.18%)、CT型147例(32.37%)、TT型52例(11.45%)、CT+TT型199例(41.4%)，C等位基因频率72.35%、T等位基因频率27.64%。对照组CC型166例(62.64%)、CT型89例(33.58%)、TT型10例(3.77%)、CT+TT型99例(37.35%)，C等位基因频率79.4%、T等位基因频率20.60%。两组基因型频率和等位基因频率比较差异有统计学意义(χ2=12.72、8.93，P<0.05)。两组CC型频率比较差异无统计学意义(χ2=0.19，P=0.665)，两组CT型频率比较差异无统计学意义(χ2=1.58，P=0.424),两组TT型频率比较差异有统计学意义(χ2=10.31，P<0.05)。两组女性等位基因频率比较，差异有统计学意义(χ2=8.93，P<0.05)。见表1。

表1 不良妊娠结局女性与正常妊娠女性MTHFR C677T基因型、等位基因频率比较[n(%)]

2.3MTHFR C677T 各基因型发生不良妊娠结局情况比较 以入组所有研究对象中MTHFR 677 CC型女性发生不良妊娠结局的风险为对照(设定数值为1.000)，结果显示，CT型女性发生不良妊娠结局的风险与CC型女性比较差异无统计学意义(χ2=0.19，P=0.665)；TT型女性发生不良妊娠结局的风险为CC型女性的3.385倍(95%CI：1.674～6.847，χ2=12.67，P<0.01)；(CT+TT)型女性发生不良妊娠结局的风险与CC型女性比较差异无统计学意义(χ2=2.89，P=0.089)。

3 讨 论

不良妊娠结局的发生率在临床呈逐年递增趋势，其发生与母体遗传因素的关系已成为当前研究热点[9]。MTHFR基因编码的MTHFR是叶酸代谢通路中的关键酶，酶活性的下降会降低体内叶酸的利用率，并引起血液同型半胱氨酸水平的升高，从而影响机体纤溶系统和凝血系统，使机体血液处于高凝状态，进一步升高胎儿生长受限、流产、神经管畸形等不良妊娠结局的发生率[8,10-13]。至今，已发现MTHFR基因有多种突变，最常见的是C677T位点的突变，此类突变具有明显的病理意义，其中CC型女性叶酸代谢酶活性正常，CT型叶酸代谢酶活性较低，TT型叶酸代谢酶活性最低。因此，有学者认为，MTHFR C677T基因多态性与不良妊娠结局的发生相关[2]。

笔者通过对MTHFR C677T基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布进行比较发现，其中病例组的TT型频率(11.45%)明显高于对照组(3.77%)，同时MTHFR C677T等位基因频率在病例组和对照组中差异有统计学意义(P<0.05)，病例组的等位基因T频率(27.64%)明显高于对照组(20.60%)，与其他文献报道一致[2,14-15]，提示MTHFR 677位点TT型女性及发生等位基因T突变的女性发生不良妊娠结局的风险可能更高。但也有研究报道，MTHFR C677T基因多态性与不良妊娠结局无相关性[16]，这可能与MTHFR C677T基因多态性存在地区和种族差异相关。另外，本研究对MTHFR C677T各基因型女性发生不良妊娠结局情况进行分析，结果显示MTHFR 677位点TT型女性发生不良妊娠结局的风险为CC型女性的3.385倍，提示TT型女性不良妊娠结局发生率可能更高。

综上所述，MTHFR C677T基因存在多态性，在不同地区人群中存在差异。研究结果表明，MTHFR C677T基因多态性与女性妊娠不良结局的发生具有一定关系，其中MTHFR 677位点TT型女性发生不良妊娠结局的风险较高。因此，女性妊娠前应行MTHFR C677T基因多态性检测，临床可依据女性基因型的不同，在其妊娠前、妊娠期采取个性化预防措施，以期降低不良妊娠结局的发生率。本研究存在的局限有：(1)纳入的样本量较小；(2)未对不同基因型女性进行不同用药剂量设计及药物治疗效果的监测。未来可进行大样本量、多中心研究以明确MTHFR C677T基因多态性与女性发生不良妊娠结局的关系。