家兔人工授精关键技术

马 艳，李 芳，戴玉娇，李星垚，王绍熙，田维菊

（1.泸州市江阳区动物疫病预防控制中心，四川 泸州 646000；2.重庆市大足区动物疫病预防控制中心，重庆 大足 402360；3.重庆市潼南区农业农村委员会，重庆 潼南 402660；4.泸州市动物疫病预防控制中心，四川 泸州 646000；5.重庆市农业广播电视学校，重庆 两江新区 401121；6.丰都县树人镇农业服务中心，重庆 丰都 408200）

在中国兔养殖生产中，繁殖方法普遍采用自然交配、人工辅助交配和人工授精3 种方式。其中，兔人工授精是指采用人工方式采集优良公兔的精液，将精液镜检、稀释及保存，当母兔发情时通过人工方式将精液输送到母兔的生殖道，以人工的方式代替自然交配和人工辅助交配，从而使母兔受精的一种方式。

1 人工授精的优势

兔人工授精技术是迄今为止兔繁殖、品种改良经济、科学的方法，受胎率可达80%～90%［1］，其优势如下。

1.1 品种改良

人工授精能最大限度地发挥优良种公兔的利用价值，提高公兔的配种效能，加快兔场的兔种品质改良步伐，从中获得更大的利润。

1.2 生产管理

人工授精使得养兔生产管理更有计划性，更富灵活性。有效地提高现有兔场的母兔繁殖性能，可避免因公兔使用过多或其他原因造成公兔精液质量不佳的问题出现。同时，兔群更趋于整齐一致，便于饲养管理。

1.3 疾病防疫

人工授精会降低新疾病引入和传播的风险，避免了公母兔的直接接触，可防止多种疾病，特别是生殖道疾病的传播。人工授精时，必须检查精液，这样可及时发现和治疗不孕母兔，有助于淘汰不孕母兔和提高受胎率。

1.4 节约成本

人工授精技术推广可以减少80%公兔饲养数量。如3 000 只母兔的养殖场需要500～600 只公兔，人工授精可以减少到150 只。减少的公兔每年饲料可以节约5 万多元，结余的笼位可饲养繁殖母兔，增加销售收入。

2 人工授精站建设

2.1 选址

授精站场址应符合相关法律法规及NY/T 682的规定；场址地势高燥、背风、向阳、交通便利，水源充足，电力可靠。授精站距离交通干线和居民居住区≥1 000 m；距屠宰场、化工厂和畜禽养殖场≥2 000 m；位于居民区及公共建筑群的下风向。

2.2 布局

授精站宜设管理区、生产区等功能区，各区之间界限分明，联系方便；管理区内应包括生活设施、办公设施及生产辅助设施（饲料库、车库等），位于生产区主风向的上风向；生产区内主要包括种公兔舍、后备种公兔舍、精液处理室及有关生产辅助设施。

授精站大门入口处设置长≥4.5 m、深0.2 m 的消毒池；生产区入口处设置人员更衣、消毒室，兔舍入口处设消毒设施，配备必要的消毒器具。授精站四周建高度≥2 m 的围墙。

2.3 设施建设

种公兔舍间距≥8 m；舍内地面干燥，通风良好，配备相应的保暖、降温设施；种公兔单笼饲养，笼底面积≥0.36 m2，笼高≥0.45 m。精液处理室面积≥15 m2；地面、墙壁、天花板、门窗等应为耐腐蚀易清洁材料；配备窗帘、消毒灭菌以及防寒降温、通风换气等设备；设置相应的水槽及操作台，具备精液检验、稀释处理和贮存等功能。

授精站供应自来水，清污分流排水；种公兔给水设施应为自动饮水系统。

2.4 种公兔

采精种公兔数量≥50 只，并配备相应台兔。种公兔应来自取得《种畜禽生产经营许可证》《动物防疫条件合格证》的种兔场，具有《种兔合格证》、完整系谱和性能测定记录，按GB 16549 检疫合格。

种公兔初次采精应达到6～8 月龄、80%以上成年体重；采取的精液应进行检查，检查合格的精液进行稀释等处理后，可用于人工授精配种。

2.5 工作人员

授精站应配备种公兔饲养、精液采集、稀释、检验和疫病防控等专业技术人员，主要岗位技术人员应获得相关资质证书。

2.6 环境保护

授精站应建设粪污等废弃物及病害动物无害化处理设施；废弃物的处理和排放应符合GB 18596 的规定。

2.7 管理制度

授精站应建立岗位职责，建立饲养管理、卫生防疫、精液采集、质量检验、仪器设备、销售服务、档案管理等制度。

2.8 兔场消毒程序

2.8.1 场区内卫生要求 场区内应无杂草、无垃圾，不准堆放杂物，生活区要求整洁卫生。

2.8.2 兔舍的清洗和消毒 兔舍消毒必须按程序进行，清扫—水冲—喷洒消毒药液—熏蒸。先彻底清扫兔舍地面、窗台、屋顶以及每个角落，要求无兔毛、兔粪和灰尘。然后用高压水枪由上到下，由内向外冲洗。待兔舍干燥后，再用消毒剂从上到下喷雾消毒1 次。撤出的设备，如饮水器、料槽等用消毒液浸泡30 min，然后用清水冲洗，置阳光下曝晒2～3 d，再搬入兔舍。进兔前1 周，封闭门窗，用高锰酸钾和福尔马林（高锰酸钾21 g/m3，福尔马林42 mL/m3）密闭熏蒸24 h（舍内温度22～26 ℃，湿度75%～80%时消毒效果最佳），通风3 d。人员进兔舍，必须换工作服、工作鞋，脚踏消毒池。

2.8.3 物流管理消毒 物品及工具应清洗和消毒，防止在产品流通环节中交叉感染。所有物品在入舍前都必须彻底消毒。场内公用笼箱、饲料车、运兔工具，若受污染就会波及全场，所以场内应设各类专用车，舍内各种工具专用固定，严禁串用。

2.8.4 重要地点消毒 场区入口及兔舍进出口要设消毒池，放入0.2%的新洁尔灭，每3 d 更换1 次。

2.8.5 饮水管的消毒 空舍内，进兔前2 d，在饮水管中加入饮水消毒液放置1 d，然后放掉消毒液，再放清水冲洗5 min，方可为兔供水。

2.8.6 兔场废弃物及污物消毒 粪便、污水、尸体、其他废弃物是病原体的主要集存地。粪便应及时运到指定地点堆积发酵处理或制成有机肥，污水进入沼气池或化粪池处理，病死兔尸体焚烧、深埋或微生物分解处理，所有的废弃物必须进行无害化处理。

3 种公兔选择与调教

3.1 种公兔选择

应选择符合品种特征，体质结实，结构匀称，生殖器官发育正常，精液品质良好，性欲旺盛，健康无病的种公兔。

3.2 种公兔调教

配种前1 个月开始开始加强营养。配种前3 周将成年母兔放入可配种的后备种公兔笼，诱导公兔爬跨，进行调教训练，每次时间以不超过10 min 为宜，每周2～3 次。

4 采精前准备

4.1 采精公兔准备

对公兔外生殖器四周的兔毛作清洁消毒处理。

4.2 台兔准备

选择与公兔体重接近、性格温顺、四肢有力的非种用母兔作台兔。

4.3 采精器械准备

采精器包括假阴道外壳、假阴道内胎和集精瓶，经清洗、高温煮沸或微波消毒后备用，采精前将假阴道的外壳和内胎组长成假阴道。

4.4 精液品质检查器具准备

160～400 倍显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃量筒、玻璃棒、纱布等经清洗、高温煮沸或微波消毒后备用。

4.5 稀释液及激素准备

稀释液可选择5%葡萄糖、0.9%生理盐水或其他商品稀释液，35 ℃备用。激素选用促排卵制剂。

5 采精

5.1 采精方法

采精地点可在公兔笼中，用母兔做台兔时，先将发情的母兔放入公兔笼内。术者一手固定母兔头部，另一手握假阴道，将其置于母兔腹下两后股之间，当公免爬跨时，术者根据阴茎伸出的方向和角度，及时调整假阴道位置，以迎合公兔阴茎插入射精。爬跨后，公兔骨盆进行数次强烈抽动，当公兔向前一挺，然后向一侧倒去，有时发出“咕”的一声尖叫，就是已射精的表现。此时术者放开母兔，迅速将假阴道竖直，并放气减压，使精液流入集精器，然后及时送到化验室镜检和稀释。若化验室离采精地点较远，应将装精液的试管放入30 ℃左右的温水杯内。

5.2 注意事项

采精时待假阴道内层温度降到40～42 ℃即可迅速采精。公兔阴茎对温度极为敏感，低于40 ℃不易引起射精；过高温度采精会养成嗜高温的坏习惯，对精液品质也有影响。采精过程中假阴道位置要正确，应置于水平斜向上30°～45°，绝不能向下倾斜，以免精液流失。采精期间采精者应镇静自若，不能烦躁，更不能对公兔采取暴力行为。合理使用种公兔，频繁采精，不仅精子活力降低，而且可使其精液中抗精子抗原的抗体上升，使精子活力下降。每只公兔每天采精1 次，每周4～5 次。采精期间应尽量避免用药，如种兔有病，应停止采精。采精期间应加强种公兔管理，每天加喂鸡蛋和胡萝卜，加强运动［2］。

6 精液检查

进行肉兔精液品质检查时，一般应在18～25 ℃为宜，并在采精后立即进行。

6.1 外观检查

在实际应用中，一般以目测估计。正常公兔的精液呈淡乳白色，具有特殊的腥味，也有少数兔子的精液不正常，混入尿液有臭味；生殖器有炎症出血的带红色；清水样的为无精子。兔子的精量很少，一般在0.2～2 mL，平均为0.8 mL。

6.2 显微镜检查

目测法是根据精子在视野中的分布概况，即精子与精子之间的距离评定为密、中、稀3 种等级。该方法虽是主观评定，但简便易行，实际工作中多采用此法。家兔的精子密度随季节变化也十分明显。

精子活力是指精液中直线前进运动精子所占百分率。标记为0.9、0.8、0.7、……，分别代表90%、80%、70%……的精子具有直线前进运动力，是一种主观评定法，有经验的技术员估计的结果很接近实际数。兔精子活力应在0.5 级以上方可用于授精。不同季节的精子活力差异也十分明显。主要是精子密度的检查和活力的评定。精子密度是指单位容积内所含有的精子数目。精子数的计算，直接关系到授精剂量中含有活精子数。

7 精液稀释

7.1 主要因素

精液稀释的目的在于扩大精液量，增加输精母兔只数，延长精子存活时间。在配制肉兔精液稀释液时应当考虑稀释剂、营养成分、保护成分等主要因素［3］。

7.1.1 稀释剂 多为等渗缓冲液，可增加精液体积。在实际生产中，一般常用0.9%NaCI 或5%葡萄糖溶液做稀释精液。

7.1.2 营养成分 可以给精子补充外源性营养和能源，从而延长精子寿命，如葡萄糖、果糖、蔗糖、氨基乙酸、奶、卵黄等。

7.1.3 保护成分 ①缓冲物质，如柠檬酸钠、柠酸二氢钾、柠酸二氢钠、三羟甲基氨甲烷等，可调节精液的酸碱度。②非电解物质，如糖类、柠酸盐类等，可改变、中和副性腺分泌物的电离程度，以防止精子凝集并补充精子能源。③防冷刺激物质，如奶类、甘油等，可防止精子遇冷时休克，丧失活力。④抗菌物质，常用青霉素（每l mL 稀释液加入500～1 000 单位）、链霉素（每l mL 稀释液加人500～1 000μg）等，防止有害微生物的繁殖，延长精子寿命和提高受胎率。⑤抗冻物质，如甘油、二甲基亚砜等，用于超低温冷冻精液。

7.2 稀释方法

根据精液的质量和活力稀释倍数一般稀释2～10 倍，若超过10 倍的高倍稀释，一定要分次稀释。在稀释时，用干净的胶头滴管沿着集精杯的内壁加入稀释液，让稀释液缓缓流入到集精杯底部。注入后再用玻璃棒轻轻搅动，使其均匀混合。稀释后的精液应再做一次镜检，发现活力不强或死亡过多的精子则不能用作输精。把镜检合格的稀释精液全部倒入集精瓶内，再把集精瓶密封好放入17 ℃的恒温箱内。

7.3 注意事项

一是配制稀释液用的蒸馏水为双蒸水，pH 为6.6 以上，双蒸水必须现用现制备。二是配置稀释液的蒸馏水温度在30～40 ℃，稀释液的温度和精液的温度必须一致。三是没有使用完的稀释液放在5 ℃冰箱内保存，保存期不能超过2 d。

8 输精

输精就是将精液注入母兔的生殖道内，是人工授精的最后一环。人工授精前6 d 增加光照刺激，每天光照16 h，每只母兔的光照度应大于60 lx。输精前，每只母兔肌肉注射绒毛膜促性腺激素50～100单位，注射后4～6 h 方可输精。

8.1 输精器

可用玻璃输精器，前端长10 cm 左右的空心小玻管与2 mL 注射器相连，也可用试验滴管代替，每输精一次应更换一支无菌输精器。

8.2 输精母兔的选择

应选择健康无病，处于发情期的母兔进行授精，这对提高受胎率有很大益处。

8.3 输精方法

由助手抓住母兔的背部，使母兔臀部略朝上，输精员持输精器（如一人操作，可一手抓兔，一手持输精器）。取经过稀释的精液0.5 mL（约含精子1 000万个以上）慢慢插入母兔阴道内6～7 cm 处即可输精。插入时应轻轻向前上方旋动，要边旋边进，切不可硬插，以免损伤生殖道。插入后可来回轻轻抽动和转动几次，有助于刺激子宫颈。抽出输精器时也应边转动边抽出，以防精液随输精器溢出。抽出输精器后，即由助手拍打一下兔子的臀部，使母兔受惊，以便精子吸入。

9 输精后处理

一是采完精后，把假阴道拆开，冲洗内胎和集精杯，再用蒸馏水清洗1 次，晾干、备用。二是输精后24 h 内不准在兔舍内做任何工作，让兔子休息。三是输精结束后，倒出没有用完的精液。把输精枪调到最大处，再倒入20 mL 75%乙醇清洗1 次，再用蒸馏水20 mL 清洗1 次，晾干、备用。四是关闭烘箱和显微镜电源，把实验室整理清洁［4］。