聚花过路黄对动物胃蛋白酶等消化功能相关因素的影响研究

李飞艳 刘群群 黄 丹 罗晓云 刘园园

湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012

聚花过路黄为报春花科植物聚花过路黄Lysi-machiaecongestifloraeHemsl的干燥全草，2006年版《中药大辞典》, 2010年版《四川省中药材标准》均以“风寒草”收载[1-2]，有祛风散寒、化痰止咳、解毒利湿、消积排石的功效。

金钱草为2020年版《中国药典》收录品种，为报春花科植物过路黄LysimachiachristinaeHance的干燥全草[3]。聚花过路黄作为湖南常见，野外资源丰富、易繁殖的一种植被，曾作为理脾消积、清热解毒的草药收载于《湖南药物志》[4]，药名“胡氏排草”，如今临床却已罕见将其用于理脾消积，清热解毒的用途。因其植株与金钱草的原植物过路黄形态相似而被误用，根据药品管理法的规定，聚花过路黄作金钱草使用则为伪品，因此，聚花过路黄常被作为金钱草的伪品而被中药人士关注[5-8]。

现关于聚花过路黄的研究主要集中在药材鉴定、化学成分提取及研究方面[5-10]，对其药效、药理研究甚少，已有报道亦仅限于聚花过路黄对动物脑缺血的保护作用及机制研究，聚花过路黄不同部位提取物的体外抗炎作用，聚花过路黄对动物胆汁、尿液排出作用的研究[11-13]，尚未见关于聚花过路黄对动物消化功能相关因素影响方面的研究报道。研究就聚花过路黄对大鼠、小鼠胃肠运动、胃液中胃酸及胃蛋白酶的影响做探究，旨在探讨其在“消积”方面的功效，挖掘其传统药用价值。

1 材料

1.1 药材 聚花过路黄(风寒草)饮片(批号：202105，瑞丰成中药材公司)经中药鉴定专家鉴定为正品；健脾消食丸(批号：18015002，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂)。

1.2 实验动物 KM小鼠，SPF级，50只，雌雄各半，体重18～22 g，质量合格证号430727211101224718；SD大鼠，SPF级，50只，雌雄各半，体重180～220 g，质量合格证号430727211101225912，均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号SCXK(湘)2019-0004，饲养于湖南中医药大学实验动物中心，许可证号SYXK(湘)2013-0009。

1.3 试剂 胃蛋白酶(Pepsin) ELISA试剂盒(批号：2107R31，江苏酶免实业有限公司)；酚酞指示剂(批号：20200618)、甲基黄指示剂(批号：20180822)均由天津市化学试剂研究所提供；墨汁(批号：DZ0039，北京索莱宝科技有限公司)。

1.4 仪器 IF50酶标仪(瑞士帝肯)；759系列紫外可见分光光度计(上海菁华)；DK-8D电热恒温水浴锅；TDZ4-WS低速离心机；100-1000μl TopPette手动单道可调式移液器(北京大龙)。

2 方法

2.1 受试药物的制备

2.1.1 聚花过路黄药液 聚花过路黄置于不锈钢锅内，加冷水浸泡30 min，煎煮2次，加水量以液面超过药面约3 cm，第一、二次煎煮时间分别为30 min、20 min，趁热过滤，合并两次滤液，旋转蒸发仪浓缩至1 g/mL的药液，4 ℃冰箱保存备用。

2.1.2 健脾消食丸药液 健脾消食丸加纯净水，使溶解成均匀的混悬液，临用前配制。

2.2 分组及剂量 KM小鼠、SD大鼠分别随机分为5组，即空白组(KB)、聚花过路黄高剂量组(GLH-G)、聚花过路黄中剂量组(GLH-Z)、聚花过路黄低剂量组(GLH-D)、阳性药物(健脾消食丸)对照组(JPXS)。健脾消食丸临床用量为6 g/次，2次/d，本实验以临床等效剂量给药，采用剂量小鼠为1.6 g/kg、大鼠为1.1 g/kg给药。《中药大辞典》中聚花过路黄煎汤内服用量为15～50 g，根据人与动物体表面积等效剂量换算，以等效剂量为低剂量，高、中、低剂量差之比为2进行给药，大鼠的高、中、低剂量分别为 10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg，小鼠的高、中、低剂量分别为 20 g/kg、10 g/kg、5g/kg。

2.3 小鼠胃肠推进实验 小鼠40只，每组8只，适应性饲养 5 d 后灌胃给药，每10 g体重给药体积为0.2 mL。空白组以饮用水灌胃，GLH-G组、GLH-Z组、GLH-D组分别以聚花过路黄药液 20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg的剂量灌胃，JPXS组以健脾消食丸药液1.6 g/kg的剂量灌胃，连续用药 7 d，最后1 d灌胃后禁食不禁水24 h，第8天，空白组用纯净水灌胃，GLH-G组、GLH-Z组、GLH-D组以及JPXS组分别以相应药物的相应剂量灌胃，1 h后每只小鼠以10 mL/kg(体重)的量灌服墨汁，15 min 后脱颈椎处死，打开腹腔，剪取幽门下端至回盲部的肠管，测量总长度(L)，再测量幽门至炭末被推至的最前端之间的长度(D)，以炭末推进的长度与肠管总长度的比值(D/L)的百分率做为胃肠推进率的指标[14]。

2.4 大鼠胃游离酸、总酸及胃蛋白酶活性实验 SD大鼠，40只，每组8只，适应性饲养5 d后灌胃给药，每100 g体重给药体积为1 mL。空白组以饮用水灌胃，GLH-G组、GLH-Z组、GLH-D组分别以聚花过路黄药液10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg的剂量灌胃，JPXS组以健脾消食丸药液1.1 g/kg的剂量灌胃，连续用药7 d，末次给药后禁食不禁水24 h，第8天以水合氯醛麻醉动物，行剖腹手术，找到胃，结扎幽门，再由十二指肠给药1次，缝合切口，2 h后再次打开切口，结扎贲门，摘取胃，剪开并收集胃内容物，离心，吸取上清液，得胃液，用于测胃液游离酸、总酸度及胃蛋白酶浓度。

每样本取胃液0.1～0.5 mL，加蒸馏水至 1 mL，加甲基黄、酚酞指示剂各2滴，混匀，用0.02 moL/L的氢氧化钠滴定，溶液颜色由红色至出现橘黄色时，记录氢氧化钠用量，此时为游离酸滴定终点消耗量；继续滴加碱液至出现红色，摇匀后不褪去为止，此时的氢氧化钠用量为总酸终点。计算公式为：1000×0.02×氢氧化钠消耗量/胃液量。

胃蛋白酶浓度检测按照胃蛋白酶 ELISA 试剂盒说明书步骤操作。反应结束后，将酶标板放在酶标仪450 nm波长处测定OD值，代入回归方程(以胃蛋白酶标准品OD值对质量浓度进行回归分析)，计算胃蛋白酶含量。

3 结果

3.1 聚花过路黄对小鼠肠推进运动的影响 与空白组比较，聚花过路黄高、中、低剂量组、健脾消食丸组的肠推进率有增加的趋势，但无统计学差异(P>0.05)。与空白组比较，各药物组动物的小肠总长度及小肠推进长度均无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

表1 聚花过路黄对小鼠小肠推进运动的影响

3.2 聚花过路黄对大鼠胃酸、胃蛋白酶浓度的影响 与空白组比较，各药物组胃液中胃蛋白酶含量均显著增加，有统计学意义(P<0.01)；各药物组胃液中游离酸浓度显著增加，有统计学意义(P<0.01)；各药物组胃液中总酸浓度显著增加(P<0.05或P<0.01)。与阳性药物对照组比较，聚花过路黄高、中、低剂量组胃液中胃蛋白酶浓度显著降低(P<0.05或P<0.01)，且随着剂量的增加胃蛋白酶含量降低趋势加大；各药物组胃液总酸浓度无明显差异；聚花过路黄低剂量组的胃液游离酸浓度显著增高，有显著性差异(P<0.05)，聚花过路黄高、中剂量组无明显差异。结果见表2。

表2 聚花过路黄对大鼠胃酸及胃蛋白酶含量的影响

4 讨论

现代医学认为饮食积滞多与胃肠动力不足或消化酶活性降低有关，胃酸和胃蛋白酶的分泌量反映了胃对食物的消化功能[15]，同时胃蛋白酶的活性受pH影响，其最适pH值为1.8[16]。聚花过路黄作为一味具有理脾消积等功效的中药，其“消积”的作用机制可能是多途径、多靶点、多方面的综合作用，本项目主要就其对动物小肠推进运动、胃酸分泌量、胃液中胃蛋白酶的浓度影响做了初步探讨。

结果显示，聚花过路黄主要通过增加动物胃液中胃酸、胃游离酸的浓度，从而相应的增加胃蛋白酶的排出，且各药物组胃游离酸的平均浓度换算为pH值后，均在1.76～1.83之间，为胃蛋白酶发挥最强活性提供了最佳pH环境[16]，加之聚花过路黄高、中、低剂量组对动物小肠推进运动的增加并不明显，认为聚花过路黄能促进胃内食物消化，不影响食物在小肠中的停留时间。

健脾消食丸为北京同仁堂生产的中成药，具有健脾、消食、化积的功效，金鑫等研究了其药效，得出该药可有效地促进饮食失节致脾胃受损的大鼠体重的增长，并可增加胃液中总酸度、总酸排出量，提高胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量[17]。实验结果显示，健脾消食丸有促进正常大鼠胃液中总酸、游离酸排出，促胃蛋白酶的形成的作用，聚花过路黄相比健脾消食丸，促胃蛋白酶形成的作用较弱。

综上所述，聚花过路黄通过促进胃酸的排出、增加胃蛋白酶的含量，达到促进胃内食物消化的作用，为聚花过路黄“理脾消积”提供了部分理论依据。

研究[10，18-19]报道，聚花过路黄中主要含黄酮类、三萜苷类和甾体类(主为β-谷甾醇等)等化合物，黄酮类主要为槲皮素、杨梅树皮素、柽柳素、山柰素、鼠李素等。有学者[12]研究报道了聚花过路黄不同部位提取物体外抑菌活性，尚未发现关于聚花过路黄不同成分的相关药理作用的报道，聚花过路黄中究竟是何成分在发挥促进胃酸排出、增加胃蛋白酶含量的作用，尚有待进一步研究。