小鼠非酒精性脂肪性肝炎早期YAP活性变化特征及其与胆管反应的时空关系

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的慢性肝病。据报道全球约有25%人口诊断为NAFLD，其中约20%NAFLD患者可能进展为NASH。目前NASH已在全球范围内造成了巨大的公共卫生负担。因此，探究NASH发生发展过程中的病理生理机制至关重要。Yes-相关蛋白（YAP）作为Hippo信号通路的关键分子，是肝脏发育、修复、细胞命运决定和肿瘤发生的重要调节因子。YAP活性的异常增加会诱发多种肝脏疾病的发生发展。在四氯化碳诱导的慢性肝损伤小鼠模型以及NASH患者肝脏组织中，YAP/TAZ/CYR61的表达与疾病严重程度呈正相关；YAP下游靶基因CYR61表达增加可募集巨噬细胞，促进肝脏炎症和纤维化的发展。并且YAP激活能够促进NASH相关肝细胞癌的发生。因此YAP激活在NASH疾病进展过程中具有重要作用。但是目前尚不清楚NASH早期YAP的活性变化特点。

胆管反应（DR）是一种对肝胆细胞损伤的再生修复表现，主要表现为胆管细胞增殖所致的原始小胆管形成。目前认为角蛋白19（K19）、性别决定区Y框蛋白9（Sox9）等胆管细胞标志物在肝组织中的阳性表达是DR发生的标志。研究报道，NASH患者肝组织中DR发生程度与肝纤维化分期显著正相关，且临床观察发现，NASH肝损伤进展似乎可以诱导DR发生，从而促进肝纤维发生。因此，了解DR发生的分子机制对于阐明NASH病理进程有重要的参考价值。DR发生依赖于胆管样细胞的增殖，探究胆管样细胞的来源是解决DR发生的关键所在。据报道在胆汁淤积性小鼠模型中YAP活性增加能够诱导肝细胞转分化为胆管样细胞，参与DR的发生。然而，尚没有研究报道在NASH疾病早期YAP是否也发挥相似的作用，并参与DR发生。

因此，本研究拟采用两种不同致病机制的NASH小鼠模型，即蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）、硫代乙酰胺（TAA）饮食模型，系统观察NASH发生早期YAP活性改变的特点以及其分布与DR发生分布的时空关系，为探寻NASH早期病理发生机制提供新线索。

中国是世界上最大的金条和金币需求市场，本季度需求呈上升趋势，同比上升了25%，至86 t。分析认为，中美贸易战局势升级，国内股票和债券市场纷纷受挫，本季度金价再次下跌，投资者纷纷涌入黄金市场。同时，受益于七夕、中秋节，以及营销策略的不断创新，本季度金饰需求旺盛。世界黄金协会中国区董事总经理王立新表示，作为全球最大的金条和金币市场，本季度中国实物黄金投资需求实现了28%的大幅增长。这再次体现了黄金在投资组合中不可替代的避险作用。从第三季度数据来看，中国金饰消费需求受到特定节假日影响十分显著。金饰零售商也恰当地利用机会开展产品营销活动，从而推动销量并提升品牌忠诚度。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 6～8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠72 只（广东省医学实验动物中心）。所有实验动物均置于SPF级环境饲养，自由进食和饮水，适应性喂养1 周后开始造模实验。本研究实验动物的喂养和操作均遵循南方医科大学南方医院实验动物管理细则，并得到南方医科大学南方医院实验动物伦理委员会批准以及认可（NFYY-2020-0339）。

1.1.2 主要试剂与仪器 蛋氨酸胆碱缺乏饲料（MCD，南通特洛菲）；硫代乙酰胺（TAA，Sigma）；苏木素伊红染色试剂盒（雷根）；YAP 抗体、K19 抗体、Sox9 抗体（Abcam）；辣根酶标记山羊抗兔IgG（H+L）、DAB显色液（中杉金桥）；RNAiso Plus、PrimeScriptRT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）、TB Green™Premix Ex Taq ™II（Tli RNaseH Plus）（TaKaRa）；5%BSA、RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂（PMSF）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天）。NanoDrop 2000紫外分光光度计（NanoDrop）；实时荧光定量PCR仪（罗氏）；组织研磨仪（上海净信）；Wes 全自动蛋白质定量检测仪（ProteinSimple）；正置明场显微镜（Lecia）。

1.2 方法

(二)欲望危机。欲望危机就是人的欲望给个体生命、社会组织、人与人、人与社会、人与自然等带来的危害与破坏。恰当而适度的欲望本是人类与社会前进发展的动力，但欲望失当和过度便会造成欲望危机。欲望危机的实质就是欲望异化。老子并不反对人的基本欲望，但他反对不当而过度的欲望。他指出，“五色令人目盲，五音令人耳聋，五味令人口爽，驰骋畋猎令人心发狂，难得之货令人行妨。是以圣人为腹不为目，故去彼取此”(十二章)[3]。他从人的基本生理需求欲望——声色味的过度追求可能导致的危害，得出“灾祸与人的欲望”相互关系的基本结论，这就是“咎莫大于欲得”(四十六章)[3]。

1.2.5 免疫组化 免疫组化检测YAP、K19、Sox9 的表达；其中K19和Sox9为DR鉴定标志物之一。步骤如下：肝组织石蜡切片4 μm，65 ℃烘箱烤片2 h；二甲苯脱蜡，梯度乙醇复水，枸橼酸盐溶液进行微波抗原修复；3%过氧化氢溶液浸泡10 min；5%BSA室温封闭1 h；滴加一抗抗体（YAP、K19和Sox9）；4 ℃过夜孵育。次日，PBS浸洗3次（3 min/次）；加入辣根过氧化酶标记的二抗，室温孵育1 h，PBS浸洗3次（3 min/次）；DAB显色；细胞核复染；明场显微镜下观察。肝细胞细胞核呈YAP阳性染色为YAP阳性肝细胞，胞质与胞核均呈YAP阳性染色且具有胆管样细胞形态的细胞为YAP阳性胆管样细胞，胞质与胞核均呈K19阳性染色和Sox9阳性染色的胆管细胞为K19阳性DR细胞、Sox9阳性DR细胞。每张切片随机选取3 个视野（×400）后，用Image J 图像处理软件计数该视野下YAP阳性肝细胞、YAP阳性胆管样细胞以及K19阳性、Sox9阳性DR细胞的个数。

回到家，我对妈妈说：“妈妈，我不想学了，舞蹈太难了。”妈妈盯着我看了一会儿，眼中充满了失望，但仍在和蔼地对我说：“孩子，你不能因为一点困难就轻易放弃，你不是想参加演出吗？为了这个梦想也要坚持下去呀！只要功夫深，铁杵磨成针。遇到困难，要学会选择坚持。你想一想，站在舞台上，那么多人为你鼓掌，这是一件多么值得骄傲的事儿啊！”

1.2.3 蛋白质免疫印迹 将20 mg肝组织置于1.5 mL离心管，加入200 μL裂解液（RIPA裂解液加入终浓度为1 mmol/L蛋白酶抑制剂PMSF），使用组织研磨仪匀浆（60 Hz，60 s，2次），4 ℃，12 000 r/min，离心15 min，吸取上清至新1.5 mL离心管；按照BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书测定样本蛋白浓度；使用WES全自动蛋白定量检测仪测定YAP蛋白表达量。

1.2.4 实时荧光定量PCR 使用RNAiso Plus试剂盒提取肝组织总RNA；使用PrimeScriptRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒进行反转录反应；按照TB Green ™Premix Ex Taq ™II（Tli RNaseH Plus）试剂盒说明书进行实时荧光定量PCR检测YAP 及其靶基因（Ctgf、Cyr61、Acta2）的mRNA 水平。引物序列：YAP上游引物序列：5'-ACCCTCGTTT TGCCATGAAC-3'，下游引物序列：5'-TGTGCTGGGA TTGATATTCCGTA-3'；Ctgf 上游引物序列：5'-GACC CAAC TATGATGCGAGCC-3'，下游引物序列：5'-CCC ATCCCACAGGTCTTAGAAC-3'；Cyr61 上游引物序列：5'-CTGCGCTAAACAACTCAACGA-3'，下游引物序列：5'-GCAGATCCCTTTCAGAGCGG-3'；Acta2 上游引物序列：5'-GTCCCAGACATCAGGGAGTAA-3'，下游引物序列：5'-TCGGATACTTCAGCGTCAGGA-3'。以上引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。以Gapdh为内参，采用2法计算目的基因相对表达量。

1.2.2 肝组织病理学评价 对正常对照组、MCD 组、TAA 组各时间点的肝组织进行常规的HE 染色和Masson染色评估肝组织病理学改变以及纤维化情况；按照肝脏脂肪变性、活动度、纤维化评分系统（SAF）和Ishak评分系统，进行活动度（A）和纤维化（F）评分。肝纤维化是NASH进展期的标志。将A＜2且F≤1 定义为NASH 疾病早期，A≥2 且F＞1 定义为NASH疾病进展期。肝组织学分析由两名专业的病理科医生完成。

TAA组在第3天表现NASH病理特点，小鼠肝组织中央静脉区域33%以上肝细胞出现脂肪变（病理学评分为1.8）、少量肝细胞气球样变（病理学评分为0.4）并伴有较明显的炎性细胞浸润和坏死灶（病理评分为2.4）（图2B、G）。与正常对照组相比，TAA组3 d～2周小鼠肝纤维化评分无显著性差异，4、6、12周均出现明显纤维化（＜0.01，图2B～H）。因此，划分TAA组3 d～2周为TAA组NASH疾病早期，4～12周为TAA组NASH疾病进展期。

DR标志物分子（K19和Sox9）的免疫组化染色结果显示，在正常对照组小鼠肝组织中只有汇管区胆管上皮细胞呈现K19阳性染色和Sox9阳性染色，数量分别为18.8、30.17/×400视野（图7A、E；图8A、E）。在NASH疾病模型诱导阶段，MCD组4 周小鼠肝组织汇管区周围K19/Sox9阳性DR细胞略有增加（图7B、F），但与对照组相比差异无统计学意义（图7I、J）；8 周、12 周肝组织中央静脉周围的肝小叶区域K19/Sox9 阳性DR 细胞数量以及管状结构显著增多（＜0.01，图7C、D、I，＜0.001，图7G、H、J）。

1.3 统计学分析

线下主要是教师讲授和学生自主探讨相结合的方式为主，线上以学习课程教学视频和探讨疑难交流为主。教学方法是教师将线上与线下、自我探索、任务驱动、问题导向和小组讨论相结合。营造轻松自由的上课氛围,教师与学生紧密沟通,调动学生的积极性,提高学生的参与度。

利用GraphPad Prism 8.3软件进行数据分析以及可视化处理。每组实验动物的数量为3 只，实验重复3次，所有实验数据用均数±标准差表示，组间差异比较采用检验、One-way ANOVA和Two-way ANOVA等方法分析，组间多重比较在方差齐性时采用Bonferroni方法，方差不齐性时采用Dunnett T方法。双侧＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 NASH疾病模型的肝组织病理学改变

HE染色显示正常对照组小鼠肝组织形态结构正常，无明显肝细胞脂肪变性以及炎性细胞浸润（图1A、2A）。MCD组1周表现NASH病理特点，小鼠肝组织中5%～33%肝细胞出现脂肪变（病理学评分为1.0）、少量肝细胞气球样变（病理学评分为0.6）并伴有炎症（病理评分为1.0）（图1B、G）。与正常对照组相比，MCD组1、2、4 周肝纤维化评分无显著性差异，8、12周出现明显的肝纤维化（＜0.01，图1B～H）。因此，划分MCD组1～4周为MCD 组NASH 疾病早期，8～12 周为MCD 组NASH疾病进展期。

何良诸神情恍惚，跟随赵集，朝酒店走去。十多年前，何良诸走向小勺酒店。小勺款款走出来，往门框上一靠，抱住胳膊，一挑尖溜溜下颏，说：“进来呀。”

2.2 NASH疾病早期肝组织中YAP表达和活性变化

免疫组化结果显示，正常对照组小鼠肝组织中除汇管区胆管上皮细胞内呈现YAP阳性染色以外，肝细胞内几乎没有YAP表达（图3A、E；图4A、E）。在MCD组和TAA组的NASH疾病早期小鼠肝组织中肝细胞内YAP活性显著增加，表现为YAP的表达量增多且多位于细胞核（图3B～D、F；4B～D、F）。与正常对照组相比，MCD组NASH早期（1、2、4周）小鼠肝组织中YAP阳性肝细胞数量增加（＜0.001），且在2周达到峰值后逐渐减少（图3G）。与正常对照组相比，TAA组NASH早期（3 d、1周、2周）小鼠肝组织中YAP阳性肝细胞数量增加（＜0.001），于2周时达到峰值（图4G），并且YAP阳性染色范围由中央静脉区域向整个肝小叶逐渐扩大（图4B～D）。

qPCR 结果显示，与正常对照组相比，MCD 组NASH早期（1、2、4周）小鼠肝组织中YAP及其下游靶基因的mRNA相对表达量增加（＜0.01，图5A）。TAA组NASH早期（1、2周）小鼠肝组织中YAP及其下游靶基因的mRNA相对表达量增加（＜0.05，图5B）。与正常对照组相比，两个模型组NASH疾病早期肝组织YAP及其下游靶基因mRNA水平均增加。

网架高度是网架选型的关键点之一。平板型网架的力学模型可等效成一块考虑剪切变形的夹层板，为了保证必要的刚度，网架的高度随跨度L的增加而增大，网架高度既是控制网架变形的主要因素，同时也影响着网架杆件内力的大小，相应也影响着网架节点形式的选取。一般来说网架高度越高，网架刚度就越大，杆件受力越小，但是并非越高越好，网架高度太高一方面会增加施工安装的难度，另一方面由于杆件长细比增加导致杆件截面加大，最终反而可能导致网架用钢量增加。因此合理的网架高度应该是在满足承载力和变形要求的前提下，尽量减小网架杆件数量和用钢量，通常采用试算法来确定合理的网架高度。

蛋白质免疫印迹结果显示，正常对照组小鼠肝组织YAP总蛋白表达量较低，其蛋白特征性峰面积为1385（图6A、B）。在NASH早期诱导阶段，与正常对照组相比，MCD组1、2、4周小鼠肝组织YAP总蛋白表达量增加（＜0.001），2 周达到最高值后降低（图6A）；与正常对照组相比，TAA组3 d、1周、2周小鼠肝组织YAP总蛋白表达量增加（＜0.001，图6B）。

1.2.1 NASH小鼠模型建立 C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、MCD组、TAA组。正常对照组：普通饲料和饮用水，分别于3 d、1 周、2 周、4 周、6 周、8 周、12 周随机选取3只收集肝组织；MCD组：蛋氨酸胆碱缺乏饲料（除蛋氨酸、胆碱缺乏外，含40%蔗糖和10%脂肪）和饮用水，分别于1、2、4、8、12周随机选取3只收集肝组织；TAA组：普通饲料和含300 mg/L硫代乙酰胺的饮用水，分别于3 d、1 周、2 周、4 周、6 周、12 周随机选取3只收集肝组织。

2.3 NASH小鼠模型肝组织表现出广泛的胆管反应

其中，(a,x)为不完全Gamma函数，pFq(a1,…,ap;b1,…,bq;z)为广义超几何函数，将式(14)代入式(13)可得：

TAA组4 周小鼠肝组织中央静脉周围出现K19/Sox9阳性DR细胞（图8B、F），但与正常对照组相比差异无统计学意义（图8I、J）；6 周、12 周肝组织中的K19/Sox9阳性DR细胞数量以及管状结构不断增加分布于整个肝小叶中（＜0.01，图8C、D、I；＜0.001，图8G、H、J）。

2.4 NASH疾病模型早期YAP激活与DR发生的时空关系

通过比较MCD、TAA 饮食诱导NASH 疾病早期YAP激活时间以及DR发生时间，发现MCD组和TAA组小鼠肝组织中的YAP活性增加时间：MCD组1 周、2周（图3B、C、图5A，图6A），TAA 组3 d、1 周、2 周（图4B～D、图5B、图6B），均早于DR发生的时间：MCD组4周、8 周、12 周（图7B～D、F～H），TAA组4、6、12周（图8B～D、F～H）。

进一步观察MCD组和TAA组NASH疾病进展过程中肝细胞内YAP激活与DR发生的时空关系，发现正常对照组小鼠肝组织中只有汇管区胆管上皮细胞呈YAP 阳性染色，数量为9.8/×400 视野（图9A、E；图10A、E）。在NASH疾病早期诱导阶段，MCD组2 周小鼠肝组织中YAP阳性肝细胞数量增加至峰值90.8/×400视野（＜0.001）后持续减少（图3C，9E），4 周肝组织汇管区DR开始发生时，YAP阳性肝细胞数量减少（＜0.001），并且在汇管区出现了YAP阳性胆管样细胞（图9B、E）；NASH疾病进展期，8 周、12 周小鼠肝组织中央静脉周围的肝小叶区域表现出广泛的DR（图7C、D、G、H），同时中央静脉周围的肝小叶区域的YAP阳性肝细胞继续减少，YAP阳性胆管样细胞数量进一步增加（＜0.001），并且发现大量的由YAP阳性胆管样细胞组成的管状结构（图9C～E）。

在NASH疾病早期诱导阶段，TAA组2 周小鼠肝组织YAP阳性肝细胞数量增加至峰值69.2/×400视野（＜0.001）后持续减少（图4D；图10E）；在NASH疾病进展期，TAA 组4 周小鼠肝组织中央静脉区域周围DR 开始发生时，同样YAP阳性肝细胞数量开始减少（＜0.001），并且在中央静脉区出现了YAP阳性胆管样细胞（图10B、E）；6、12周小鼠肝组织整个肝小叶区域表现出广泛的DR 时（图8C、D、G、H），位于肝小叶区域YAP阳性肝细胞数量继续减少（＜0.001），YAP阳性胆管样细胞数量进一步增加（＜0.001），并且观察到大量的由YAP阳性胆管样细胞组成的管状结构（图10C～E）。

3 讨论

NASH作为一种严重的NAFLD形式已成为肝衰竭、肝移植的重要原因之一。然而，目前美国食品药品监督管理局尚未批准用于治疗NASH的特定药物，部分原因是对NASH疾病各个时期潜在的病理生理机制不完全了解。因此，探索NASH疾病早期的病理特征，对NASH治疗或长期预后具有重要意义。YAP是一种具有高度保守性的转录共激活因子，由于缺少DNA结合结构域，YAP需与其他转录因子结合，共同调控下游靶基因的转录，从而促进细胞增殖以及减少细胞凋亡等。生理条件下，肝组织中的YAP活性受到抑制，主要以磷酸化形式滞留在细胞质中或被降解，参与维持成年肝脏正常组织形态和生理功能。然而，在NAFLD疾病动物模型以及NASH患者肝脏中均发现YAP活性异常增加，并且YAP活性的增加与疾病的严重程度成正相关关系；如在高脂饮食诱导的NAFLD猴子肝组织中YAP主要在肝细胞以及胆管细胞的细胞核中表达，并且YAP活性增加与NAFLD活动度评分呈正相关。在纤维化NASH患者肝组织中发现YAP在反应性管状细胞（RDC）的细胞核、细胞质中均有表达，但在细胞核的表达更显著，并且YAP表达水平与肝损伤指标（肝细胞气球样变、肝小叶炎症）呈正相关。这些研究表明YAP活性的异常增加参与了NASH疾病的发生发展，然而在饮食诱导的NASH疾病早期中YAP活性变化及其特点尚未报道。本研究在组织学观察发现，与正常对照组相比，MCD组和TAA组NASH疾病早期小鼠肝组织中肝细胞内YAP的表达量明显增多且多位于细胞核。同时，这两种饮食诱导NASH早期小鼠肝组织中YAP 及其下游靶基因（Ctgf、Cyr6 和Acta2）的mRNA水平和YAP蛋白表达量显著增加。因此，这些结果提示YAP活性在MCD和TAA饮食诱导NASH疾病早期肝组织中均显著增加。

DR表现为表达胆管细胞标志物（如K19和Sox9等）的细胞从汇管区扩展到肝小叶中。DR不仅常见于胆道疾病，也存在于包括NAFLD、肝细胞肝癌在内的各种肝脏疾病中。在NASH患者中，DR程度与NAS评分、纤维化阶段和门静脉炎症程度密切相关，提示DR与NASH的疾病进展之间存在相关性。此外，研究证实YAP活性的增加能够调控各类胆道疾病中DR的发生，如：在原发性硬化性胆管炎和原发性胆汁性肝硬化患者的肝脏中发现YAP在DR细胞中表达；并且肝脏特异性YAP基因的敲除可显著降低胆管结扎所致的胆汁淤积小鼠肝脏中的DR。此外，有研究也发现肝细胞YAP基因特异性敲除可导致3，5-二乙氧基羰基-1，4-二氢可乐定（DDC）诱导的胆汁淤积性肝损伤小鼠肝组织中的DR显著减少。这表明YAP活性是DR发生所必需的。然而在NASH早期病理生理条件下YAP激活与DR发生的关系目前尚不明确。

本研究采用免疫组化检测了DR相关的分子标志物K19和Sox9的表达，发现MCD和TAA小鼠肝组织YAP活性增加的初始时间（MCD组1 周；TAA组3 d）早于DR发生的初始时间（MCD组4周；TAA组4周）。因此，我们推测YAP的激活可能是DR发生的关键。此外，对K19/Sox9和YAP免疫染色的时空分析表明，在MCD小鼠中，4 周时YAP阳性胆管样细胞和DR细胞开始出现在汇管区，随后在8、12周时二者均扩散到中央静脉区域。在TAA小鼠中，4周时YAP阳性胆管样细胞和DR细胞开始出现在中央静脉区，随后在6、12周时二者向中央静脉周围的肝小叶延伸。因此，我们发现在MCD以及TAA饮食诱导的NASH疾病进展过程中，YAP阳性胆管样细胞和DR细胞几乎同时出现，并且分布区域高度重合。与我们的结果相似，有研究在四氯化碳诱导的肝损伤小鼠模型中观察到DR细胞以及YAP阳性细胞均分布在汇管区周围的肝小叶中。有研究发现在NASH患者以及小鼠模型中，当DR由汇管区扩散到周围的肝小叶中时，YAP阳性RDC也出现在肝小叶中，并且YAP阳性RDC的数量与K19阳性细胞的数量密切相关。提示在NASH疾病进展过程中YAP的活性变化特征及其分布与DR发生分布位置具有时空相关关系。

DR的细胞起源一直备受争议。胆管细胞的增殖、肝祖细胞的激活和增殖以及肝细胞的转分化均可为DR发生提供细胞来源。据报道，YAP通路参与调节DR细胞命运。本研究发现YAP激活与DR具有时空相关性，这让我们思考YAP如何控制DR。在MCD饮食诱导的NASH早期，2周时YAP主要在肝细胞核中表达，4周时YAP阳性肝细胞开始逐渐减少，YAP阳性胆管样细胞首先出现在DR发生的初始位置，即汇管区周围；在NASH进展期（8～12周），YAP阳性肝细胞数量继续减少，而YAP阳性胆管样细胞数量进一步增加，并分布在中央静脉周围的肝小叶中，与DR细胞的分布一致。在TAA饮食诱导的NASH早期，2周时YAP主要在肝细胞核中表达；在NASH进展期（4～12周），4周时YAP阳性肝细胞开始逐渐减少，YAP阳性胆管样细胞首先出现在DR发生的初始位置，即中央静脉区域，6、12周时YAP阳性肝细胞数量继续减少，而YAP阳性胆管样细胞数量进一步增加，并分布在中央静脉周围的肝小叶中，与DR细胞的分布一致。提示在MCD以及TAA小鼠中，4 周时肝细胞中的YAP激活可能会诱导肝细胞转分化胆管细胞并参与DR的发生发展。

与我们的结果相似，近年来肝细胞转分化被认为是DR的重要细胞来源。Nf2（YAP上游负性调控因子）肝细胞特异性敲除小鼠的谱系追踪显示，肝细胞内的YAP激活可诱导肝细胞转分化为YAP阳性胆管细胞。在胆汁淤积性小鼠模型中YAP活性持续激活能够诱导肝细胞转分化为胆管样细胞，参与DR发生。此外，有研究发现在MCD饮食诱导的NASH小鼠模型中Notch通路的激活可介导肝细胞向胆管样细胞转化，促进DR发生。而Notch信号通路可作为YAP的下游效应器调控肝细胞转分化为胆管样细胞。因此，我们推测在MCD和TAA饮食诱导的NASH小鼠模型中，YAP在肝上皮细胞的活性改变特征及其分布与DR发生分布的这种时空关系可能为YAP激活介导肝细胞转分化为胆管样细胞并参与DR发生提供依据。

综上所述，本研究发现在NASH疾病早期肝细胞内YAP激活并早于DR发生；另外YAP在肝上皮细胞活性改变特点及其分布与DR发生分布具有时空相关关系，同时肝细胞内YAP的激活可能诱导肝细胞转分化为胆管样细胞，参与DR发生。但本研究仅在动物模型中研究NASH疾病早期YAP活性变化特征及其与DR的时空关系，还需结合体外实验确定肝细胞内YAP和DR表型分子的表达与分布情况，进一步探究这种时空关系演变的分子机制。