垫状卷柏中化学成分的分离及其抑制肿瘤细胞增殖活性

蔡 蕊，于远洋，谢 宁，徐 强，万慧慧，王世盛,4*

1大连理工大学分析测试中心，大连 116024；2大连市检验检测认证技术服务中心，大连 116081；3大连理工大学化工学院，大连 116024；4大连理工大学宁波研究院，宁波 315016

垫状卷柏Selaginellapulvinata(Hook. & Grev.) Maxim．为卷柏科卷柏属多年生草本植物，又名万年青、长生草、九死还魂草等。卷柏属植物在中国约有50余种，广泛分布于广西、辽宁、云南、福建、浙江、山东、吉林、湖南、陕西，河北等地。《本草求真》记载其治有分生熟，生则微寒，力能破血通经，故治症瘕淋结等症；炙则辛温，能以止血，故治肠红脱肛等症[1,2]。现代药理研究表明，垫状卷柏具有清热解毒、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、免疫调节、治疗心血管疾病等作用[3,4]。垫状卷柏主要成分有双黄酮类、黄酮类、炔酚类、生物碱类、有机酸类等[5,6]，其中双黄酮和炔酚类化合物是垫状卷柏主要的活性成分，而且selaginellin类化合物是目前仅在垫状卷柏属植物中发现的新型炔酚骨架类化合物。因此，对垫状卷柏中双黄酮类和炔酚类化合物进行纯化，对其进行深入药理作用机制研究具有重要的意义。

由于selaginellin类及双黄酮类化合物结构相近，用常规的分离手段难以分离[7,8]。因此利用质谱引导的自动纯化分离技术，通过质谱对selaginellin类及双黄酮类化合物的分子及碎片的分子量进行检出，然后将相应的化合物进行在线液相制备，同时结合减压、常压柱层析等手段，从垫状卷柏95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分中，对双黄酮和炔酚类化合物进行选择性分离，得到四个双黄酮类化合物和七个selaginellin类化合物，通过化学和波谱数据确定了它们的结构，并评价了这些化合物对人非小细胞肺癌细胞(NSCLC)H322的体外增殖抑制活性。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters自动分离纯化系统(2767样品管理器，2545二元梯度泵，2489紫外检测器，515补偿泵，系统流路管理器，SQD2质谱，MassLynx 和 FractionLynx 操作系统)；HPLC色谱柱：Unitary C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；制备液相色谱柱：Unitary C18(250 mm × 4.6 mm，10 μm)。EYELA N-3010、N-1000旋转蒸发仪(东京理化器械株式会社)；Milli-Q Direct16纯水/超纯水的一体化系统；Bruker Avance 400 MHz核磁共振仪；Agilent 1200型液相色谱仪。

薄层层析硅胶及柱层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)；HPLC所用水为超纯水，甲醇为色谱甲醇(天津市光复精细化工研究所)，其余试剂均为分析纯(西陇化工股份有限公司)；垫状卷柏药材2014

图1 组分Ⅰ的制备液相色谱图Fig.1 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.I注：A、C：优化前、后LC-UV图；B、D：优化前、后LC-MS图，下同。Note:A and C:LC-UV chromatograms before and after optimization;B and D:LC-MS chromatograms before and after optimization,the same below.

年3月购自安徽省亳州市龙辉药业销售有限公司，经大连药检所鉴定为垫状卷柏的干燥全草，样本存放于大连理工大学化工学院药学系。

1.2 提取与分离

干燥的垫状卷柏粉末1 kg用95%乙醇5 000 mL回流提取2 h，提取2次，乙醇提取液浓缩干燥后得到浸膏69 g。浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，并分别浓缩，得到乙酸乙酯萃取层浸膏21 g。取乙酸乙酯部分16 g，经减压硅胶柱层析分离，二氯甲烷/甲醇梯度洗脱得到化合物1(89 mg)、化合物2(6 mg)及组分Ⅰ(90 mg)、组分Ⅱ(592 mg)、组分Ⅲ(417 mg)。

组分Ⅰ、组分Ⅱ和组分Ⅲ分别用Waters自动分离纯化系统进一步分离。样品分析与制备所用流动相均为甲醇-水体系。自动纯化系统色谱、质谱条件：流速为1 mL/min，柱温为23 ℃，分流比为1/1 000，补偿液为质谱级甲醇，补偿液流速1 mL/min，以ESI源为离子化源进行负模式检测，毛细管电压：3.0 kV，锥孔电压：30 V，离子源温度：150 ℃，脱溶剂气温度：500 ℃，锥孔气体流速：50 L/h，脱溶剂气流速：1 000 L/h。

1.2.1 组分Ⅰ的分离纯化

组分Ⅰ(54 mg)用甲醇溶解后，进行制备LC-MS分析，流动相为80%甲醇等度洗脱15 min，检测波长为365 nm，ESI(-)模式下在保留时间6.98 min的色谱峰中，获得的质荷比m/z551信号(图1A、1B)。针对性优化制备色谱条件，选择制备流动相82%甲醇等度洗脱8 min(图1C、1D)，收集保留时间为5.28 min的组分，得到化合物3(8 mg)。

1.2.2 组分Ⅱ的分离纯化

组分Ⅱ(427 mg)甲醇溶解后进行LC-MS分析。流动相：65%～80%甲醇梯度洗脱15 min，检测波长为254 nm，在保留时间依次为4.47、5.92和11.38 min的色谱峰中，ESI(-)模式下依次获得的质荷比分别为m/z511、511、537信号(图2A、2B)。针对性优化制备色谱条件，制备液相色谱流动相：60%～80%甲醇梯度洗脱15 min(图2C、2D)，依次收集保留时间5.58、7.73、11.92 min的组分，得到化合物4(19 mg)、化合物5(17 mg)和化合物6(20 mg)。

图2 组分II的制备液相色谱图Fig.2 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.II

1.2.3 组分Ⅲ的分离纯化

组分Ⅲ(298 mg)，甲醇溶解后进行LC-MS分析。流动相：75%～85%甲醇梯度洗脱12 min，检测波长为254 nm，在保留时间为5.18、6.15、6.85、7.83 和9.48 min的色谱峰中，ESI(-)模式下获得的质荷比分别为m/z509、555、509、481、495信号(图3A、3B)。针对性优化制备色谱条件，用75%甲醇等度洗脱14 min(图3C、3D)，根据关注的MS信号，依次收集保留时间5.20、6.38、7.20、8.73和11.70 min的组分，分别得到化合物7(8 mg)、化合物8(6 mg)、化合物9(8 mg)、化合物10(17 mg)、化合物11(6 mg)。

图3 组分III的制备液相色谱图Fig.3 Chromatograms of preparative-scale separation of Fr.III

1.3 体外肿瘤细胞增殖抑制活性测试

化合物1～11分别配成终浓度为100 μmol/L受试样品母液(DMSO)，-4 ℃保存。采用MTT方法对上述化合物进行体外肿瘤细胞增殖抑制活性测试。取处于对数生长期人非小细胞肺癌细胞H322，接种于96孔培养板中，每孔8 000个细胞，体积为100 μL。37 ℃孵育，培养24 h，显微镜观察，细胞贴壁生长，状态正常。取终浓度为100 μmol/L的受试样品母液，用含小牛血清的DMEM培养液分别稀释，浓度梯度为100、80、60、40、20 μmol/L。同时设置空白组(含培养液、无细胞)和对照组(培养细胞不加药)，重复三次，采用MTT方法进行活性测试[9]。抑制率计算公式如下：

细胞生长抑制率=

[1-(OD实验-OD空白)/(OD对照-OD空白)]×100%

1.4 数据统计分析

统计分析采用SPSS 13.0方法，用t检验分析不同组间差异，P<0.05则视为差异显著，用SPSS 13.0进行IC50的计算。

2 结果与讨论

2.1 样品分析纯化

制备高效液相色谱与质谱联用技术分离效率高，但是天然产物成分复杂，直接用乙醇提取物分离制备化合物单体较难实现。垫状卷柏中的炔酚类化合物含量较低，且结构差异很小，常规色谱方法分离效率极低。所以首先用石油醚萃取乙醇提取物，除去其中的脂溶性色素等杂质，然后用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯部分经LC-MS分析，主要成分的分子量为512、510、538、556、482、496、552。其中分子量为538的化合物，推测分子式是C30H18O10，经查阅文献与穗花杉双黄酮的分子式相同。在此基础上，分子量552的化合物，推测为分子量是538的双黄酮类化合物中一个羟基被甲氧基取代而成。分子量为512的化合物，分子式为C34H24O5，与已报道的炔酚类化合物selaginellin分子式相同。在此基础上，推测分子量为510的化合物，应该是此类结构中脱去-2H，增加一个不饱和度的结构；分子量为556的化合物是在510的基础上，结构中原子数增加了C2H6O；分子量为482的化合物是在510的基础上，分子量减少28，推测为脱去C2H4或CO；分子量为496的化合物是在510的基础上，结构中原子数减少了CH2形成的；故确定乙酸乙酯部分主要含有双黄酮和炔酚类化合物。针对LC-MS分析发现的这两类结构的组分，通过减压硅胶柱层析进行分段，并采用质谱引导的制备液相色谱对组分I～III进行精细分离，快速高效得到双黄酮及炔酚类化合物1～11。

2.2 化合物结构鉴定

分离得到的化合物1～11，均通过HPLC确定纯度，化合物1～11的纯度分别为：98.0%、87.6%、89.2%、99.6%、99.7%、99.2%、93.6%、68.2%、92.6%、98.4%、98.7%。经MS及NMR数据分析，鉴定了11个化合物的结构。

化合物1土黄色固体；ESI-MS：m/z537[M-H]-，分子式为C30H18O10。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.02(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′/6′)，7.98(2H，d，J=8.8 Hz，H-2‴/6‴)，7.04(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′/5′)，6.95(2H，d，J=8.8 Hz，H-3‴/5‴)，6.87(2H，s，H-3/3″)，6.74(1H，s，H-8″)，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：164.2(C-2)，103.8(C-3)，181.8(C-4)，160.6(C-5)，98.9(C-6)，163.1(C-7)，94.6(C-8)，157.1(C-9)，103.9(C-10)，124.2(C-1′)，128.3(C-2′/6′)，115.3(C-3′/5′)，161.3(C-4′)，164.2(C-2″)，102.6(C-3″)，182.1(C-4″)，153.1(C-5″)，124.7(C-6″)，157.4(C-7″)，94.0(C-8″)，153.7(C-9″)，104.2(C-10″)，121.1(C-1‴)，128.6(C-2‴/6‴)，116.0(C-3‴/5‴)，161.4(C-4‴)。经与文献[10]对照，鉴定化合物1为扁柏双黄酮(结构见图4)。

化合物2土黄色无定型粉末；ESI-MS：m/z551[M-H]-，分子式为C31H20O10。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.02(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′/6′)，8.01(2H，d，J=8.8 Hz，H-2‴/6‴)，7.13(1H，s，H-8″)，7.04(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′/5′)，6.96(2H，d，J=8.8 Hz，H-3‴/5‴)，6.94(1H，s，H-3)，6.86(1H，s，H-3″)，6.49(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，3.89(3H，s，7″-OCH3)。经与文献[11]对照，鉴定化合物2为异柳杉双黄酮。

化合物3黄色无定型粉末；ESI-MS：m/z551[M-H]-，分子式为C31H20O10。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：8.08(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，8.03(1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′)，7.65(2H，d，J=8.8 Hz，H-2‴/6‴)，7.24(1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.83(2H，d，J=8.8 Hz，H-3‴/5‴)，6.71(1H，s，H-3)，6.67(1H，s，H-3″)，6.60(1H，s，H-6″)，6.52(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.25(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，3.92(3H，s，7″-OCH3)。经与文献[12]对照，鉴定化合物3为苏铁双黄酮。

化合物4黄色粉末；ESI-MS：m/z537[M-H]-，分子式为C30H18O10。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：8.13(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，8.03(1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，7.65(2H，d，J=8.8 Hz，H-2‴/6‴)，7.25(1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.83(2H，d，J=8.8 Hz，H-3‴/5‴)，6.73(1H，s，H-3)，6.66(1H，s，H-3″)，6.45(1H，s，H-6″)，6.52(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.24(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：163.4(C-2)，104.4(C-3)，183.5(C-4)，160.3(C-5)，99.8(C-6)，99.8(C-8)，165.1(C-7)，158.9(C-9)，104.4(C-10)，123.4(C-1′)，132.7(C-2′)，123.5(C-3′)，161.8(C-4′)，117.6(C-5′)，128.9(C-6′)，164.9(C-2″)，103.8(C-3″)，183.1(C-4″)，94.8(C-6″)，158.9(C-5″)，162.6(C-7″)，105.4(C-8″)，156.2(C-9″)，105.6(C-10″)，120.9(C-1‴)，129.2(C-2‴/6‴)，116.8(C-3‴/5‴)，162.8(C-4‴)。经与文献[13]对照，鉴定化合物4为穗花杉双黄酮。

化合物5紫红色粉末；ESI-MS：m/z511[M-H]-，分子式为C34H24O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.36(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.14(2H，d，J=8.6 Hz，H-3/5)，7.14(2H，d，J=8.6 Hz，H-8/12)，7.08(2H，d，J=8.4 Hz，H-28/32)，6.86(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.74(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)，5.00(2H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：173.5(C-1)，122.2(C-2/6)，137.2(C-3/5)，131.3(C-4)，160.4(C-7)，137.2(C-8/12)，122.2(C-9/11)，173.5(C-10)，131.3(C-13)，122.5(C-14)，143.4(C-15)，127.8(C-16)，130.5(C-17)，142.1(C-18)，141.8(C-19)，130.7(C-20/24)，115.5(C-21/23)，157.5(C-22)，132.5(C-25)，84.7(C-26)，99.8(C-27)，133.9(C-28/32)，116.4(C-29/31)，159.0(C-30)，114.3(C-33)，63.0(C-34)。经与文献[14]对照，鉴定化合物5为selaginellin。

化合物6红色粉末；ESI-MS：m/z511[M-H]-，分子式为C34H24O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.75(1H，d，J=7.8 Hz，H-17)，7.67(1H，d，J=8.2 Hz，H-24)，7.59(1H，d，J=7.8 Hz，H-16)，7.16(2H，d，J=8.7 Hz，H-3/5)，7.16(2H，d，J=8.7 Hz，H-8/12)，6.99(2H，d，J=8.6 Hz，H-28/32)，6.84(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-23)，6.81(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.80(1H，d，J=2.0 Hz，H-21)，6.67(2H，d，J=8.7 Hz，H-2/6)，6.67(2H，d，J=8.7 Hz，H-9/11)，4.83(2H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：156.8(C-1/10)，115.1(C-2/6)，131.0(C-3/5)，134.7(C-4/13)，65.7(C-7)，131.0(C-8/12)，115.1(C-9/11)，119.6(C-14)，142.8(C-15)，126.7(C-16)，119.4(C-17)，140.6(C-18)，152.8(C-19)，157.2(C-20)，113.3(C-21)，158.7(C-22)，115.5(C-23)，121.4(C-24)，131.7(C-25)，85.2(C-26)，102.0(C-27)，133.4(C-28/32)，116.4(C-29/31)，158.7(C-30)，115.2(C-33)，63.1(C-34)。经与文献[15]对照，鉴定化合物6为selaginpulvilin A。

化合物7黄色粉末；ESI-MS：m/z509[M-H]-，分子式为C34H22O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.92(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.82(1H，d，J=8.3 Hz，H-24)，7.18(2H，d，J=8.8 Hz，H-3/5)，7.18(2H，d，J=8.8 Hz，H-8/12)，7.03(2H，d，J=8.7 Hz，H-28/32)，6.91(1H，dd，J=8.3，2.2 Hz，H-23)，6.85(1H，d，J=2.2 Hz，H-21)，6.82(2H，d，J=8.7 Hz，H-29/31)，6.70(2H，d，J=8.8 Hz，H-2/6)，6.70(2H，d，J=8.8 Hz，H-9/11)，10.54(1H，s，H-34)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.1(C-1/10)，115.3(C-2/6)，131.0(C-3/5)，133.8(C-4/13)，65.8(C-7)，131.0(C-8/12)，115.3(C-9/11)，125.3(C-14)，134.8(C-15)，128.1(C-16)，119.6(C-17)，147.7(C-18)，153.8(C-19)，158.9(C-20)，113.3(C-21)，160.3(C-22)，116.2(C-23)，123.1(C-24)，130.4(C-25)，83.5(C-26)，104.6(C-27)，133.8(C-28/32)，116.5(C-29/31)，159.4(C-30)，114.2(C-33)，191.3(C-34)。经与文献[15]对照，鉴定化合物7为selaginpulvilin B。

化合物8红色粉末；ESI-MS：m/z509[M-H]-，分子式为C34H20O5。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：10.70(1H，s，H-34)，8.02(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.50(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.17(2H，m，H-3/5)，7.17(2H，m，H-8/12)，7.17(2H，m，H-28/32)，6.94(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.76(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.68(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.51(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.51(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)。经与文献[14]对照，鉴定化合物8为selaginellin O。

化合物9红色粉末；ESI-MS：m/z555[M-H]-，分子式为C36H28O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.36(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.12(2H，m，H-3/5)，7.12(2H，m，H-8/12)，7.12(2H，m，H-28/32)，6.87(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.75(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.65(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)，5.86(1H，s，H-34)，3.48(6H，s，OCH3)。经与文献[16]对照，鉴定化合物9为selaginellin E。

化合物10紫红色粉末；ESI-MS：m/z481[M-H]-，分子式为C33H22O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.64(1H，d，J=8.0 Hz，H-15)，7.54(1H，t，J=7.6 Hz，H-16)，7.34(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.13(2H，d，J=8.6 Hz，H-3/5)，7.13(2H，d，J=8.6 Hz，H-8/12)，7.06(2H，d，J=8.4 Hz，H-28/32)，6.86(2H，d，J=8.4 Hz，H-20/24)，6.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-29/31)，6.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-2/6)，6.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-9/11)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.7(C-1/10)，122.3(C-2/6)，137.1(C-3/5)，131.1(C-4)，132.5(C-7)，137.1(C-8/12)，122.3(C-9/11)，131.1(C-13)，125.6(C-14)，131.1(C-15)，130.0(C-16)，130.8(C-17)，144.0(C-18)，142.0(C-19)，130.7(C-20/24)，115.6(C-21/23)，159.0(C-22)，115.6(C-25)，87.4(C-26)，94.5(C-27)，134.0(C-28/32)，116.3(C-29/31)，159.7(C-30)，114.3(C-33)。经与文献[17]对照，鉴定化合物10为selaginellin A。

化合物11红色粉末；ESI-MS：m/z495[M-H]-，分子式为C34H24O4。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.45(1H，d，J=8.0 Hz，H-16)，7.23(1H，d，J=8.0 Hz，H-17)，7.13(2H，d，J=9.2 Hz，H-3/5)，7.13(2H，d，J=9.2 Hz，H-8/12)，7.09(2H，d，J=8.6 Hz，H-28/32)，6.85(2H，d，J=8.6 Hz，H-20/24)，6.73(2H，d，J=8.6 Hz，H-29/31)，6.63(2H，d，J=8.4 Hz，H-21/23)，6.50(2H，d，J=9.2 Hz，H-2/6)，6.50(2H，d，J=9.2 Hz，H-9/11)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：157.5(C-1/10)，122.3(C-2/6)，137.0(C-3/5)，131.2(C-4)，132.6(C-7)，137.0(C-8/12)，122.3(C-9/11)，131.2(C-13)，125.1(C-14)，139.3(C-15)，130.4(C-16)，131.0(C-17)，142.1(C-18)，141.2(C-19)，130.7(C-20/24)，115.5(C-21/23)，158.9(C-22)，115.5(C-25)，87.4(C-26)，94.5(C-27)，133.9(C-28/32)，116.3(C-29/31)，159.9(C-30)，114.6(C-33)，21.2(C-34)。经与文献[17]对照，鉴定化合物11为selaginellin B。

图4 化合物1～11的化学结构Fig.4 Structures of compound 1～11

2.3 抑制肿瘤细胞增殖活性

采用MTT法测定化合物1～11体外抑制肿瘤细胞增殖活性，结果如表1所示。

表1 化合物1～11对人非小细胞肺癌细胞H322细胞抑制作用结果

IC50结果显示，化合物4和7对人非小细胞肺癌细胞H322细胞抑制活性较低，其余化合物均有较好的抑制活性，尤其是化合物3(苏铁双黄酮)和10(selaginellin A)对人非小细胞肺癌细胞H322细胞抑制活性最强，显示此两类结构的化合物具有潜在的抗肿瘤应用前景。据文献[18]报道，炔酚类化合物(selaginellin A)具有抑制细胞增殖活性，其中对U251、Hela以及MCF-7细胞系的IC50值分别约为56、47、102 μmol/L，对比发现，炔酚类化合物对人非小细胞肺癌细胞H322细胞抑制作用更强。

3 结论

利用质谱引导的PHPLC-MS分离技术，结合减压、常压柱层析等手段，对垫状卷柏中的双黄酮类和炔酚类化合物进行了选择性制备分离，得到了四个双黄酮类化合物(1～4)和七个炔酚类化合物(5～11)，该方法可快速、高效地得到高纯度的双黄酮类和炔酚类化合物。抑制肿瘤细胞增殖活性评价结果显示，这些天然化合物对人非小细胞肺癌细胞H322细胞均有较好的增殖抑制活性，其中化合物3和10的IC50值分别为16.70 μmol/L和9.54 μmol/L。双黄酮及炔酚类化合物在抗肿瘤及抑制COX-2等方面都显示出较强的活性[19]，炔酚类化合物显示出对氟康唑、酮康唑的抗念珠菌活性的体外增效作用[20]。因此,本文制备得到的化合物具备进一步研究及结构改造的价值。尤其是炔酚类结构目前仅在卷柏属植物中发现，建立的快速制备方法，也为垫状卷柏中双黄酮及炔酚类化合物的快速及规模化分离纯化提供了有效的手段。