TREM-1与CIRP在胃癌组织中的表达及其对胃癌预后的评估价值

蔡喜中,苟 康,李丹阳

陕西省咸阳市中心医院普外二科,陕西咸阳 712000

胃癌是一种全球常见、高发的消化道恶性肿瘤,据统计每年全球新增病例超过100万例,而我国是胃癌发病的重灾区[1]。近年来,随着诊疗技术不断革新,我国胃癌的早期诊断率明显提高,但部分中晚期患者预后仍不尽人意[2]。因此,寻找一种可准确评估胃癌患者预后的生物学标志物至关重要。髓样细胞触发受体-1(TREM-1)是免疫球蛋白超家族成员,被认为是炎症疾病的重要标志物,对急性胰腺炎、脓毒症等疾病具有一定的预后评估价值[3-4]。近年来有研究发现,TREM-1与肿瘤相关性炎症反应有关[5]。冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)又称为异源核糖核蛋白A18,可参与机体的氧化应激反应、细胞增殖、肿瘤进展等过程。有研究发现,CIRP表达上调与肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤的预后不良有关[6-7],但是目前涉及到TREM-1、CIRP与胃癌的研究尚少。因此,本研究主要探讨TREM-1与CIRP在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者预后的评估价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年9月至2019年9月本院收治的108例胃癌患者作为研究对象,男63例,女45例;年龄18～75岁,平均(59.73±5.46)岁。收集胃癌患者的癌组织标本作为胃癌组(癌病变区域的中心,0.5 g),对应的癌旁组织标本作为癌旁组(距肿瘤边缘>3 cm)。纳入标准:(1)经病理组织活检确诊为胃癌;(2)年龄≥18岁。排除标准:(1)术前有放化疗史者;(2)既往有胃部手术史者;(3)肺、心、肝等组织器官功能异常者;(4)认知异常或精神异常者;(5)合并其他肿瘤者;(6)依从性差及拒绝参与本研究者。所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会审核批准。

1.2方法

1.2.1主要试剂与仪器 兔抗人TREM-1多克隆抗体(上海科敏生物科技有限公司),兔抗人CIRP多克隆抗体、羊抗兔二抗IgG(艾美捷科技有限公司),免疫组织化学试剂盒、DAB显色盒(上海尚宝生物科技有限公司),显微镜(上海永科光学仪器有限公司)。

1.2.2TREM-1、CIRP检测 采用免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中TREM-1、CIRP表达情况,操作流程如下:对胃癌组织及癌旁组织标本进行常规固定(4%多聚甲醛)、石蜡包埋、切片(4 μm)、脱蜡(二甲苯)、脱水(不同梯度的乙醇)处理后,在高压、高温环境内加入柠檬酸钠溶液进行抗原修复,恢复正常温度后,加入磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次(每次5 min),随后加入5%山羊血清抗体进行封闭,滴加兔抗人TREM-1多克隆抗体(稀释比例为1∶500)、兔抗人CIRP多克隆抗体(稀释比例为1∶150),4 ℃冰箱内孵育过夜,加入PBS冲洗3次,加入羊抗兔二抗IgG(稀释比例为1∶1 000),37 ℃环境内孵育30 min,PBS冲洗3次,采用DAB染色试剂盒进行显色,随后进行苏木精复染、乙醇脱水、二甲苯透明及中性树胶封片,显微镜下观察结果。结果判定[8]:显微镜下观察到细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。阳性细胞染色强度分别为无颜色(计0分)、浅黄色或黄色(计1分)、棕黄色(计2分)、棕褐色(计3分);阳性细胞百分比评分分别为<5%(计0分)、5%～25%(计1分)、>25%～50%(计2分)、>50%～75%(计3分),>75%(计4分)。染色指数(SI)=阳性细胞染色强度×阳性细胞百分比。根据SI得分情况分为阳性表达(SI>3分)和阴性表达(SI≤3)。

1.2.3预后 采用电话、门诊复查等方式对出院胃癌患者进行连续3年随访,记录患者的生存状况,随访截止时间为2022年9月。第1年每2个月随访1次,第2、3年每4个月随访1次,随访终止为患者死亡或随访截止。

2 结 果

2.1两组TREM-1、CIRP表达情况比较 胃癌组TREM-1、CIRP阳性表达率均高于癌旁组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1、图2。

注:A为胃癌组;B为癌旁组。

注:A为胃癌组;B为癌旁组。

表1 两组TREM-1、CIRP表达情况比较[n(%)]

2.2不同临床病理特征的胃癌患者TREM-1、CIRP表达情况比较 不同性别、年龄、肿瘤位置、Lauren分型、浸润深度的胃癌患者TREM-1、CIRP表达情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05);低分化、肿瘤最大径>5 cm、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者TREM-1、CIRP阳性表达率均高于中/高分化、肿瘤最大径≤5 cm、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的胃癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床病理特征的胃癌患者TREM-1、CIRP表达情况比较[n(%)]

2.3不同临床病理特征的胃癌患者3年生存情况比较 108例胃癌患者连续随访3年后,共有56例患者存活,存活率为51.85%。低分化、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、TREM-1阳性表达、CIRP阳性表达胃癌患者3年生存率均低于中/高分化、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、TREM-1阴性表达、CIRP阴性表达的胃癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同临床病理特征的胃癌患者3年生存情况比较

2.4胃癌患者预后的多因素Cox回归分析 赋值:临床分期(Ⅰ～Ⅱ期=0、Ⅲ～Ⅳ期=1)、淋巴结转移(无=0、有=1)、TREM-1(阴性=0、阳性=1)、CIRP(阴性=0、阳性=1)。将胃癌患者的预后作为因变量,将表3中差异有统计学意义的指标作为自变量进行多因素Cox回归分析,结果显示,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、TREM-1阳性表达、CIRP阳性表达是胃癌患者生存的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 胃癌患者预后的多因素Cox回归分析

3 讨 论

胃癌是威胁我国居民健康的常见恶性肿瘤之一,其发病率和病死率分别位于恶性肿瘤的第2、3位[9]。早期胃癌无特异性临床症状,容易与慢性胃部疾病症状混淆,故多数患者确诊时病情较为严重,已处于中晚期,治疗效果很难达到预期目标,导致预后生存期较短[10]。因此,早期评估胃癌患者预后情况可为临床治疗提供指导。

TREM-1属于免疫球蛋白超家族成员,其基因位于染色体6p21-1,广泛表达于单核细胞、巨噬细胞等表面,作为炎症反应激发的相关受体,可使细胞外信号调节激酶(ERK)、磷脂酰肌醇-3激酶等磷酸化,激活相关信号传导通路,促使白细胞介素-2、肿瘤坏死因子-α等促炎因子水平上调,同时可与Toll样受体发挥协同作用,诱发炎症级联反应[11-12]。潘薇等[13]探讨了直肠癌组织的TREM-1表达情况,发现TREM-1在直肠癌组织中呈高表达,且与预后密切相关。李皖云等[14]研究发现,TREM-1可参与癌细胞的增殖、侵袭及凋亡等过程,与肝癌的发生和发展有关。有研究发现,TREM-1可作为评估肺癌手术效果及预后的标志物,为临床提供新的治疗靶点[15]。本研究结果显示,胃癌组TREM-1阳性表达率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05);不同分化程度、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移患者的TREM-1表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。提示TREM-1在胃癌患者中呈高表达,且与病情进展有关。究其原因,TREM-1是重要的炎症反应激发受体,能够募集单核细胞、巨噬细胞,促使肿瘤微环境中炎症因子水平上调,加速肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭过程,并且可抑制肿瘤细胞凋亡,进而参与胃癌的发生和发展。本研究结果显示,TREM-1阳性表达患者3年生存率低于TREM-1阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。提示TREM-1高表达与胃癌患者的预后不良有关,可作为评估胃癌预后的标志物。

CIRP是冷休克蛋白家族成员之一,最初被发现于小鼠睾丸组织,在人体肝、胃、肺等多个组织器官中表达,可与Toll样受体4结合后激活核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,增加炎症介质释放[16]。张琳梅等[17]研究发现,CIRP在口腔鳞状细胞癌组织中呈高表达,且与较差的生存率有关。杨柳等[18]研究发现,肾癌组织中CIRP表达下调,可促进肾癌细胞的增殖与迁移。LIAO等[19]研究发现,CIRP可通过CTNNB1激活Wnt/β-catenin信号,促进非小细胞肺癌的进展。由此可知,CIRP具有抑癌和促癌作用,可参与肿瘤的发生和发展。本研究结果显示,胃癌组CIRP阳性表达率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05);CIRP阳性表达与分化程度、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。提示CIRP高表达与胃癌的发生和发展有关。究其原因,CIRP作为内源性促炎症介质,其过表达可使机体炎症因子水平上调,并通过Toll样受体介导的信号通路,活化NF-κB,进而促进肿瘤新生血管形成,抑制肿瘤细胞凋亡;同时CIRP可通过调控ERK、p38信号通路,促进细胞上皮间质转化,调节肿瘤细胞的增殖与侵袭能力[20]。因此,CIRP高表达与胃癌进展有关,下调CIRP表达可抑制胃癌细胞的增殖、分化、侵袭等过程。本研究结果显示,CIRP阳性表达患者3年生存率低于CIRP阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。由此提示CIRP高表达与胃癌患者的预后不良有关。本研究结果显示,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、TREM-1阳性表达、CIRP阳性表达是胃癌患者生存的危险因素(P<0.05)。由此提示TREM-1、CIRP过表达可增加胃癌死亡的风险,监测其表达情况可预测其预后。

综上所述,TREM-1、CIRP在胃癌患者中均呈高表达,且与临床病理特征及预后密切相关,可作为胃癌预后评估的生物学标志物,有望为胃癌提供新的治疗靶点。