卡洛芬注射液辅助治疗牛呼吸道疾病的临床疗效试验

瞿红颖,耿智霞,贾 兴,张 沛,任丽花,李卓伟*,刘 欣,杨国辉,吴聪明

(1．河北远征药业有限公司,石家庄 050041;2.河北省兽药技术创新中心,石家庄 050041;3.石家庄市兽药技术创新中心,石家庄050041;4．中国农业大学,北京 100000)

牛呼吸道疾病(BRD)是造成全世界养牛业经济损失的主要原因之一。引起BRD的病原菌主要有溶血曼氏杆菌、多杀巴氏杆菌和睡眠嗜组织菌等,临床上常使用抗菌药物治疗,包括β-内酰胺类、大环内酯类等。另外,由于BRD病牛常存在发热、疼痛、肺组织炎症反应,临床上还常使用抗炎药进行辅助治疗,可更加快速地控制病牛症状,消除炎症反应,提高治愈率[1-2]。

卡洛芬(carprofen)是2-芳基丙酸类非甾体抗炎药,是花生四烯酸级联酶环氧合酶COX-2的抑制剂,通过抑制前列腺素合成而发挥抗炎、镇痛、解热作用[3-4],其作用强于阿司匹林、保泰松、对乙酰氨基酚等,且具有吸收快、副作用小等特点,是高效的动物用抗炎药。目前卡洛芬注射液已在美国、加拿大和欧洲多个国家广泛用于辅助治疗牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,长期的临床应用表明在使用抗菌药的同时联合使用卡洛芬注射液,可以快速缓解病牛发热并显著降低肺组织炎症反应,效果显著。在我国,BRD也是一种常发病,鉴于卡洛芬的高效抗炎活性,本试验进行了卡洛芬注射液辅助治疗牛呼吸道疾病的临床疗效研究,为该药物制剂的兽医临床合理应用提供科学依据。

1 试验材料与方法

1.1 试验药物 受试药物:卡洛芬注射液,河北远征药业有限公司,规格100 mL:5 g,批号KLF020902;对照药物:卡洛芬注射液,硕腾公司,规格100 mL:5 g,批号M4613-09。

泰拉霉素注射液,法瑞瓦公司,规格50 mL:5 g,批号B575806。

1.2 试验动物及试验地点 BRD病牛,1～3月龄,共80头,从正在发生BRD的山东省青岛东盛泰奶牛良种繁育基地按试验要求标准筛选。试验期间(D0～D14)所有试验牛未发生伴随治疗用药情况。

1.3 试验设计 本试验依据《抗菌药物II、III期临床药效评价试验指导原则》[5]设计。将遴选出来的80头满足试验要求的BRD病牛按计算机生成的随机数字表分配到A、B、C、D、E组,每组16头,按表1给药。

表1 试验牛给药方案Tab 1 Administration protocol for experimental cows

1.4 临床检查

1.4.1 临床症状检查 试验期间,对试验牛进行临床检查,分别在D0、D1～D7日上下午、D14日测量体温,按BRD五项症状评分法系统[6]对试验牛的发热、咳嗽、鼻孔分泌物、眼分泌物、耳朵状况分别进行评分。各项评分标准如表2所示。

表2 BRD症状评分标准Tab 2 Symptoms scoring criteria of BRD

1.4.2 降钙素原(PCT)浓度检查 降钙素原(PCT)是诊断和监测细菌性疾病感染的一个重要参数。在BRD病牛血清中PCT的浓度会急剧升高,而在抗生素治愈牛的血清中则会下降至正常水平,与BRD疾病进程具有良好的符合性,是一个较好的诊断BRD的生物标志物[7]。采集各组试验牛在D0、D3、D7日的颈静脉血液样品,并使用商品化试剂盒测定血清PCT浓度,分析病牛的恢复程度。

1.5 有效性评估主要指标 A．体温恢复正常牛占比:记录各组在D1～D7各日上下午的体温恢复正常牛数,当试验牛的体温<39.5 ℃时视为体温正常,按下述公式计算各时间点每组的体温恢复正常牛占比并进行比较。体温恢复正常牛占比(%)=[D1～D7各日上下午体温恢复正常牛数/该观测时间点组内试验牛数]×100

B．体温恢复正常时间:记录D1～D7期间各组每头试验牛的体温恢复正常时间,即从给药开始至体温<39.5 ℃的时间间隔,统计各组试验牛体温恢复正常时间的均值与标准差(M±SD)以及50%和90%试验牛体温恢复正常所需时间并进行比较。

C．BRD症状解除牛占比:记录各组在D1～D7各日上下午的BRD症状解除(五项评分均为0)牛数,按下述公式计算各时间点每组的BRD症状解除牛占比并进行比较。BRD症状解除牛占比(%)=[D1～D7各日上下午BRD症状解除牛数/该观测时间点组内试验牛数]×100

D．BRD症状解除时间:记录D1～D7期间各组每头试验牛的BRD症状解除时间,即从给药开始至BRD五项症状评分均为0的时间间隔,统计各组试验牛BRD症状解除时间的均值与标准差(M±SD)以及50%和90%试验牛BRD症状解除时间并进行比较。

E．血清PCT浓度:记录各组试验牛在D0、D3、D7各日采集血清测得的PCT浓度,进行比较。

F．D7日治疗成功率:在D7日,如果某试验牛满足体温<39.5 ℃,且BRD五项症状评分和<4,则视为治疗成功;其他任何情况,均视为治疗失败。计算各组试验牛的D7治疗成功率进行比较:D7日治疗成功率(%)=(D7日治疗成功试验牛数/接受治疗试验牛数)×100

1.6 数据处理 数据统计分析使用SPSS软件,试验牛的体温、体温恢复正常时间、BRD五项症状评分、BRD症状解除时间、PCT浓度,分别以平均值±标准差(M±SD)表示,采用T检验进行统计分析;各组试验牛的体温恢复正常牛占比、BRD症状解除牛占比、治疗成功率等,分别以百分率(%)表示,采用卡方(χ2)检验进行统计分析。比较组内不同时间点和/或组间相同时间点上述指标的差异显著性,所有假设检验均在0.05显著性水平进行。

2 结果与分析

2.1 临床检查结果

2.1.1 体温检查结果 试验牛的体温统计表如表3所示,给药前(D0日),所有试验牛的体温均≥39.5 ℃,各组之间无显著差异(P>0.05)。给药后,多数试验牛的体温迅速下降至正常范围,仅少数试验牛(尤其是E组)的体温在短时内(D0～D1日)下降不明显,给药后D1日上午,5个组中只有E组试验牛的平均体温仍高于正常体温,其中B、C组试验牛的体温显著低于E组(P<0.05),A、D组试验牛的体温与E组无显著差异(P>0.05);D1日下午,5个组试验牛的体温均值都显著低于D0(P<0.05),回落到正常范围内。

表3 试验牛体温统计Tab 3 Body temperature statistics of test cows

体温恢复正常牛占比结果如表4所示,在D0日(给药前),各组试验牛的体温均异常,体温恢复正常牛占比均为0。在D1日上午,5组均有部分牛体温恢复正常,其中A、B、C、D组体温恢复正常牛占比显著高于E组(P<0.05),B、C组显著高于A、D组(P<0.05)。给药后随着时间延长,在D2日下午和D3日上午,各组绝大多数牛体温恢复正常,其中B、C、D组体温恢复正常牛占比显著高于A、E组(P<0.05),在D4日下午和D5日,A、B、C、D组全部未退出试验牛的体温恢复正常,占比显著高于E组(P<0.05)。

表4 体温恢复正常牛占比统计Tab 4 Statistics on the percentage of cows with normal body temperature

试验牛体温恢复正常时间统计如表5所示,A、B、C、D各组试验牛的体温恢复正常时间均显著快于E组(P<0.05)。B、C组试验牛的体温恢复时间要快于A组和D组,但差异不显著(P>0.05)。另外,A、B、C、D组50%试验牛体温恢复正常时间比E组快0.5日,90%试验牛体温恢复正常时间比E组快0.5日～2.0日。

表5 试验牛体温恢复正常时间统计Tab 5 Statistics on time to normalization of body temperature of test cows

2.1.2 BRD五项症状评分结果 如图6所示,给药前(D0日),所有试验牛均表现出典型的BRD症状,BRD五项症状评分和的范围为5～11,各组间评分均值无显著差异(P>0.05),D1日上午(用药后0.5日),5组试验牛的BRD症状均有明显改善,BRD五项症状评分和较D0日显著下降(P<0.05),各组之间比较无显著差异(P>0.05)。随着给药后时间的延长,各组症状评分和持续下降直至评分为0。

给药前(D0日),所有试验牛均表现出BRD症状,各组BRD症状解除牛占比均为0,D2日下午(用药后2.0日),B、C组的BRD症状解除牛占比达100%,显著高于A、D、E组(P<0.05),A、D、E组之间的BRD症状解除牛占比无显著差异(P>0.05);直至D5日,除E组仍有个别牛表现轻微的BRD症状外,其他未退出试验牛均保持健康状态,各组之间的BRD症状解除牛占比无显著差异(P>0.05),结果见表7 。

表7 BRD症状解除牛占比统计Tab 7 Statistics on the percentage of test cows with BRD symptoms relieved

试验牛BRD症状解除时间如表8所示,B、C、D组试验牛的BRD症状解除时间均显著快于E组(P<0.05)。B、C、D组试验牛的BRD症状解除时间要快于A组。此外,A、B、C、D组50%试验牛BRD症状解除时间比E组快0.5日,90%试验牛BRD症状解除时间比E组快0日～1.5日。

表8 试验牛BRD症状解除时间统计Tab 8 Statistics on the time to relief of BRD symptoms of test cows

结果表明,卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联用治疗BRD,可更加快速有效地控制病牛症状。与单独使用泰拉霉素注射液相比,联用低、中、高剂量的卡洛芬注射液或推荐剂量的硕腾公司的卡洛芬注射液,BRD病牛异常体温的恢复更快,发热、咳嗽、流鼻涕等症状的缓解及消除更迅速,疾病恢复期更短。其中,卡洛芬注射液中、高剂量的效果无明显差异(P>0.05),与使用推荐剂量原研卡洛芬注射液的效果相当(P>0.05),均优于低剂量的仿制卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.2 血清PCT浓度 试验牛血清PCT浓度如表9所示,用药后D3日,5个组试验牛的PCT值与D0日比较均显著下降(P<0.05),组间比较,虽然A组试验牛的PCT值高于B、C、D组,但4个组之间无显著差异(P>0.05),E组试验牛的PCT值则显著高于其他4个组(P<0.05);用药后D7日,5个组的PCT值均无显著差异(P>0.05)。

表9 试验牛血清PCT浓度统计Tab 9 Statistics on PCT concentration in serum of test cows

结果表明,卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联用可促进BRD病牛消除致病菌感染带来的炎症反应。与单独使用泰拉霉素注射液相比,联用低、中、高剂量的卡洛芬注射液或推荐剂量的硕腾卡洛芬注射液,可使BRD病牛异常升高的血清PCT浓度更快恢复至正常水平。其中,卡洛芬注射液中、高剂量的效果无明显差异(P>0.05),与使用推荐剂量硕腾卡洛芬注射液的效果相当(P>0.05),均优于低剂量的卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.3 试验牛的治疗成功率、后期复发率及死亡率 表10中数据结果显示,A、B组试验牛的D7日治疗成功率、D14日治疗成功率均为93.75%,C、D组试验牛的D7日治疗成功率、D14日治疗成功率均为100%,E组试验牛的D7日治疗成功率、D14日治疗成功率均为87.5%。其中,C、D组试验牛的D7日治疗成功率、D14日治疗成功率均优于A、B、E组试验牛,但组间无显著差异(P>0.05)。

表10 试验牛的治疗成功率、后期复发率及死亡率统计Tab 10 Statistics on treatment success rate, late recurrence rate and mortality rate of test cows

结果表明,卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联用治疗BRD,可小幅提高BRD病牛的治疗成功率。无论是泰拉霉素注射液单一治疗还是与卡洛芬注射液联用治疗,治疗成功牛在7日内未见病情反复。

2.4 试验牛退出情况说明 试验期间(D0～D14日),A组有1头、B组有1头、E组有2头试验牛退出试验,退出原因为BRD恶化(达到治疗失败判断标准),A、B、C、D、E组都未出现其他原因(如死亡、并发其他疾病、没有依从试验方案、出现严重不良反应等)导致退出的试验牛。

3 讨论与结论

卡洛芬为2-芳基丙酸类非甾体抗炎药,主要通过抑制花生四烯酸环氧酶,导致前列腺素等炎症介质的生成减少,从而发挥解热、镇痛、消炎作用。卡洛芬注射液于20世纪70年代由美国辉瑞公司研究开发,目前已在美国、加拿大和欧洲多个国家广泛应用,辅助治疗牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,临床效果显著,是一种高效的动物用抗炎药。

卡洛芬具有良好的抗炎效果,其抗炎作用较一些常用的抗炎药物要强。T.V. Balmer[8]等用抗菌剂和卡洛芬联合治疗了自然爆发的犊牛的呼吸道疾病,同时用氟尼辛作对比研究。试验结果表明,单次以1.4 mg/kg bw的平均剂量皮下注射卡洛芬,与3 d连续以2.0 mg/kg bw的平均剂量通过静脉注射氟尼辛葡甲胺的效果相同,证明了单剂量的卡洛芬与三剂量的氟尼辛葡甲胺作为犊牛急性呼吸道疾病的辅助用药有同样的疗效。

本试验研究了卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联合用于治疗牛的呼吸道疾病的临床效果,与单独用泰拉霉素治疗对比,结果卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联合用药的病牛异常体温恢复的更快,发热、咳嗽、流鼻涕等症状的缓解和消除更迅速,疾病恢复期更短,且联合用药可促进病牛消除致病菌感染带来的炎症反应,小幅提高病牛的治疗成功率。

卡洛芬不仅与泰拉霉素联合使用能起到良好的临床疗效,与其他的抗菌药联合使用,同样能明显改善临床症状,降低炎症反应。例如Elitok B[9]等在研究卡洛芬治疗牛呼吸道疾病方面的临床疗效时,使用了替米考星作为基础治疗。用药后,用卡洛芬-替米考星治疗的动物的体温和呼吸频率都有所下降,且明显低于单独用替米考星治疗的动物(P< 0.05),表明卡洛芬-替米考星治疗病牛的临床症状改善程度明显大于单独用替米考星,证明了卡洛芬辅助用药的临床效果。Lockwood P W[10]等研究了卡洛芬与头孢噻呋一起治疗自然发生的牛呼吸道疾病的临床疗效,同时用氟尼辛、酮洛芬做了对比研究。试验将入选病牛分为四组,且都接受了头孢噻呋(1.1 mg/kg,肌内注射)为期三天的治疗,其中三组还分别接受了单剂量的氟尼辛(2.2 mg/kg,静脉注射)、酮洛芬(3 mg/kg,静脉注射)、卡洛芬(1.4 mg/kg,皮下注射)的辅助治疗。结果表明,24 h内,用非甾体抗炎药联合治疗的三组的热射病的减轻程度明显高于单独用头孢噻呋治疗的组。证明了卡洛芬与不同抗菌药物联合使用,对于病症的改善速度和程度均明显优于单独的抗菌药物治疗,且卡洛芬的推荐用药剂量为1.4 mg/kg bw,与本研究的结果相同。

综上所述,卡洛芬与抗菌药物泰拉霉素、替米考星或头孢噻呋联用,均能有更好的治疗BRD的临床效果。根据本研究结果,卡洛芬注射液与泰拉霉素注射液联用治疗牛呼吸道疾病,治疗安全、有效,推荐卡洛芬注射液的使用剂量为:一次量,每1 kg体重,牛1.4 mg皮下注射。