PCOS患者血清miR-206表达及其与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系分析

戎小焕，胥世凡

（许昌市人民医院，1.内分泌代谢科；2.内骨外一科，河南 许昌 461000）

多囊卵巢综合征（PCOS）是影响育龄期女性生殖健康的常见疾病之一，主要由内分泌系统紊乱与代谢紊乱引发，导致患者出现月经不调、闭经甚至或不孕等［1］。下丘脑-垂体-性腺轴对生殖发挥着重要的调控作用，通过调节促性腺素释放激素、促卵泡激素（FSH）、促黄体生成素（LH）的分泌，影响卵泡发育、雌激素释放与排卵等，最终影响女性月经周期与生育，下丘脑-垂体-性腺轴内分泌功能失调是PCOS 发病的重要病理机制［2］。胰岛素抵抗是影响PCOS 发病的另一公认的生理病理特征，可促进PCOS 患者病情进展［3］。近年来，微小核糖核酸（miRNA）在临床多种疾病诊治中的作用逐渐被探索与发现，且已有研究［4-5］表明miRNA 与胰岛素抵抗、PCOS 发病存在密切关系。微小核糖核酸-206（miR-206）为miRNA 家族重要成员，有研究［6］表明，miR-206 可通过促进胰岛素受体的磷酸化而促进胰岛素信号传导，抑制葡萄糖生成；另有研究［7］报道，miR-206 可能通过调节卵巢颗粒细胞生存与凋亡而在PCOS 中起着重要作用。但关于PCOS 患者血清miR-206 表达与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系尚需进一步深入探索、揭示，鉴于此，本研究旨在通过探讨二者间的关系，以为临床治疗提供新思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取许昌市人民医院2020 年3 月至2022 年12 月收治的148 例PCOS 患者设为研究组，另同期选取年龄、体质量指数与之相匹配的133 例月经正常的健康体检未孕女性设为对照组。纳入标准：①研究组均符合相关指南［8］中PCOS 诊断标准，且为初诊患者；②对照组月经正常；③年龄20～40 岁；④受试者均知情同意。排除标准：①伴有垂体瘤、腺垂体功能减退、甲状腺/甲状旁腺疾病、库欣综合症、先天性肾上腺皮质增生、性腺发育不全、醛固酮增多症、高泌乳素血症、卵巢早衰等其他内分泌疾病；②伴有心肝肾等脏器严重疾病；③伴有肿瘤疾病；④伴有自身免疫性疾病；⑤近6 个月内使用过激素类药物治疗；⑥伴有感染性疾病；⑦有酗酒、药物滥用史；⑧妊娠期、哺乳期女性。

本研究已获得医院伦理委员会审批，受试者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-206 表达检测 月经规律者于月经第5 天，月经无规律或闭经者于B 超检查未发现优势卵泡时，采集受试者晨起空腹肘静脉5 mL，离心10 min（3 000 r/min、半径10 cm），提取血清，放于-20℃冰箱保存待检。采用Trizol 法［爱必信（上海）生物科技有限公司］提取所有受试者血清总RNA，以紫外分光光度计鉴定其纯度、完整性，使用miRNeasy 提取分离试剂盒（Qiagen 公司）提取miRNA。采用 miRNA Reverse Transcription Kit 反转录试剂盒（上海慧颖生物科技有限公司）逆转录合成cDNA，按照SYBR PrimeScript RT-PCR Kit 试剂盒（上海易汇生物科技有限公司）说明书进行实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）操作，miR-206 引物序列：上游5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3'，下游5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3'；内参U6 引物序列：上游5' -GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'，下游5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反应总体积25 μL，其中cDNA 为1.0 μL，SYBR Primix Ex Taq TM 为10 μL，Primer 为0.8 μL，RNase H2O为13.2 μL。反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性15 s，60℃ 30 s，72℃延伸10 s，总共40 个循环。以2-ΔΔct计算miR-206 表达。

1.2.2 血清性激素水平检测 采用化学发光免疫分析法检测血清FSH、LH、雌二醇（E2）、睾酮（T）、泌乳素（PRL）、孕酮（P）水平，全自动化学发光免疫分析仪购自北京贝尔生物工程股份有限公司，相关试剂盒购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

1.3 观察指标

①研究组、对照组血清miR-206 表达。②研究组、对照组血清FSH、LH、E2、T、PRL、P 水平。③分析PCOS 患者血清表达与FSH、LH、E2、T、PRL、P 的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0 软件进行统计学分析。经正态性检验，年龄、体质量指数、血压、血清各指标等计量资料均符合正态分布，以均数±标准差（）表示，采用t检验；计数资料如生育史以百分率（%）表示，采用χ2检验；血清miR-206表达与性激素水平的关系采用Pearson 相关系数分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

研究组年龄、体质量指数、血压、有生育史情况与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组血清miR-206 表达比较

研究组血清miR-206 表达平均为0.38±0.07，对照组平均为0.95±0.12，研究组血清miR-206 表达明显低于对照组，差异有统计学意义（t=49.220,P＜0.001）。

2.3 两组血清性激素水平比较

研究组血清FSH、P 水平均明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），血清LH、E2、T、PRL 水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组血清性激素水平比较（）

表2 两组血清性激素水平比较（）

2.4 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系

经Pearson 相关系数分析，PCOS 患者血清miR-206 表达与LH、E2、T、PRL 水平均呈负相关性（r=-0.546、r=-0.501、r=-0.533、r=-0.485,P＜0.001、P＜0.001、P＜0.001、P=0.001），与FSH、P 水平均呈正相关性（r=0.493、r=0.528,P=0.001、P＜0.001），见图1。

图1 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系散点图

续图1 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系散点图

3 讨论

PCOS 是内分泌科常见病，发生与遗传、环境等因素有关，调查显示，我国育龄期妇女PCOS 患病率可高达10%［9］，并呈逐渐上升趋势。PCOS 对女性身心健康可造成严重损害，及早对患者病情进行准确评估、为其制定合适的个体化治疗方案，对促进其预后改善意义重大。调节内分泌激素水平、降低胰岛素抵抗等是临床治疗PCOS 患者的重要干预途径，而探寻影响内分泌或胰岛素抵抗等的相关因素、寻找相关分子靶点对指导临床治疗具有积极意义。

miRNA 属于非编码单链RNA，在胚胎发育、调节细胞增殖/分化/凋亡、调控免疫功能等生物过程中具有举足轻重的作用，其在血清中稳定、易于检测，目前已被证实可作为多种疾病诊断的特异性生物标志物与治疗靶点［10-12］。miR206 位于人类染色体6p12.2 上，参与机体多种重要生理学过程。miR-206 可通过调节胰岛素信号传导、葡萄糖激酶活性，抑制葡萄糖转运蛋白表达，减少葡萄糖产生［13］，同时其可调节人类卵巢颗粒细胞增殖与凋亡［14］。本研究中显示，研究组血清miR-206表达较对照组明显降低，提示PCOS 患者血清miR-206 表达明显下降。分析原因可能为，当血清miR-206 表达明显下降时，则其调节胰岛素信号传导、卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的作用减弱，引起颗粒细胞功能失调，对卵巢激素分泌和卵泡发育等产生影响，从而参与PCOS 的发病过程。白爱红等［15］研究指出，PCOS 患者血清miR-206 表达明显低于月经规律健康女性，本研究结果与此相一致，共同表明血清miR-206 低表达可能参与了PCOS 发生发展。

另本研究中，研究组血清FSH、P 水平均明显低于对照组，而血清LH、E2、T、PRL 水平均明显高于对照组，提示PCOS 患者存在下丘脑-垂体-性腺轴内分泌紊乱。高雄激素血症是PCOS 患者重要临床特征之一，血清T 水平明显升高，其可正反馈作用于下丘脑-垂体，诱导LH 分泌过多，FSH 处于正常状态或分泌减少；而持续高水平LH又可促使卵泡膜细胞、间质细胞增生，进而导致雄激素合成增多，过多的雄激素通过芳香化作用可转化生成雌激素，导致E2水平升高，且高水平雄激素可持续刺激垂体而促使PRL 分泌增多。此外，胰岛素抵抗是PCOS 患者另一常见特征，此可引起雄激素水平升高、P 水平降低等。黄立等［16］研究报道，PCOS 患者血清T、E2、LH 水平明显高于健康体检妇女，本研究结果与此相符合。本研究还发现，PCOS 患者血清miR-206 表达与LH、E2、T、PRL 水平均呈负相关性，而与FSH、P 水平均呈正相关性。研究［17］表明，miRNA 参与了PCOS 中胰岛素抵抗的病理生理学过程。另有研究［18］报道，血清miRNA 表达与E2、P 等性激素水平具有一定的相关性。覃舒婷等［19］研究指出，血清miR-206 表达与雌激素受体表达呈负相关。miR-206 对人卵巢颗粒细胞增殖与凋亡具有一定的调节作用，其低表达可促进PCOS 发生发展［20］，同时其表达上调对促进胰岛素信号改善具有一定作用［21］，因此，血清miR-206 表达有可能通过上述路径而对PCOS 患者下丘脑-垂体-性腺轴内分泌相关指标产生调节作用，影响LH、E2、T、PRL、FSH、P 分泌与释放。

综上所述，PCOS 患者血清miR-206 表达明显下降，且与LH、E2、T、PRL、FSH、P 水平存在一定关系，临床中可通过干扰miR 表达调节下丘脑-垂体-性腺轴内分泌状态与功能，此为PCOS治疗方案的研究提供了新思路。但本研究具有一定的局限性，miR-206 参与PCOS 发生与发展的具体机制尚不明确，后续需进一步深入探索分析。