第7天囊胚培养可利用性及临床价值分析

魏 威, 于月新, 张 宁, 王喜良, 于佳平

北部战区总医院 生殖医学科,辽宁 沈阳 110016

近年来,随着辅助生殖技术的普及,冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)越来越受到关注。FET约占全世界胚胎移植量的20%[1]。由于胚胎发育的不一致性,有些胚胎在第5天形成囊胚,有些则需要等到第6天或第7天才能形成[2]。目前,大多中心只对第5天和第6天的囊胚进行冷冻保存、移植或活检,少有中心对第7天囊胚进行冷冻和移植。美国生殖医学学会委员会囊胚培养意见中也只规定了第5天和第6天的囊胚[3],伊斯坦布尔胚胎评估共识也曾指出“囊胚发育延迟(第7天或第8天)被认为是植入预后不佳”[4],因此,第6天以后的胚胎通常被丢弃处理。随着FET技术的不断优化和培养条件的不断提高,第7天也可以获得较好的囊胚[5],并获得一定的临床妊娠及活产[6-10]。本研究通过比较第5天、第6天、第7天胚胎体外培养对妊娠结局的影响,分析第7天囊胚培养的可利用性及临床价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析北部战区总医院自2016年1月至2020年12月收治的2 718例处于FET周期患者的临床资料。纳入标准:患者均处于FET周期;年龄21～41岁;宫腔检查形态正常。排除标准:既往习惯性流产史;移植前经宫腔镜检查或超声检查明确诊断有子宫内膜病变;存在纵隔子宫、双角子宫、单角子宫、鞍形子宫等子宫形态异常。根据囊胚形成时间,将患者分为3组:第5天(D5)组1 569例,第6天(D6)组1 116例,第7天(D7)组33例。患者及其家属均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 胚胎评分 囊胚按照Gardner评分标准[11]进行评级:根据囊腔扩张程度进行分期,囊腔不足胚胎体积的50%为1期;超过50%为2期;胚胎完全扩张,囊胚腔占满整个胚胎为3期;囊腔扩张,胚胎总体积变大,透明带变薄为4期;囊胚部分从透明带里孵出为5期;囊胚完全孵出为6期。

1.3 囊胚冷冻解冻 采用Kitazato玻璃化冷冻/解冻商品化试剂。冷冻:操作前将试剂恢复室温;3期及以上的囊胚冷冻前采用激光系统进行人工皱缩;将囊胚转移到平衡液平衡8 min,转入冷冻液平衡45 s后迅速将胚胎移至冷冻载体,并投入液氮中保存。解冻:操作前将解冻液升温至37℃;将目标载杆从液氮中取出,迅速将载杆前端放入解冻液37℃条件下静置1 min,转入稀释液室温条件下静置4 min,转入清洗液1室温条件下静置4 min,再转入清洗液2室温条件下静置4 min,最后转移至囊胚培养液滴中。

1.4 观察指标 比较3组患者的一般资料、胚胎质量,以及妊娠结局。

2 结果

2.1 3组一般资料比较 D5组平均年龄(32.11±3.72)岁;平均体质量指数(23.21±3.46)kg/m2;原发性不孕792例,继发性不孕777例;平均内膜厚度(1.00±0.22)cm。D6组平均年龄(32.42±3.43)岁;平均体质量指数(23.14±3.34)kg/m2;原发性不孕564例,继发性不孕552例;平均内膜厚度(0.98±0.22)cm。D7组平均年龄(31.79±3.38)岁;平均体质量指数(22.88±3.56)kg/m2;原发性不孕18例,继发性不孕15例;平均内膜厚度(1.00±0.28)cm。3组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 3组胚胎质量比较 (1)3组共形成囊胚11 932个,D5组、D6组、D7组的囊胚形成率分别为60.55%(8 022/13 248)、50.60%(3 845/7 599)、42.48%(65/153),D5组囊胚形成率高于D6组和D7组,D6组囊胚形成率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)3组共解冻囊胚3 798个,D5组、D6组、D7组的解冻存活率分别为99.61%(2 028/2 036)、99.36%(1 706/1 717)、100.00%(45/45),组间解冻存活率两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)3组共临床妊娠1 632例,D5组、D6组、D7组的临床妊娠率分别为66.92%(1 050/1 569)、51.70%(577/1 116)、15.15%(5/33),D5组临床妊娠率高于D6组和D7组,D6组临床妊娠率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)3组共活产1 117例,D5组、D6组、D7组活产率分别为45.90%(720/1 569)、35.13%(392/1 116)、15.15%(5/33),D5组活产率高于D6组和D7组,D6组活产率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.3 3组妊娠结局比较 D5组、D6组、D7组的早产率分别为17.36%(125/720)、18.36%(72/392)、20.00%(1/5),平均妊娠孕周分别为(37.84±2.29)周、(37.76±2.29)周、(38.20±2.28)周,低出生体质量率分别为18.75%(135/720)、17.60%(69/392)、20.00%(1/5),先天畸形率分别为0.42%(3/720)、0.51%(2/392)、0(0)。3组早产率、妊娠孕周、低出生体质量率、先天畸形率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

随着女性卵巢早衰、高龄等多种问题的出现,部分不孕患者时常面临无胚胎可用的困难。据统计,当前胚胎利用率仅为31.2%[12],大量发育延迟或潜能较差的胚胎被丢弃。有学者认为,胚胎发育延迟可能受培养条件、患者特征、治疗方案等相关因素的影响[13]。本研究结果显示:3组共形成囊胚11 932个,D5组囊胚形成率高于D6组和D7组,D6组囊胚形成率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。原因可能与大部分发育较快、质量较好的胚胎会在第5天、第6天形成囊胚,而只有少数发育相对迟缓的胚胎在第7天才能形成囊胚相关。尽管如此,本研究发现,3组共解冻囊胚3 798个,3组解冻存活率两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。这说明,发育相对迟缓的第7天囊胚可获得与第5天、第6天囊胚一样的解冻存活率。有研究报道,发育相对迟缓的胚胎可以发展到囊胚并在复苏移植后获得良好的临床妊娠和活产[14]。由此可见,延长培养至第7天可以让胚胎有更多被选择的机会,发育较迟缓的胚胎同样具有较高的可利用性。

本研究中:3组共临床妊娠1 632例,D5组临床妊娠率高于D6组和D7组,D6组临床妊娠率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05);3组共活产1 117例,D5组活产率高于D6组和D7组,D6组活产率高于D7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。这可能与胚胎质量密切相关,高质量的胚胎会在第5天、第6天形成囊胚并冷冻,其临床妊娠率和活产率自然相对较高。有研究发现,虽然第7天囊胚的非整倍体率比第5天高出34.0%,比第6天高出26.0%,但第7天囊胚仍有40.5%的整倍体率[15],而形态评级较高的第7天囊胚的整倍体率与第6天囊胚相似[16]。因此,第7天囊胚完全可以作为胚胎移植的候选储备。有学者认为,染色体异常是导致胚胎发育停止的最常见因素之一[17]。因此,延长胚胎培养至第7天可以帮助医师初步筛选并淘汰部分无法进一步发育的非整倍体胚胎。

本研究发现,3组早产率、妊娠孕周、低出生体质量率、先天畸形率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。这提示,第7天囊胚具有与第5天、第6天囊胚类似的生存能力及发育潜能。有研究表明,第7天囊胚的围产期结局与第5天、第6天囊胚无明显差异[8]。因此,对于胚胎质量差、不耐受多次辅助生殖助孕及经济条件受限的患者,将胚胎延长培养至第7天是更合理、更有温度的治疗策略,第7天囊胚具有极高的临床价值。

综上所述,胚胎延长培养至第7天不仅能够获得一定的临床妊娠和活产,还可增加仅有第7天囊胚患者的胚胎储备,从而减轻患者的精神、身心及经济压力,因此,第7天囊胚具有较高的可利用性及临床价值。