毛尖蘑粗多糖提取方法的研究

范晓艳,吕冬霞,刘 爽,金岳雷

(佳木斯大学基础医学院,黑龙江 佳木斯 154007)

毛尖蘑子实体丛生,每丛分枝3～ 7枚,菌盖直径3～ 7cm,初伞形成后平展。菌肉细腻,肉厚。初现蕾呈白色,成熟时呈黄褐色。菌柄基部粗大,顶端细尖 ,形似锥把 ,实心,质脆,长 4～ 7cm,粗1.0～ 1.2cm。早生者多为单株生长,旺盛期多为丛生[1]。毛尖蘑属珍贵野生菌,此菌不同于其它菌类生于朽木,而是生长在暴露于阳光下的采金尾沙上,因此称之为毛尖金蘑。个体非常小,香味浓郁,口感鲜美,味道极佳。毛尖蘑是我们黑龙江省特有的食、药用真菌,其子实体营养丰富,是食品、医药、保健品行业开发利用的宝贵资源。真菌作为天然药物的重要来源之一,生物活性十分广泛,其中许多具有抗肿瘤作用,是筛选和开发各种肿瘤治疗药物的良好资源。本实验采用常规方法对毛尖蘑中的粗多糖进行提取,比较在不同浸泡温度下的提取率,探讨毛尖蘑粗多糖提取的最佳工艺,为毛尖蘑粗多糖的提取提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

电子天平(上海恒科技有限公司),粉碎机 (温岭市创力药材器械厂 ),电热恒温水浴槽(余兆市远东数控仪器厂),旋转蒸发仪 RE-52A(上海亚荣生化仪器厂),循环水式多用真空泵 SHB-Ⅲ (郑州长城科技工贸有限公司 )。

毛尖蘑子实体(大兴安岭呼玛县韩家园林业局松涛鹿苑公司),所用试剂浓硫酸,苯酚,葡萄糖,95% 乙醇等均为国产分析纯。

1.2 毛尖蘑粗多糖的提取

根据文献报道,采用热水浸提方法改良[2]。

1.2.1 提取物经过漂洗的热水浸提法

毛尖蘑烘干后粉碎,称取20g三份;料水比 1:10;提取温度分别为 80℃、90℃、100℃;提取时间 2h;提取 3次;分别合并滤液;旋转蒸发至原体积 1/4;分别加入4倍体积95%乙醇静置24h;旋转蒸发至液体厚重;离心3000r/min;乙醇洗 3次,丙酮洗1次;60℃恒温烘干至恒重;得到粗多糖。

1.2.2 提取物未经过漂洗的热水浸提法

毛尖蘑烘干后粉碎,称取 20 g二份;料水比1:10;提取温度分别为 80℃、90℃;提取时间 2 h;提取3次;分别合并滤液;旋转蒸发至原体积1/4;分别加入 4倍体积 95%乙醇静置24h;旋转蒸发至液体厚重;60℃恒温烘干至恒重;得到粗多糖。

1.2.3 毛尖蘑总糖含量的测定

采用苯酚-硫酸法测定总糖含量。以葡萄糖作为标准物质制作标准曲线,计算样品中总糖的含量。

样品中总糖的含量(%)=(溶液中总糖的浓度×提取液总体积)/毛尖蘑原料的质量×100

2 结果

2.1 糖的鉴定结果

硫酸-苯酚法[3]制作标准曲线:准确称取标准葡萄糖20mg于 500mL容量瓶中,加水至刻度,分别吸取 0.4、0.6、0.8、 1.0、 1.2、 1.4、 1.6及 1.8mL,各以蒸馏水补至 2.0mL,然后加入6%苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL,摇匀冷却,室温放置20min后于490nm测光密度,以2.0mL水按同样显色操作作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。

测得标准曲线的回归方程:A= 0.0086X+ 0.0501,r= 0.9940。 A为吸光度值,X为多糖含量(mg/mL)。

用苯酚-硫酸法测定了毛尖蘑子实体中提取的固形物中多糖的含量为97.5%。

2.2 热水浸提法提取粗多糖得率

见表1。

表1 经过漂洗和未漂洗的热水浸提法在不同浸泡温度下提取粗多糖得率

由表1可看出在浸泡温度为80℃时,粗多糖提取率明显高于温度为90℃、100℃时的提取率;在浸泡温度为 80℃、90℃时,经过漂洗的提取法的提取率明显高于未经过漂洗的提取法的提取率。

3 讨论

目前真菌多糖提取的方法通常采用热水浸提和酶法浸提。其中热水浸提工艺简单,抽提的主要是胞外多糖,虽然得率稍低,但提取成本低 ,多糖纯度高;而酶法浸提常采用纤维素酶、果胶酶和蛋白酶以除去胞壁和膜上的果胶、纤维素及蛋白质等成分,有利于胞壁内多糖的溶出,且多糖提取率高,但由于加酶提取不仅生产成本高,同时也给产物的分离带来了困难。本实验将热水浸提法应用于毛尖蘑粗多糖的提取,在对不同浸泡温度下毛尖蘑粗多糖提取率的比较的同时,又比较了提取物经过漂洗和未经过漂洗的提取率。实验表明在浸泡温度为80℃时,粗多糖提取率明显高于温度为90℃、100℃时的提取率;在浸泡温度为 80℃、90℃时,经过漂洗的提取法的提取率明显高于未经过漂洗的提取法的提取率。即温度在80℃、提取物经过漂洗的条件下,提取率明显高于其它条件。本方法为毛尖蘑子实体粗多糖的提取工艺优化提供了实验基础。但在浸提温度是否能够更低、料水比的合适比例、提取时间长短等问题上,在本实验中还未得到解决 ,这有待于进一步研究。

[1] 郑雅莺,潘学仁.野生毛尖蘑人工驯化研究初报 [J].中国林副特产,1995,32(1):3-4

[2] 陈湘,林炳昌.黄蘑子实体总糖的提取 [J].食用菌学报,2007,14(1):47-48

[3] 高丽君,王汉忠,崔健华,等.苯酚-硫酸法测定白首乌中多糖含量 [J].山东农业大学学报,2004,35(2):295-297