HPLC法测定丹参中原儿茶醛的含量

魏桂芳 王汉平 杨志灵 西安市红十字会医院药剂科(西安 71000)

丹参为唇形科 (Labiatae)植物丹参 (Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎。丹参的水溶性部分有丹参素、丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸等。其中原儿茶醛易溶于水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等,是丹参中起活血化瘀作用的有效成分之一,具有增加冠脉流量,降低心肌兴奋性和传导性,对急性心肌缺血缺氧所致的心肌损伤具有明显保护作用,具有抑制血小板聚集作用和广谱抗菌抗炎作用[1]。为有效控制药材质量,本实验建立了 HPLC法测定丹参中原儿茶醛含量的方法[2]。该方法操作简便,快速,准确,重现性好,可用于中药丹参的质量控制。

1 仪器与试药 1.1 仪器美国 waters 515高效液相色谱仪,waters 2487双波长紫外检测器,浙大智达色谱处理工作站;赛多利斯 BP-211D万分之一电子天平;KQ-250DB超声处理仪。

1.2 试剂甲醇为色谱纯,水为乐百氏 550mm瓶装纯净水,其它试剂均为分析纯;对照品原儿茶醛(批号:110810-200506)购自中国药品生物制品检定所;药材丹参采自汉中南郑,汉王药业化验室陈菲鉴定。

2 实验方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱:Ultimate XB-C18,5 μ m,4.6× 250mm 柱 ,流动相为甲醇 -水-甲酸 (13:86.5:0.5),流速为 1.0 mL/min,检测波长为 280nm;柱温:30℃;理论塔板数按原儿茶醛峰计算应不低于 3000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取原儿茶对照品适量,加甲醇制成每 1mL含 30μ g的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备 取丹参药材,60℃干燥5h,粉碎成细粉,精密称取约 0.7g,置 100mL具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 50mL,称定重量,回流 60min,放冷,再精密称定,用水补足减失的重量。离心沉淀10min,精密量取上清液 20m L,用盐酸调至 pH为 2.0,用乙酸乙酯提取 3次,每次 20mL,合并乙酸乙酯液,在水浴上蒸干,残渣用甲醇溶解,并转移至 10mL量瓶中,稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜 (0.45μ m)过滤,即得。

2.4 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液 1、2、4、6、 8、10μL进样 ,以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标作图,得回归方程 y=114000x+21.8,r=0.9991。原儿茶醛在 0.03～0.30 μL的进样范围内具有良好的线性关系。

2.5 进样精密度试验精密吸取对照品溶液 10 μL,连续进样 6次,测定峰面积,求得 RSD值为 1.06%。

2.6 样品测定精密吸取样品溶液 10μL,连续进样 3次,用外标法计算,测定原儿茶醛含量,计算平均含量和 RSD值。5批样品的测定结果见表 1。色谱图见图2。

2.7 重复性试验取样品溶液 10μL,连续进样 6次,测定峰面积,求得 RSD值为 1.24%。

2.8 稳定性试验精密吸取样品溶液 10μL,在2、4、6、 8、10h测定 ,峰面积的 RSD=1.46%。

2.9 回收率试验精密称取已测知含量的丹参细粉适量,加入定量的原儿茶醛对照品,按 2.2项下操作,测定原儿茶醛含量,计算回收率,平均回收率为99.05%,RSD=0.4%(n=6),表明本品具有良好的回收率[3],结果见表 2。

表1 丹参中原儿茶醛含量测定试验结果

表2 原儿茶醛回收率试验结果

3 讨 论 3.1 经不同品牌的 C18色谱柱对多批样品进行反复测试,证明本法的重现性较好,故可用于丹参的含量测定。

3.2 曾尝试过用甲醇、乙醇、稀盐酸进行提取,回收率均较低。

3.3 温度对出峰时间及分离效果影响不大,故可在室温下进行测定。

3.4 试验所测 5批样品的原儿茶醛含量在 0.05%～0.10%之间,由于样品来源有限,对不同产地药材含量的系统研究尚待以后进行。

[1]阴 健,郭力弓.中药现代研究与临床应用 [M].北京:学苑出版社,1993:171-185.

[3]韩艳萍,刘永忠.宁心安神胶囊中原儿茶醛的含量测定 [J].陕西中医,2004,31(7):646.