大鼠右侧足底注射 C48/80复合物对双侧足底皮肤血流影响的实验研究*

王广军 张宇沁 王瑞红 田宇瑛 黄 涛 张维波 中国中医科学院针灸研究所(北京 100700)

对称和左右交互支配是最常见的生命现象,而且对称的观念始终贯穿于针灸核心理论及临床治疗过程。《内经》中的巨刺和缪刺理论,即左病取右、右病取左的针刺方法就是这种观念的体现[1]。张维波采用聚类分析发现左右同名穴二氧化碳的释放量相关性最大,说明穴位处二氧化碳的释放也服从这种规律[2]。我们以往的研究表明,当右侧下肢[3]接受温热刺激引起血流增高后,左侧肢体相同部位的血流也增高,说明体表相同部位的血流分布也符合这种规律。但是当我们拟深入探讨机理,采用麻醉状态的大鼠为研究对象时,却发现在麻醉状态下,右侧温热刺激引起的血流增高并不引起左侧相同部位的血流增高,我们初步考虑可能是两方面原因:一是与机体的状态有关;二是与刺激的性质有关。因此我们改变了刺激条件,以肥大细胞脱颗粒剂 C48/80复合物为工具药,探讨一侧血流变化对对侧血流的影响。

1 材料与方法 1.1 实验仪器参照张栋[4]的方法,使用PeriScan PIMⅡ型激光多普勒血流灌注成像仪(瑞典PERIM ED公司生产),激光波长 670nm。本研究采用 NR扫描模式,步长 3mm,扫描面积 Width50× Height50,扫描精度为High。应用联机自带 LDPI2.5图像分析系统进行血流图的分析。

1.2 实验对象及分组实验动物选用雄性 Wistar大鼠 20只,体重 220g～250g,由中国中医科学院实验动物中心提供。随即分为静息组 10只和足底注射组 10只,实验中静息组共有 6只完成完整血流记录,注射组共 8只完成完整血流记录。

1.3 干预方法及血流记录实验室保持暗光状态,室温控制在 26℃± 2℃,大鼠用 1%戊巴比妥钠腹腔注射 (4mL/kg)麻醉,俯卧位固定,充分暴露双下肢足底 ,记录初始状态下双下肢足底血流图,记录为 Pre。静息组休息 5min后 ,开始记录不同时间段血流值。注射组右下肢足底注射 0.1%的 C48/80复合物 5μl(Sigma,57K4011),5min后开始记录不同时间段血流值。各时间段血流记录为 (Post)1min、4min、7min、10min、 20min、 30min、40min、50min、60min、70min、80min、 90min。 实验过程见下示意图。

实验流程示意图

1.4 数据分析及统计 采用 LDPI 2.5图像分析软件,大鼠双下肢足底血流均用 PU表示,不同时间点左右侧血流比较采用配对 t检验。统计采用 SPSS13.0统计软件包。

2 实验结果 2.1 静息状态大鼠足底血流变化在静息状态下,大鼠双下肢足底血流较高,表现在血流图上为双后肢弥漫性的深红色区域(图 1),而且在 90min内 ,双侧足底血流无明显波动(见图 3),左右侧足底血流经配对 t检验无统计学差异 (P＞0.05,见表 1)。说明在静息状态下,大鼠双下肢足底血流维持在一定的水平,90min内无明显波动。

2.2 右侧足底注射 C48/80复合物后大鼠双下肢足底血流变化 在右侧注射肥大细胞脱颗粒剂 C48/80复合物之前,大鼠双下肢足底血流比较对称,见图 2-B,血流图表现为双侧对称性橘黄色区域分布。在大鼠右下肢足底注射 C48/80复合物后,注射侧足底血流显著上升 ,在 1min～10min内 (见图 2-C～F,表 2),与对侧比 P ＜ 0.05。 在 20min～30min内 (见图 2-G～F,表 2),血流下降至正常水平 ,与对侧比 P＞0.05。在 40min～90min内(见图 2-I～O,表 2),注射侧血流显著低于对侧血流 (P＜0.05)。结果表明大鼠右下肢足底注射 C48/80复合物后,局部血流先升高,后降低,而对侧血流无明显变化 ,见图 4。

表1 静息状态大鼠足底皮肤血流变化比较(,PU)

表1 静息状态大鼠足底皮肤血流变化比较(,PU)

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续表1 静息状态大鼠足底皮肤血流变化比较(,PU)

续表1 静息状态大鼠足底皮肤血流变化比较(,PU)

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表2 大鼠右下肢足底注射 C48/80后双侧皮肤血流变化比较(,PU)

表2 大鼠右下肢足底注射 C48/80后双侧皮肤血流变化比较(,PU)

组别 n 注射前注射后1min 4 min 7 min 10 min 20 min左侧 8 1.93± 0.622.00± 0.68 1.95± 0.67 1.95± 0.67 1.92± 0.68 1.88± 0.59右侧 8 1.89± 0.612.60± 0.76 2.41± 0.61 2.31± 0.58 2.21± 0.62 1.86± 0.53 t 1.282 -5.701 -6.269 -3.800 -2.791 0.271 P 0.241 0.001 0.000 0.007 0.027 0.794

续表2 大鼠右下肢足底注射 C48/80后双侧皮肤血流变化比较(,PU)

续表2 大鼠右下肢足底注射 C48/80后双侧皮肤血流变化比较(,PU)

组 别注射后30 min 40 min 50 min 60 min 70 min 80 min 90 min左侧 1.82± 0.55 1.77± 0.48 1.74± 0.42 1.73± 0.45 1.74± 0.47 1.79± 0.52 1.78± 0.52右侧 1.72± 0.52 1.64± 0.45 1.59± 0.41 1.57± 0.39 1.56± 0.41 1.57± 0.41 1.52± 0.40 t 1.760 3.243 3.169 3.245 3.645 3.732 4.027 P 0.122 0.014 0.016 0.0140 0.008 0.007 0.005

图2 大鼠右足底温热刺激对血流灌注的影响

3 讨 论 巨刺,即“左病取右,右病取左”之意,是机体一侧有病而在对侧选取经穴治疗的方法。巨刺始见于《内经》,如《灵枢◦ 官针》记载:“巨刺者,左取右,右取左”。可见从传统针灸理论来看,巨刺和缪刺是治疗疾病时的选穴原则,是病理情况下左右对称的体现。从一侧痛觉过敏从经皮神经电刺激的实验结果来看,一侧经皮神经电刺激可对对侧不同性质的疼痛进行调制,说明在神经系统的参与下,左右存在这种交互作用,而且这种交互作用是一种脑反射结果[5]。

对称和左右交互支配是最常见的生命现象,既然在病理情况下,可出现这种交互作用,那么 ,在生理情况下机体的左右交互作用,就值得深入研究。因此我们以健康受试者为研究对象,以局部皮肤血流为指标,探讨了生理状态下的作用交互支配问题。从我们的结果来看,当一种适宜的温热刺激作用于人体后,不同于伤害性刺激引起的血流降低[6],往往是在不影响全身血流的基础上,局部皮肤血流灌注量增高并维持在一定的水平[7]。而且右侧肢体的血流升高往往伴随着左侧相同部位的血流增高[3]。我们推测对侧血流的增高一方面是神经活动的结果,另外体液因素很可能参与其中,部分支持了体液因素参与一侧炎性痛敏致对侧痛阈变化的结论[8]。

但是这种基于温热刺激的交互作用并不能重现于麻醉状态下的大鼠,对此我们有两种理解,一是这种基于温热刺激的交互作用本身是脑反射的结果,或者即使有体液因素的参与,也是继发于脑反射的结果,大鼠的麻醉状态阻止了基于脑反射的这种交互作用;二是可能与刺激的模式有关,因此我们采用另方面刺激模式,进一步探讨这种交互作用。

图3 静息状态大鼠足底皮肤血流变化的比较

图4 大鼠右下肢足底注射 C48/80后双侧皮肤血流的变化

我们知道,机体对外界的反应,是由外周感受器所介导的,而针灸的命名也是针对不同性质的感受器而言,针刺过程主要由机械感受器介导,而灸法主要由温度感受器所介导,无论是机械感受器兴奋,还是温度感受器兴奋,往往导致或者伴有化学感受器的兴奋,近来的研究表明,无论是针刺,还是灸疗,在效应始动机制中肥大细胞发挥着关键作用,因此在我们的研究中采用肥大细胞脱颗粒剂 C48/80复合物作为工具药[9]。从实验结果来看,C48/80注射后,局部皮肤血流先升高,后降低 ,而对侧血流无明显波动,这样的结果部分支持交互作用的基础可能是脑反射,但也不排除有其他因素参与其中,详细机制有待进一步研究。

[1]王 玲.缪刺、巨刺理论探讨与临床运用[J].针灸临床杂志,2008,24(8):42-43.

[2]张维波.人体十二经原穴皮肤二氧化碳呼出量相关性的聚类分析[J].生物数学学报,1997,12(03):259-264.

[3]张宇沁,丁玉龙,田宇瑛,等.电热砭石干预对对侧小腿局部皮肤血流影响的实验研究[J].江苏中医药,2010,42(4):48-49.

[4]张 栋,李顺月,王淑友,等.运用激光多普勒血流成像仪探讨针灸作用原理的初步研究[J].中国针灸,2004,24(7):499-502.

[5]宋丽萍,Andrew C.N.Chen.经皮神经电刺激对实验性冷痛和热痛的对侧调制[J].山西医科大学学报,2009,40(4):295-298.

[6]Litscher G,Wang L,Huber E,et al.Changed skin blood perfusion in the fingertip following acupuncture needle introduction as evaluated by laser Doppler perfusion imaging[J].Lasers Med Sci,2002,17(1):19-25.

[7]王广军,张宇沁,王瑞红,等.电热砭石对手背局部皮肤血流影响的实验研究[J].天津中医药,2009,26(5):382-384.

[8]吕国蔚.脊髓感觉机制 [M].北京:人民卫生出版社,1997:156.

[9]周 丹,潘 萍,郭 义,等.针刺引起的炎性反应是针效产生始动环节之一[J].中国针灸,2009,29(1):32-34.