阿司匹林促进胃酸分泌的途径与溃疡复发

刘 韩，崔伟龙，牟 林，夏立丁，李光伟，孙东升，王国忠

（齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006）

消化性溃疡是一种常见病，主要发生在胃和十二指肠，发病机制较为复杂[1]。消化性溃疡愈合后很容易复发，复发的机制更为复杂，而且很难防止[2]。阿司匹林（Aspirin）的药理作用非常广泛[3-4]，是临床上最常用的药物之一。阿司匹林有损伤胃肠道黏膜而导致溃疡复发的副作用，但阿司匹林引起溃疡复发的机制目前还不十分清楚。该项研究采用经典的大鼠乙酸溃疡模型，在溃疡愈合后用阿司匹林诱导复发，探讨阿司匹林促进胃酸分泌的途径以及胃酸分泌增加对胃黏膜结构的影响，进而阐明溃疡复发的机制，这对防止溃疡复发，保护煤矿工人的健康，提高生产效率具有重要的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

雄性清洁级Wistar大鼠购于哈尔滨医科大学第二附属医院动物实验中心，生产许可证号：SCXK2006-010，体重180～210g。阿司匹林为alfa aesar公司产品。环加氧酶-1（Cyclooxygenase-1，COX-1） 一抗、COX-2一抗和胃泌素（Gastrin，Gas）一抗为北京博奥森生物技术有限公司产品，它们的山羊抗兔酶标二抗都是北京康为世纪生物科技有限公司产品。DAB显色试剂盒为康为世纪公司产品。防脱片氨基载玻片为天津灏洋生物制品科技有限公司产品。前列腺素E2（prostaglandin E2， PGE2）检测试剂盒为美国 R&D 公司产品。

1.2 仪器与设备

日本产奥林巴斯光学显微镜、Motic Med 6.0数码医学图像分析检测仪。Leica切片机为德国产品，PHS-3B型pH计为中国上海精科仪器有限公司产品。Model 680型酶标仪为美国Bio-Rad公司产品。

1.3 方法

1.3.1 动物模型复制和分组 大鼠乙酸溃疡模型按文献报道方法进行复制[5]，简述为：将内径为6 mm的塑料管放置于大鼠胃体与幽门交界处，管内注入100%乙酸75 μm，25 s后移去乙酸。模型制作后的第25天光镜下检测溃疡的组织学后，随机分为如下3组：模型对照组，溃疡制作后的第25～54天，每天禁食5 h；盐水对照组，溃疡制作后的第25～54天，每天禁食 4 h后，用灌胃法给予生理盐水 4ml/（kg·d），然后再禁食1 h；阿司匹林组，溃疡制作后的第25～54天，每天禁食4 h后，用灌胃法给予阿司匹林 40 mg/（kg·d），然后再禁食 1 h。在55d收集各组标本，进行各项指标检测。

1.3.2 溃疡组织学检测 用过量乙醚处死大鼠，取出胃，以溃疡部为中心，沿胃长轴取材，行组织切片，H&E染色，光镜下观察黏膜结构。

1.3.3 再生黏膜厚度和扩张腺体数的检测 每组随机取4张切片，每张切片随机取2个视野，H&E染色后在光镜下放大100倍，测量再生黏膜上皮细胞表面至黏膜下层之间的距离，结果表示为：微米 （μm）；H&E染色切片在光镜下放大100倍，测量再生黏膜内呈囊状扩张的腺体数，结果表示为：个/高倍视野（个/HP）。

1.3.4 COX-1、COX-2和Gas表达的检测 用免疫组织化学Elivison二步法检测。COX-1一抗1∶150稀释，COX-2一抗1∶1 000稀释，Gas一抗1∶1 000稀释；它们的山羊抗兔酶标二抗都是1∶150稀释，用DAB试剂盒显色。每组随机取4张切片，每张切片随机取2个视野，然后用Motic Med 6.0数码医学图像分析检测仪检测其组织切片的积分光密度来表示COX-1、COX-2和Gas表达的强度。

1.3.5 PGE2和胃液pH的检测 按试剂盒生产厂商说明书并参考文献[6]报道的方法进行胃黏膜PGE2的测定；大鼠禁食24 h，乙醚麻醉，结扎幽门，4 h后再结扎贲门，收集胃内容于离心管内1 500 r/min离心10 min，取上清液用pH计测量pH。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 溃疡组织学变化

模型复制后第55天溃疡的组织学变化，见图1。

2.2 各组再生黏膜厚度和扩张腺体数的差异

各组再生黏膜厚度和扩张腺体数的差异见表1。

表1 各组再生黏膜厚度和扩张腺体数的差异（±s）Tab.1 difference of the regenerative mucosal thickness and the number ofdilatedgland in eachgroup(±s)

表1 各组再生黏膜厚度和扩张腺体数的差异（±s）Tab.1 difference of the regenerative mucosal thickness and the number ofdilatedgland in eachgroup(±s)

与模型对照组和盐水对照组相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

组别 再生黏膜厚度（μm） 扩张腺体数（个/HP）模型对照组盐水对照组阿司匹林组341.05±28.60 353.84±21.04 286.56±34.51*21.38±4.66 18.50±4.90 30.75±6.09*

2.3 各组COX-1、COX-2和Gas表达的差异

各组COX-1、COX-2和Gas表达的差异，见图2和表2。

2.4 各组胃黏膜PGE2含量和胃液pH的差异

各组胃黏膜PGE2含量和胃液的差异，见表3。

3 讨论

文献报道用100%乙酸75 μm复制的大鼠乙酸溃疡模型在3周内完全愈合[5]，本实验在模型复制后第25天，随机抽取10只大鼠进行组织学检测，溃疡完全愈合。愈合后的大鼠在25～54d给予阿司匹林，在55d 70%的大鼠出现复发溃疡，与先前的报道基本一致[7]。由图1可看出，阿司匹林组复发溃疡边缘腺体扩张（图1C），模型对照组（图1A）与盐水对照组（图1B）涂乙酸部位的黏膜亦扩张，与正常黏膜（图1E）有很大差异，而阿司匹林组没有复发溃疡部位的黏膜（图1D）扩张腺体较少，与正常黏膜结构相似，表明愈合质量与溃疡复发有关。

表2 各组COX-1、COX-2和Gas积分光密度的差异（±s）Tab.2 difference of the integral lightdensity of COX-1,COX-2 andgas in eachgroup(±s)

表2 各组COX-1、COX-2和Gas积分光密度的差异（±s）Tab.2 difference of the integral lightdensity of COX-1,COX-2 andgas in eachgroup(±s)

与模型对照组和盐水对照组相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

组别 COX-1 COX-2模型对照组盐水对照组阿司匹林组38.04±7.89 40.37±9.85 43.65±7.37 9.78±4.40 11.52±4.63 45.63±5.45*Gas 29.48±5.59 31.49±6.45 42.66±7.55*

表3 各组PGE2含量和胃液pH的差异（±s）Tab.3 difference of the contents of prostaglandin E2and pH in eachgroup(±s)

表3 各组PGE2含量和胃液pH的差异（±s）Tab.3 difference of the contents of prostaglandin E2and pH in eachgroup(±s)

与模型对照组和盐水对照组相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

组别 n PGE2（ng/g）模型对照组盐水对照组阿司匹林组10 10 10 193.15±25.36 182.28±25.77 146.52±23.78*胃液pH 1.61±0.13 1.67±0.14 1.41±0.15*

目前发现COX有3种[8]，胃黏膜存在结构型COX-1和诱导型COX-2，COX催化花生四烯酸生成PGE2可加速溃疡愈合[9]。从图2的COX表达和表2的COX积分光密度来看，3个组的COX-1的积分光密度差异无统计学意义 （P＞0.05），表明阿司匹林不影响结构型COX-1的表达，因为结构型COX-1通常有一定的表达，以维持正常的生理功能[10]；而在阿司匹林组COX-2的积分光密度高于模型对照组和盐水对照组（P＜0.01），模型对照组和盐水对照组之间差异无统计学意义 （P＞0.05），表明阿司匹林影响COX-2的表达，这与文献报道一致[11]。COX-2表达的增加可能是阿司匹林引起的胃黏膜炎症所致。COX-2表达增加理应导致PGE2生成增多，但从表3来看，阿司匹林组的PGE2含量比模型对照组和盐水对照组减少（P＜0.01），如果阿司匹林仅抑制COX-2活性而不抑制COX-1的活性，那么阿司匹林组的PGE2含量应该与模型对照组和盐水对照组没有差异，因为模型对照组和盐水对照组溃疡完全愈合，接近于正常胃黏膜，正常胃黏膜COX-2表达很少[10]，因此可以推测阿司匹林既抑制COX-1的活性，也抑制COX-2的活性，才能使PGE2生成减少。

Gas由胃黏膜G细胞产生，作用于壁细胞Gas受体促进胃酸分泌。从图2和表2gas表达可以看出，阿司匹林组Gas积分光密度高于模型对照组和盐水对照组（P＜0.01），而模型对照组和盐水对照组Gas积分光密度差异无统计学意义，此结果表明阿司匹林有上调Gas表达的作用。胃酸是重要的黏膜攻击因子，能够损伤胃黏膜，从表3胃液pH来看，阿司匹林组的胃液pH低于模型对照组和盐水对照组（P＜0.01），模型对照组和盐水对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），表明阿司匹林促进G细胞Gas的表达，Gas作用于壁细胞使胃酸分泌增多，导致胃液pH值降低。

愈合质量是影响消化性溃疡复发的关键因素[12]。从表1来看，阿司匹林组的再生黏膜厚度低于模型对照组和盐水对照组（P＜0.01），而再生黏膜扩张腺体数高于模型对照组和盐水对照组（P＜0.01），但模型对照组和盐水对照组之间再生黏膜厚度和再生黏膜扩张腺体数没有差异（P＞0.05），表明胃酸作为黏膜的攻击因子容易损伤畸形的胃黏膜，降低溃疡愈合质量，导致溃疡复发。

由此可以推测，阿司匹林增加胃酸分泌的途径是：阿司匹林通过抑制COX的活性，使PGE2生成减少，致上调G细胞Gas的表达，Gas作用于壁细胞受体促进胃酸分泌增加，胃酸分泌增加容易损伤愈合质量降低的畸形胃黏膜，导致溃疡复发。

[1]王一然,白玉红,郝伟.BRA对胃溃疡大鼠血清活性因子的影响[J].中国医药导报,2009,6(10):11-12.

[2]Dai XP,Li JB,Liu ZQ,et al.Effect of Jianweiyuyanggranule ongastric ulcer recurrence and expression of VEGF mRNA in the healing process ofgastric ulcer in rats[J].World Jgastroenterol,2005,11(35):5480-5484.

[3]王刚,刘彦生,王海鹏.阿司匹林的临床药理学作用[J].中国医药导报,2008,5(19):174.

[4]贾卫萍.谈规范应用阿司匹林[J].中国医药导报,2009,6(23):144-145.

[5]陈镜先,张翠香,邓志会,等.核因子-кB的表达对TNF-α和IL-8的影响以及对溃疡愈合的作用[J].中国当代医药,2010,17(14):5-8.

[6]Luo JC,Shin VY,Yang YH,et al.Tumor necrosis factor-alpha stimulatesgastric epithelial cell proliferation [J].Am J Physiolgastrointest Liver Physiol,2005,288(1):G32-G38.

[7]WanggZ,HuanggP,YingL,et al.Aspirin can elicit the recurrence ofgastric ulcer induced with acetic acid in rats[J].Cell Physiol Biochem,2007,20(1-4):205-212.

[8]Venerito M,Treiberg,Wex T,et al.Effects of low-dose aspirin ongastric erosions,cyclooxygenase expression and mucosal prostaglandin-E2do notdepend on Helicobacter pylori infection[J].Aliment Pharmacol Ther,2006,23(8):1225-1233

[9]Hatazawa R,Tanaka A,Tanigami M,et al.Cyclooxygenase-2/prostaglandin E2accelerates the healing ofgastric ulcers via EP4 receptors [J].Am J Physiolgastrointest Liver Physiol,2007,293(4):G788-G797.

[10]张斌,杜冠.NSAIDs抗炎作用机制研究进展[J].中国药理学通报,2005,21(8):905-910.

[11]Pawlik T,Konturek PC,Konturek JW,et al.Impact of Helicobacter pylori and nonsteroidal anti-inflammatorydrugs ongastric ulcerogenesis in experimental animals and in humans [J].Eur J Pharmacol,2002,449(1-2):1-15.

[12]凌江红,陈业强.炎症在消化性溃疡复发中作用的研究进展[J].中国实用内科杂志,2006,26(10):790-792.