高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量

贝 京，于光福

(1.江苏省生产力促进中心，江苏南京210042;2.南京逐陆医药科技有限公司，江苏南京210061)

高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量

贝 京1，于光福2

(1.江苏省生产力促进中心，江苏南京210042;2.南京逐陆医药科技有限公司，江苏南京210061)

建立了一种高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18(4.6mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇－磷酸盐缓冲液(1.56g磷酸二氢钠/1 000 mL水，磷酸调节pH值3.8～4.0)(体积比为23∶77);检测波长为323 nm，柱温为40℃。研究结果表明：线性范围为2.44～14.64 mg/L，回归方程为y=41 742x+2 287.9相关系数为R2=0.999 6，加标平均回收率为97.5%。本方法具有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点。

高效液相色谱法;蒲公英提取物;咖啡酸

蒲公英为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.－Mazz.、碱地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.或同属数种植物的干燥全草。春至秋季花初开时采挖，除去杂质，洗净，晒干。产于山西、河北、江苏、山东及东北各地。蒲公英中含咖啡酸、蒲公英甾醇(Taraxasterol)、蒲公英萜醇(Taraxerol)、蒲公英素(Taracation)、β－谷甾醇、豆甾醇、黄酮类、皂苷、挥发油、胆碱、菊糖和果胶等。其中咖啡酸具有广谱抗菌作用，直接影响蒲公英作为药材的疗效。喷雾剂、口服液等制剂中咖啡酸的测定方法已有报道［1－2］，蒲公英药材咖啡酸的测定仅中国药典有所规定［3］，但提取、测定方法各不相同。我们参考文献报道，结合工作实际情况，建立了一种高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。本方法具有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

仪器：LC－10AT型高效液相色谱仪、SPD－10A紫外检测器、柱温箱HT－230A(日本岛津公司)，N2000工作站(浙江大学)。

试剂：甲醇为色谱纯(上海振兴化工一厂);磷酸二氢钠、磷酸、盐酸、乙酸乙酯均为分析纯、水为重蒸馏水、咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所供编号110885－200102)、蒲公英提取物(南京逐陆医药科技有限公司制备)。

1.2 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18(4.6mm×150 mm 5μm)，理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3 000，柱温40℃;动相：以甲醇－磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.56g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%磷酸溶液调节pH值3.8～4.0，即得)(体积比为23∶77);流速：1 mL/min;检测波长：323 nm。

1.3 实验方法

对照品储备液制备：精密称取在110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品12.2 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为咖啡酸对照品储备液。

供试品溶液制备：

方法1：精密称取蒲公英提取物0.1 g，加水4 mL，稀盐酸2滴，摇匀，用乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并乙酸乙酯溶液，挥干，残渣用甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液备分析用。

方法2：精密称取蒲公英提取物0.1 g，置25 mL量瓶中，加入5%甲酸的甲醇溶液并稀释定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，备分析用。

2 结果与讨论

2.1 系统适应性试验

取1.3节中咖啡酸对照品储备液5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，按1.2节色谱条件进样20 μL，结果本品理论板数按咖啡酸峰计算为1 568.267，其中HPLC图见附图1。

2.2 线性关系试验

分别精密量取1.3节中咖啡酸对照品储备液溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置于 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成系列浓度的标准溶液，按1.2节色谱条件分别进样20 μL，记录峰面积，检测结果见表1。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行一元线性回归，得回归方程：y=41 742x+2 287.9，R2=0.999 6含量测定标准曲线图见图2，结果表明：本品在2.44～14.64 mg/L范围内咖啡酸浓度与色谱峰面积线形关系良好。

图1 咖啡酸系统适应性试验色谱图

表1 标准曲线绘制结果(n=6)

图2 咖啡酸标准曲线图

2.3 供试品溶液制备方法的选择

分别精密吸取1.3节中方法1、方法2两种方法制备的试供品溶液各20 μL，按1.2节色谱条件注入色谱系统分析，试验结果见图3和图4。由图3和图4试验结果表明，方法1制备的供试品溶液，咖啡酸主峰与其他峰具有较好的分离度(分离度>1.5)，方法2制备的供试品溶液，咖啡酸主峰与其他峰不仅分离度较差，而且杂质峰较多，影响定量分析，故采用方法1乙酸乙酯提取法处理试供样品，制备供试品溶液。

图3 方法1供试品制备液色谱分离效果图谱

图4 方法2供试品制备液色谱分离效果图谱

表2 咖啡酸含量测定进样精密度试验考察结果(n=6)

2.4 样品进样精密度试验

取蒲公英提取物咖啡酸含量测定项下的供试品溶液，按1.2节色谱条件进样20 μL，平行操作6次，考察其进样精密度试验，结果见表2。试验结果表明，本品咖啡酸含量测定法进样精密度试验较好。

2.5 溶液稳定性试验

按1.3节方法1制备蒲公英提取物试样液和1.2 节色谱条件，分别于 0、2、4、6、8 h 进行测定，结果见表3。试验结果表明，本品咖啡酸含量测定供试品溶液在放置8 h内稳定。

表3 溶液稳定性试验测定结果

2.6 回收率试验

准确称取0.1 g已知咖啡酸含量的蒲公英提取物5份，分别加入咖啡酸对照品溶液(398 μmg/mL)1 mL，按1.3节方法1制备样品试样液和1.2节色谱条件，测定并计算计算咖啡酸平均回收率为97.5%，相对标准偏差(RSD)为1.4%，结果见表4。结果表明，本测定方法准确度良好。

表4 提取物中咖啡酸的加样回收率试验结果

2.7 重复性试验

分别精密称取0.1 g蒲公英提取物6份，按1.3节方法1制备试样液和1.2节色谱条件，分别测定咖啡酸含量，考察其重复性，结果见表5。

表5 提取物中咖啡酸含量的重复性试验结果

3 结论

本方法采用高效液相色谱法测定蒲公英提取物咖啡酸的含量，具有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点，能有效的控制蒲公英提取物质量。

［1］ 金 薇，王树实，张曦弘，等.口腔炎喷雾剂中咖啡酸的含量测定［J］.辽宁中医杂志，2004，31(2)：159.

［2］ 魏云兰，徐 杰.HPLC法测定炎灵口服液中咖啡酸的含量［J］.中医药信息，2004(2)：56－57.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京：化学工业出版社，2005：244 －245.

Determination of Coffeic acid in Extract of Herba Taraxaci by High Performance Liquid Chromatographic Method

Bei Jing1，Yu Guangfu2
(1.Productivity Centre of Jiangsu Province，Nanjing 210042，China;2.Nanjing Zhulu Pharmaceutical Technology Co.，Ltd，Nanjing 210042，China)

A high performance liquid chromatographic cethod has been developed for determination of coffeic acid in extract of herba taraxaci.The chromatographic conditions were as follows：DiamonsilTMC18(4.6mm ×150 mm，5 μm)with methol H3PO4(1.56g NaH2PO4/1 000 mL water，pH3.8 －4.0)buffer(23∶77，volume)as mobile phase and detector at 323 nm.The calibration curve showed good linearity(R2=0.999 6).And the averae recovery of the method was 97.5%.Sensitive，reproducible and accurate，this method is particularly suitable for determination of coffeic acid in extract of herba taraxaci.

high performance liquid chromatography;extract of herba taraxaci;coffeic acid

R284.1

A

1006－9690(2010)03－0054－03

10.3969/j.issn.1006－ 9690.2010.03.013

2009－10－15

贝京(1976－)，男，学士，工程师，从事精细化工、天然植物研究与色谱分析