高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量

(江苏省宿迁市药品检验所，江苏 宿迁 223800)

复方金银花颗粒是临床上常用的感冒、喉痹类非处方药，由金银花、连翘、黄芩3味药制成，具清热解毒、凉血消肿功效。绿原酸是金银花的主要有效成分，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用[1]。现行检验标准中只有金银花主要成分绿原酸的化学鉴别方法[2]，不但专属性差，且无法控制其含量，笔者采用高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量，以更好地控制药物质量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦);AUW 120 D型电子天平(日本岛津);SK 8200 LH型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。复方金银花颗粒(市售品);绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110753－200413);乙腈为色谱醇，水为重蒸水，其他试剂为分析醇。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent TC－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.4%磷酸溶液(13∶87);流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

称取复方金银花颗粒3 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密称取绿原酸对照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(10℃以下保存);取对照品贮备液2 mL，用50%甲醇稀释至10 mL，摇匀，作为对照品溶液。按处方量制备缺金银花的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。结果表明，阴性对照品溶液不干扰绿原酸的测定。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 1，2，3，4，5 mL，用 50%甲醇稀释至 10 mL棕色量瓶中，摇匀。取上述溶液，分别进样10 μL。以进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=407.6 X+5.44，r=0.999 5(n=5)。结果表明，绿原酸进样量在 0.2 ～1.0 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液，进样10 μL，重复5次，记录对照品峰面积。结果的 RSD=0.9%(n=5)。

重复性试验:精密称取同一批样品5份，按照供试品溶液制备方法制备溶液，注入液相色谱仪测定绿原酸含量。结果的 RSD=1.5%(n=5)。

加样回收试验:称取已知含量的复方金银花颗粒1.5 g，按供试品溶液制备方法处理，精密量取续滤液5 mL，分别置9个25 mL棕色量瓶中，每3份为1组，每组分别加对照品贮备液1.2，1.5，1.8 mL，加50%甲醇至刻度，摇匀，依法测定。结果见表1。

表1 绿原酸加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

分别称取3批样品3 g，按供试品溶液制备方法制备溶液，取上述供试品溶液和对照品溶液，进样10 μL，按外标法以峰面积计算绿原酸的百分含量。结果批号为090613，090415，090809的3批样品中绿原酸含量分别为 46.8，40.5，35.9 mg/袋。

3 讨论

绿原酸稳定性较差，易分解，故贮备液一定要在10℃以下保存，且所用玻璃仪器应为棕色以避光。3批样品中绿原酸含量差异较大，说明生产中没有严格控制投料，或金银花药材中绿原酸含量差异较大。笔者所用高效液相色谱法测定绿原酸含量，方法准确、快速、简便、重现性好，可作为产品中绿原酸的含量测定方法。

[1]何显忠，兰荣德.金银花的药理作用与临床应用[J].时珍国医国药，2004，15(12):865－867.

[2]WS3－B－1985－95，卫生部颁药品标准·中药成方制剂(第十七册)[S].