大黄黄连泻心汤、理中丸对水浸应激型、幽门结扎型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清COR含量的影响

李冀，李胜志，柴剑波，毕珺辉，胡晓阳

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

中医证候动物模型的研究，一直是中医药现代研究的焦点，也是难点，目前实验性消化性溃疡的动物模型造模方法比较丰富，但不能充分体现中医辨治的特点，使得现代疾病与中医证的紧密关系不能很好得到体现，本研究在“病证结合”理论基础上，将消化性溃疡病与中医寒、热证相结合，建立实验性胃溃疡寒、热证型动物模型，实加经典寒、热方剂干预，通过对血清皮质醇含量的测定，揭示胃溃疡寒、热证证候实质及方证相应规律。

1 实验材料及药物制备

1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠，黑龙江中医药大学药物安全性评价中心(GLP)，合格证号SCXK(京)2007－0001。

1.2 实验用药 热因素:将辣椒粉过120目筛，溶入60%无水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混悬液。寒因素:氢氧化钠(NaOH)，称取6g NaOH，溶入500ml双蒸水中，配成0.3mol/L浓度。冰水:冷冻保存，使用时提前取出溶化。大黄黄连泻心汤、理中丸:按原方药量及比例制备，其中，大黄黄连泻心汤浓缩至每毫升含0.5g生药量，理中丸浓缩至每毫升含1g生药量的液体，冰箱存储备用。

1.3 实验试剂 盐酸:上海化学试剂采购供应站。乙醚(分析纯级):上海化学试剂采购供应站。NaOH:天津市博大化工有限公司。甲醛(分析纯级):天津市博大化工有限公司。冰乙酸:上海化学试剂采购供应站生产。COR检测试剂盒:美国RD公司。

2 实验方法

2.1 分组 各取用Wistar大鼠，体质量180～220g，雌雄各半，给予标准的大鼠食物和水，实验前大鼠在实验室内习服7天。幽门结扎型取140只大鼠按体重随机分为6组:即寒假组(寒因素+假手术)30只、热假组(热因素+假手术)30只、寒幽组(寒因素+幽门结扎)30只、热幽组(热因素+幽门结扎)30只、模幽Ⅰ组(幽门结扎)10只、空白对照组10只。水浸应激模型取140只大鼠按体重随机分为6组:即单寒组(单纯寒因素)30、只单热组(单纯热因素)30只、寒水组(寒因素+水浸应激)30只、热水组(热因素+水浸应激)30只、单水组(水浸应激模型)10只、空白对照组10只。

2.2 造模方法

2.2.1 胃寒、热模型［1］

2.2.2 束缚水浸应激型胃溃疡模型［3－4］

2.2.3 幽门结扎型胃溃疡模型［5］

2.2.4 假手术方法［4］

2.3 实验步骤

2.3.1 水浸应激型胃溃疡寒、热证模型的建立及寒、热方剂干预实验

将各组动物分别按上述胃寒、热证造模方法，进行寒、热因素灌胃，给予相应造模剂;模型组及空白对照组则给予等体积生理盐水，连续7d。寒、热因素造模后，将受试大鼠(除空白对照组、模水组)在各自组别内按体重随机分成3组:即热水、热水大、热水理;寒水、寒水大、寒水理;单热、单热大、单热理;单寒、单寒大、单寒理。按组别，各给药组按组别分别给予相应受试方剂，大黄黄连泻心汤剂量1.8g/Kg体重，理中丸剂量3.6g/Kg体重;日2次，连续4d。水应激法造模前30min再给药1次。其它组给予等体积生理盐水，连续4d;末次给药后将受试大鼠禁食不禁水30h(注意勿使动物食入粪便和垫料等杂物，以免影响造模结果)。水浸应激型胃溃疡造模开始前30分钟，再给药1次。

2.3.2 幽门结扎型胃溃疡寒、热证模型的建立及寒、热方剂干预实验

寒、热因素造模方法同上。造模后将受试大鼠(除空白对照组、模幽组)在各自组别内按体重随机分成3组:热幽、热幽大、热幽理;寒幽组、寒幽大、寒幽理;热假、热假大、热假理;寒假组、寒假大、寒假理。按组别，各给药组按组别分别给予相应受试方剂，方法同上。末次给药后将受试大鼠禁食不禁水30h，将相应组别分别行幽门结扎术及假手术，并于术前2h灌胃相应药物1次，术中由十二指肠分别给予干预药物。

2.4 实验取材 分别于水浸应激7h后，幽门结扎术后18h，取血，分离血清待测。

3 统计方法

所有数据通过Spss13.0软件包用单因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法进行两两比较检验，用(±s)表示结果。

4 实验结果

4.1 寒、热方剂对水浸应激型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清COR含量的影响

表1 水浸应激型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(±s)

表1 水浸应激型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(±s)

注:与空白组比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与热水组比较△P＜0.05;与单热组比较☆☆P＜0.01。

组别 n COR(ng/ml)10 31.33 ±10.46单水 10 44.28 ±13.79＊△寒水 8 41.39 ±8.99＊△单寒 10 34.29 ±8.77☆☆热水 9 60.61 ±16.70＊＊单热 10 47.93 ±8.68空白＊＊△

由表1可知:除单寒组外各模型组血清COR的含量均明显高于空白对照组，具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，以热水组含量升高显著。热水组与单水、单热组比较有显著性差异(P＜0.05);热水与寒水比较升高明显，有显著性差异(P＜0.05);单热与单寒组比较升高明显，具有显著性差异(P＜0.01)。

表2 寒、热方剂对水浸应激型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(±s)

表2 寒、热方剂对水浸应激型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(±s)

组别 n COR(ng/ml)41.39 ±8.99寒水大 7 40.28 ±11.55寒水理 9 33.75 ±8.97单寒 10 34.29 ±8.77单寒大 8 36.08 ±7.94单寒理寒水8 9 37.89 ±10.02

表3 寒、热方剂对水浸应激型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(±s)

表3 寒、热方剂对水浸应激型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(±s)

注:与单热组比较，☆P ＜0.05;与热水组比较，△△P ＜0.01。

组别 n COR(ng/ml)热水9 51.15 ±16.68 60.61 ±16.70热水大 8 35.97 ±10.33△△热水理 8 50.27 ±12.26单热 10 47.93 ±8.68单热大 8 36.68 ±12.68☆单热理8

从表2、3可知，热水大、单热大与热水、单热组比较血清COR的含量明显降低，有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。

4.2 寒、热方剂对幽门结扎型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清COR含量的影响

表4 幽门结扎型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(±s)

表4 幽门结扎型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(±s)

注:与空白组比较*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与热幽组比较△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

组别 n COR(ng/ml)10 30.50 ±7.84 10 33.59 ±7.97模幽 10 42.81 ±8.39＊△△寒幽 10 42.93 ±10.25*热幽 10 57.33 ±10.78＊＊单热假 10 44.73 ±9.42＊△单寒假空白

由表4可知:除单寒假组外各模型组血清COR的含量均明显高于空白对照组，具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，以热幽组含量升高显著。热幽与模幽、热假组比较血清COR的含量明显升高，具有显著性差异(P ＜0.05或P ＜0.01)。

表5 寒、热方剂对幽门结扎型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(±s)

表5 寒、热方剂对幽门结扎型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(±s)

组别 n COR(ng/ml)10 42.93 ±10.25寒幽理 10 44.22 ±12.23寒幽大 10 33.60 ±9.62单寒假 10 30.50 ±7.84寒假理 10 32.54 ±9.68寒假大寒幽10 34.84 ±9.05

表6 寒、热方剂对幽门结扎型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(±s)

表6 寒、热方剂对幽门结扎型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(±s)

注:与热幽组比较，△△P＜0.01;与热假组比较，★P ＜0.05。

组别 n COR(ng/ml)10 57.33 ±10.78热幽理 10 59.11 ±8.85热幽大 10 40.61 ±7.76△△单热假 10 44.73 ±9.42热假理 10 46.31 ±13.22热假大 10 34.41 ±11.45热幽★

从表5、6可知:热幽大、热假大与热幽、热假模型组比较血清COR的含量明显降低，具有显著性差异(P ＜0.05 或 P ＜0.01)。

5 讨论

在应激反应中，肾上腺被认为是一个关键性的器官。机体受到刺激时，都会引起垂体的ACTH分泌增多，随之肾上腺皮质功能增强，分泌出大量的皮质醇，从而提高机体的抵抗能力，即应激反应。然而，过强的刺激又会出现负面的并发症，最常见的是溃疡的发生。近年来，有研究发现皮质醇水平与溃疡有一定的关系，应激状态能产生溃疡，溃疡病变的程度与皮质醇水平明显相关，预先给予抑制皮质醇产生的药物可防止溃疡的发生。在应激时血浆皮质醇分泌增多是最重要的一个反应，具有重要的生理意义，对机体抵抗有害刺激起着极为重要的作用。

实验结果表明，本研究所建立的水浸应激型、幽门结扎型胃溃疡寒、热证病证结合动物模型具有可行性。束缚水浸及幽门结扎皆属于一种应激反应，故单纯证模型皆见COR含量增加，施加的热因素对模型的COR含量体现出明显的影响，故血清COR的含量在热性溃疡模型中升高最为显著，发挥了损伤作用，可作为临床溃疡热证的微观指征。其作用机制可能为热证造模后中枢神经系统通过激活垂体－肾上腺轴导致皮质激素分泌增加，破坏胃黏膜保护屏障，从而加速溃疡的发生。经寒性方剂大黄黄连泻心汤治疗后，各热性模型血清COR的含量均有明显降低，但对寒性模型COR的含量无影响。可知，寒性方剂大黄黄连泻心汤预防水浸应激型胃溃疡热证、幽门结扎型胃溃疡热证的作用机制可能与抑制皮质醇分泌，提高机体抗应激能力有关。说明在溃疡病的病理状态下，寒性方剂通过“方证相应”降低热证模型大鼠血清COR的含量而达到预防溃疡的目的。

［1］ 李冀，谢田，毕珺辉，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对幽门结扎型、醋酸涂抹型胃溃疡寒热证模型大鼠胃组织PGE2含量的影响［J］.中医药信息，2011，28(2):27 －31.

［2］ 毕珺辉，李冀，谢田，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对四种模型大鼠血清PAF含量的影响［J］.中医药学报，2011，39(2):51－55.

［3］ 李冀，谢田，柴剑波，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对幽门结扎型、醋酸涂抹型胃溃疡寒热证模型大鼠血清NT含量的影响［J］.中医药学报，2011，39(1):38 －41.

［4］ 李冀，谢田，柴剑波，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对幽门结扎型、醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清TXB2含量的影响［J］.中医药学报，2011，39(4):14 －16.

［5］ 李冀，谢田，于海，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对消炎痛型及水浸应激型胃溃疡寒热证模型大鼠胃组织EGF、TGF－a含量的影响［J］.中医药信息，2011，28(5):52 －55.