大孔树脂分离纯化荆芥中的总黄酮

陈 静，杨 明

(1.广东省深圳市龙岗中心医院药剂科，广东 深圳 518116; 2.江西国药有限责任公司药物研究所，江西 南昌 330052)

大孔树脂分离纯化荆芥中的总黄酮

陈 静1，杨 明2

(1.广东省深圳市龙岗中心医院药剂科，广东 深圳 518116; 2.江西国药有限责任公司药物研究所，江西 南昌 330052)

目的 筛选分离纯化荆芥总黄酮的最佳树脂。方法 以荆芥中总黄酮的各种静态吸附和动态吸附参数为指标，确定最佳的大孔吸附树脂。结果 在试验条件下，AB－8型树脂对荆芥总黄酮的分离纯化效果最好。结论 AB－8型大孔吸附树脂能有效分离纯化荆芥中的总黄酮。

荆芥;黄酮类化合物;大孔吸附树脂

荆芥是传统的辛温解表药，用于治疗感冒、头痛、麻疹、疮疡初起等。近年的研究表明，荆芥具有解热降温、镇静、镇痛、抗炎、止血、抑制心肌收缩、祛痰平喘、抗氧化等药理作用。目前从荆芥中分离出的主要化学成分有黄酮类、酸类、酚类化合物，其穗状花序含有单萜类化合物，荆芥挥发油主要含具特殊香气的胡薄荷酮和薄荷酮等化合物[1－2]。大孔吸附树脂分离技术是20世纪60年代末发展起来的继离子交换树脂后的分离新技术之一。大孔吸附树脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物，广泛应用于制药及天然植物中活性成分如黄酮、皂苷、内酯、生物碱等大分子化合物的提取分离[3]。笔者采用静态吸附法、动态吸附法及吸附动力学试验对5种大孔吸附树脂分离纯化荆芥总黄酮的效果进行了对比，现将结果报道如下。

1 仪器与试药

UV－2401型分光光度计(日本岛津公司);Sartorius BS110 s型电子天平。型号分别为 D－101，AB－8，HPD－100，HPD－400，HPD－450的大孔吸附树脂;荆芥(深圳市某药材公司);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 荆芥药材中总黄酮含量测定

2.1.1 溶液制备

称取一定量的荆芥干燥药材，用90%乙醇水浴回流提取3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用蒸馏水溶解，即得荆芥样品液。精确称取芦丁对照品28.2 mg，置100 mL量瓶中，用75%乙醇溶解并定容至100 mL，摇匀，得282 μg/mL的对照品溶液。

2.1.2 芦丁标准曲线的绘制

精密吸取对照品溶液 0，1，2，3，4，5 mL，分别置 25 mL 容量瓶中，分别加75%乙醇至10 mL，精密加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，静置6 min，精密加入10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，静置6 min，精密加入4%氧氧化钠溶液10 mL，再加75%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以第1管为空白，在510 nm波长处测定溶液的吸光度。以对照品溶液质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.013 723X－0.000 8，r=0.999 9(n=6)。结果表明，本品质量浓度在11.28～56.40 μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

2.1.3 总黄酮测定

取待测样品2份，减压浓缩为干浸膏，取适量干浸膏用甲醇溶解，按2.1.2项下方法测定样品的吸光度，并计算样品中总黄酮的含量。

2.2 树脂预处理[4]与处理

取上述5种型号的大孔树脂，先用水漂洗去除白色混浊物，然后用95%酒精浸泡，再用大量蒸馏水洗净。以湿法将树脂加入到层析柱中，用95%的乙醇洗至流出液加蒸馏水无白色混浊，再用蒸馏水以同样的流速洗至中性，即可。准确称取预处理后的湿树脂各2 g，置具塞磨口三角瓶中，加入荆芥样品液25 mL，25℃恒温振荡24 h(振荡频率120 r/min)，过滤，保留滤液，用蒸馏水洗涤树脂，再将树脂浸泡在70%乙醇中，以25℃恒温振荡24 h解吸，测定各液中总黄酮的质量浓度。

2.3 树脂对荆芥中总黄酮的选择性

研究了5种树脂对荆芥总黄酮的选择吸附性。计算公式为:吸附量=V(C0－C1)/m，吸附率 =(C0－C1)/C0×100%，解吸量 =C2·V/m，解吸率=C2/(C0－C1)×100%。式中 C0为吸附前样液中总黄酮质量浓度，C1为吸附后上清液中总黄酮质量浓度，C2为解吸液中总黄酮质量浓度，V为样液体积，m为湿树脂质量。

表1 不同树脂对荆芥总黄酮的吸附和解吸能力

由表1可见，AB－8型大孔树脂对荆芥中总黄酮的吸附和解吸能力都是最强的，所以选择AB－8型树脂提取荆芥中的总黄酮。

2.4 静态吸附与动态吸附试验

2.4.1 静态吸附等温线的建立

准确称取10 g上述各型湿树脂，置具塞三角瓶中，加一定质量浓度的荆芥样品液各50 mL，于15，25，32℃下静态吸附24 h，每隔3 h取样1.0 mL，测定各时段取样液中总黄酮质量浓度，绘制静态吸附等温线。静态吸附试验表明，24 h树脂完全达到吸附平衡，根据公式计算吸附量 q。q=V0(C0－C1)/m。式中 V0为初始体积，C0为初始总黄酮质量浓度，C1为总黄酮溶液的平衡质量浓度，m为湿树脂的质量。以吸附时间为横坐标、吸附量为纵坐标绘制静态吸附等温线。AB－8型树脂对荆芥中总黄酮的吸附等温线如图1所示。

图1 AB－8型树脂的总黄酮吸附等温线

可见，AB－8型树脂在25℃时的总黄酮吸附效果最好，温度过高或过低时，树脂的平衡吸附量均下降。

2.4.2 静态吸附动力学曲线的建立

准确称取10 g上述各型湿树脂，置具塞三角瓶中，加一定质量浓度的荆芥样品液各50 mL，于25℃下静态吸附24 h，每隔2 h取样1.0 mL，测定各时段取样液中总黄酮质量浓度，绘制吸附等温线。吸附动力学特征反映的是树脂对样品分子的吸附随时间的变化。经过 i次取样后，总黄酮质量浓度(Ci)与吸附量(q)之间的关系可用公式 q=Σ(Ci－1－Ci)(V0－0.5 i)/m(i=1～ n)表示。式中V0为初始体积，m为湿树脂的质量。以吸附时间(t)为横坐标、剩余质量浓度(Ci)为纵坐标绘制吸附动力学曲线。AB－8型树脂对总黄酮的吸附动力学曲线见图2。

图2 25℃时AB－8型树脂的总黄酮吸附动力学曲线

可见，AB－8型树脂对总黄酮的吸附量在4 h内较大，吸附速率快，4～6 h内吸附速率变慢，6 h后趋于平缓，在6 h时吸附量达到最大，即静态吸附在6 h时达到饱和。

2.4.3 静态解吸条件选择与优化

称取AB－8型树脂16 g，置烧杯中，加入一定质量浓度的荆芥样品液100 mL，静态吸附24 h，滤出树脂，过滤后按质量平均分成8份，分别置8个锥形瓶中，各加入10%，30%，50%，60%，70%，80%，90%，100%的乙醇溶液，静态解吸24 h，抽滤，并用各自的洗脱剂冲洗树脂，合并入滤液，置100 mL量瓶中，得到洗脱液，分别测定总黄酮含量，并计算解吸量。对于非极性树脂，一般洗脱剂的极性越小，洗脱力越强。笔者以乙醇水溶液作为洗脱剂，比较了不同浓度的乙醇水溶液的解吸量，洗脱效果见图3。

图3 不同醇度的洗脱剂对总黄酮解吸量的影响

可见，当醇度为70%时，解吸量最大，因此选择70%的乙醇作为洗脱剂。

2.4.4 动态吸附试验

分别称取各型树脂25 g各4份，湿法装入4根3 cm×50 cm色谱柱中。选择 4 种质量浓度的荆芥样品液(2.0，2.5，3.5，4.5 g/L)，加入量依次为 300，250，200，150 mL，以 2.0 mL/min 的上样速度用70%乙醇洗脱，洗脱液定容至500 mL，测定总黄酮含量后浓缩，烘干，并称定洗脱物质量，结果见表2。

表2 荆芥动态吸附试验考察结果

从表2可以看出，上样液质量浓度为2.5 g/L时，洗脱的总黄酮量最大，纯度最高，上样液的质量浓度过高或过低都对总黄酮的洗脱量有影响。

3 讨论

本试验结果表明，荆芥以90%乙醇为溶剂，水浴回流提取3次，总黄酮提取效果较好。5种树脂对荆芥中总黄酮的选择吸附性研究结果表明，AB－8型树脂对荆芥中总黄酮的吸附和解吸能力都是最强的，当洗脱剂醇度达70%时，解吸量达到最大。

[1]《中华本草》编委会.中华本草第十九卷(7)[M].上海:上海科学技术出版社，1999:194－199.

[2]刘志勇，王 莉，鲁建江，等.荆芥中总黄酮的微波提取及含量测定[J].武汉植物学研究，2002，20(3):243－244.

[3]高荣海，李长彪，刘长江，等.大孔吸附树脂对大豆异黄酮吸附性能的研究[J].食品工业科技，2006(10):49－56.

[4]徐 晶，陈再兴，袁昌鲁.大孔吸附树脂富集纯化黄芩总黄酮的工艺研究[J].中医药学刊，2006，24(9):1 648－1 649.

Study on Separation and Purification of Total Flavonoids from Schizonepeta Tenuifolia by Macroreticular Adsorptive Resin

Chen Jing1，Yang Ming2
(1.Department of Pharmacy， Longgang Central Hospital， Shenzhen， Guangdong， China 518116;2.The Research Institute of Guoyao Co.，Ltd.，Nanchang， Jiangxi， China 330052)

Objective To distinguish the best resin for the screen，separation，and purification of the total flavonoids from Schizonepeta tenuifolia among five different types of polar macroporous resins.Methods To examine and analyze the level of parameters on static and dynamic adsorption of the total flavonoids in Schizonepeta tenuifolia to select the best macroporous resin.Results It has been found that，putting all indicators together，the AB－8 resin has the best incentive effect on the separation and purification ofSchizonepeta tenuifolia under all kinds of experimental conditions.Conclusion AB－8 macroporous resin is the most effective macroporous resin to law the separation and purification of the total flavonoids from Schizonepeta tenuifolia.

Schizonepeta tenuifolia;flavonoids;macroporous resin

TQ461;R282.71

A

1006－4931(2011)03－0030－02

2010－03－22)