大蒜素联合替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响

王若天，邝健辉

(1.琼海市人民医院，海南 琼海 571400;2.中山大学 附属第五医院，广东 珠海 519000)

大蒜素是大蒜的主要活性成分，其化学结构为三硫二丙烯，具有广谱的抗菌、抗病毒、降血压、降血脂的作用。近年来发现其还有抗癌作用［1］。5-氟尿嘧啶(5-Fu)虽已应用于肝癌的治疗，但因易产生耐药而大大降低了抗癌有效性。替加氟是5-Fu的衍生物，其化疗指数为5-Fu的2倍，而毒性仅为5-Fu的1/4～1/7。本研究观察大蒜素联合替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响，为临床肝癌治疗的联合用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

人肝癌HepG2细胞，中科院上海细胞库;大蒜素(纯度:99.5%)，上海禾丰制药公司;替加氟注射液(5 mL∶0.2 g)，山东齐鲁制药有限公司;DMEM培养基，GIBCO公司;新生小牛血清，上海科兴生物科技有限公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)，Sigma公司。

Sunrise酶标仪，奥地利TECAN公司;800B型低速离心机，上海安亭科技仪器厂。

1.2 细胞培养及分组

培养人肝癌细胞株HepG2细胞，培养条件:含10%小牛血清、100 u/mL青霉素、100 mg/mL链霉素的DMEM培养基，置于37℃、5%CO2培养箱待细胞呈单层生长，待培养瓶铺满75%时传代，取对数生长期细胞用于实验［2］。细胞以1×104/mL接种于96孔板，每孔100 μL，培养过夜后随机分为4组。对照组、大蒜素组(50 μg/L)、替加氟组(5 μg/mL)和联合组(50 μg/L 大蒜素 +5 μg/mL 替加氟)，每组6复孔。每组设2个时间点，分别观察24和48 h时，各组细胞增殖情况。

1.3 MTT比色法检测各组人HepG2肝癌细胞增殖情况

分别于加药作用24和48 h后，每孔加入5 g/L MTT溶液20 μL，继续孵育4 h终止培养，吸弃培养液，每孔加入二甲亚砜(DMSO)100 μL，置于摇床上低速振荡10 min，于490 nm波长处测定吸光度(A)值，细胞抑制率(IR)=1-(A药物组/A对照组)×100%。用金氏公式进行联合用药分析:q=E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)，其中E(a+b)为合并用药抑制率，Ea和Eb分别为A药和B药单用的抑制率。q值介于0.85～1.15表示药物作用单纯相加，q＞1.15～2.0说明药物有协同作用，q＜0.85表示药物间拮抗［3-4］。

1.4 统计学方法

2 结果

大蒜素与替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响见表1。大蒜素组、替加氟组和联合组A值均明显低于对照组(P＜0.05);联合组A值明显低于单独用药组(P＜0.05);大蒜素与替加氟具有协同抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用(q=1.45)。

3 讨论

大蒜素不仅对多种真菌和细菌有较强的杀灭作用，而且具有抗肿瘤作用，近年研究表明，其对多种恶性肿瘤有明显抑制作用。曾纪晓等［5］研究发现，500μg/L以上大蒜素能直接杀灭人HepG2肝癌细胞，50 μg/L的大蒜素具有中等抑制HepG2肝癌细胞增殖作用。

表1 大蒜素与替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响(n=6，±s)

表1 大蒜素与替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响(n=6，±s)

与对照组比较:1P＜0.05;与大蒜素组比较:2P＜0.05;与替加氟组比较:3P＜0.01

组 别 A值24 h 48 h IR/%24 h 48 h对照组0.762±0.051 0.761±0.048 - -大蒜素组0.574±0.0471 0.624±0.0331 10.35 16.50替加氟组0.414±0.0361 0.468±0.0201 27.26 34.27联合组 0.223 ± 0.0211，2，30.314 ± 0.0371，2，354.83 46.93

为进一步探索肝癌联合化疗途径，本研究在细胞水平观察大蒜素联合替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响，结果显示，大蒜素和替加氟单独用药均能抑制人HepG2肝癌细胞增殖，两药联合抑制细胞增殖的效果更加明显，具有协同作用。替加氟是5-Fu的衍生物，在体内经肝脏活化转换为氟尿嘧啶而发挥其抗肿瘤活性，干扰DNA与RNA合成，主要作用于S期，为细胞周期特异性药物;其抗瘤谱与5-Fu相同，但化疗指数是5-Fu的两倍。大蒜素为百合科植物大蒜鳞茎中提取的多种烯丙基有机硫化合物，可通过上调人肝癌细胞Fas/FasL系统的表达及线粒体途径来诱导肝癌细胞的凋亡［6］，两药联合既能抑制肝癌细胞增殖，还促进其凋亡。

［1］ 吴 洁，杨静静.大蒜素/有机凹凸棒黏土/海藻酸钠/壳聚糖复合微球的制备及其性能［J］.中国生化药物杂志，2011，32(6):433-436.

［2］ 任凤莲，陈莎子，代 军，等.大蒜素提取检测及对肝癌细胞的灭活效果研究［J］.光谱实验室，2011，28(1):374-377.

［3］ 李玉生，黄 黎，吕其军，等.干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞生物学行为的影响［J］.山东大学学报(医学版)，2011，49(9):48-52.

［4］ 王 丽，李 娟，段成刚，等.曲古抑菌素 A与5-氟尿嘧啶协同对肝癌细胞HepG2的抑制作用［J］.现代预防医学，2012，39(4):933-935.

［5］ 曾纪晓，何晓顺，马 毅，等.大蒜素对肝癌细胞生长的抑制作用［J］.中国普通外科杂志，2009，18(7):691-694.

［6］ 吕 锋，张 园，孙 谦，等.大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用［J］.江苏医药，2010，36(23):2810-2812.