乐胃饮对慢性萎缩性胃炎大鼠＊胃黏膜作用的扫描电镜观察

朱飞叶，吴晋兰，徐 珊

(1.浙江中医药大学分析测试中心，杭州 310053;2.杭州市余杭区第五人民医院，杭州 311100;3.浙江中医药大学基础医学院，杭州 310053)

乐胃饮是由老中医的经验方化裁而来，以山药、薏苡仁、陈皮为主药，具有清补脾胃、健运中州之功效。临床上，对慢性萎缩性胃炎具有良好的治疗效果［1］。为此，我们通过建立慢性萎缩性胃炎大鼠模型，采用扫描电镜(SEM)技术从超微结构进一步阐明乐胃饮对胃黏膜的保护机制。

1 材料与方法

1.1 动物、药物、主要试剂及仪器

健康8周龄雄性Wistar大鼠60只，体质量190g～210g，由浙江中医药大学实验动物中心提供，按清洁级要求饲养(实验动物许可证号SYXK(浙)2008-0115)。

淮山药、炒薏苡仁、陈皮由浙江中医药大学第二门诊部提供，按2∶2∶1比例水煎浓缩成生药浓度为0.25g/ml、0.5g/ml、1g/ml的溶液。维酶素片由新乡恒久远药业有限公司提供(批号20090805)，碾碎后用蒸馏水配制成浓度为0.015g/ml的混悬液。甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)由中国药品生物制品检定所提供，用蒸馏水配成1g/L的存储液。水杨酸钠由上海化学试剂采购供应五联化工厂提供(分析纯，批号20090701)，用蒸馏水配成2%水杨酸钠溶液。HITACHIS-3000N扫描电子显微镜;HITACHI E-1010离子溅射仪。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、模型制备及药物干预 大鼠适应性饲养7d后，按随机数字表法分为正常组、模型组、维酶素组、乐胃饮低、中、高剂量组。正常组充足供食，自由饮水。其余大鼠采用多重刺激法制备慢性萎缩性胃炎动物模型［2］。MNNG存储液于临用前将其稀释成100μg/ml浓度的饮用液，避光作为大鼠自由饮水，每天更换。水杨酸钠溶液每周1、4各灌胃1次，2ml/只，灌胃前后禁食禁水1h。第5周起单日禁食，双日充足供食，连续8周。每组随机抽取1只大鼠进行胃黏膜组织学检查，确定模型成功后分组治疗。维酶素组按0.2g/kg灌胃，乐胃饮低、中、高剂量组分别按4g/kg、8g/kg、16g/kg灌胃，正常组和模型组以等量生理盐水灌胃，连续给药4周，并记录各组大鼠饮食、活动、毛发、体重的变化。

1.2.2 标本采集和处理 第12周末处死所有大鼠，剖腹，距贲门和幽门1.5cm离断取出全胃。沿胃大弯侧剖开，冰生理盐水冲洗后，在胃窦部取5mm×5mm大小胃黏膜组织块，迅速固定于预冷的2.5%戊二醛内，置4℃冰箱，充分固定后各组抽取2例，用0.1mol的磷酸缓冲液充分冲洗，再用1%锇酸固定 1.5h，梯度脱水(分别用 50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇、纯丙酮、醋酸异戊酯脱水，每次15min)，二氧化碳临界点干燥、喷金，扫描电镜下观察。

1.3 统计学处理

采用SPSS16.0统计软件处理。计量资料用均数±标准差(±s)表示，多组数据统计采用单因素方差分析。组间两两比较，方差齐性时用 LSD检验，方差不齐时用Dunnett’s T3检验，P＜0.05为差异显著性标准。

2 结果

2.1 大体观察

正常组大鼠饮食正常，活动自如，毛发有光泽，体重逐渐增加，肉眼观察其胃黏膜色泽鲜红，组织弹性好;模型组大鼠出现食量减少、活动减少、毛发枯槁、弓背、喜扎堆、体重明显下降、胃黏膜变薄、弹性减弱，可见明显暴露的血管，局部糜烂;乐胃饮低、中、高剂量组和维酶素组大鼠的一般情况及胃黏膜大体情况随着治疗有不同程度的恢复。

2.2 各组大鼠体重的比较

表1显示，与正常组比较模型组大鼠体重明显下降(P＜0.01)，与模型组比较，乐胃饮各剂量组及维酶素组体重均明显升高(P＜0.01)，乐胃饮中剂量组体重较维酶素组及乐胃饮高剂量组降低(P＜0.05)。

表1 乐胃饮对慢性萎缩性大鼠体重变化的影响(±s)

表1 乐胃饮对慢性萎缩性大鼠体重变化的影响(±s)

注:与正常组比较:☆☆P＜0.01;与模型组比较:△△P＜0.01;与维酶素组比较:○P＜0.05;与乐胃饮中剂量组比较:◇P＜0.05

组别 例数 体重(g)331.38±22.46模 型 组 8 260.88±18.68☆☆维 酶 素 组 8 310.25±23.46△△乐胃饮低剂量组 8 299.38±16.12△△乐胃饮中剂量组 8 290.00±14.69△△○乐胃饮高剂量组 8 312.12±9.83正常组8△△◇

2.3 扫描电镜观察

正常组:大鼠胃黏膜上皮细胞紧密相连，沿着胃腺开口环形排列，结构完整，胃小凹清晰，被覆一层黏液(图 1-①)。

模型组:大鼠胃黏膜细胞萎缩，排列紊乱，上皮广泛破溃、脱落，出现大小不等、形状不规则的局灶性黏膜糜烂(图1-②)。

维酶素组:大鼠胃黏膜细胞萎缩程度较轻，细胞表面粗糙，少量破溃(图③)。

乐胃饮低、中剂量组:大鼠胃黏膜细胞萎缩程度较轻，细胞表面粗糙，可见黏液分泌，少量细胞破溃(图 1-④⑤)。

乐胃饮高剂量组:大鼠胃黏膜细胞萎缩不明显，可见黏液分泌，偶见细胞破溃(图1-⑥)。

3 讨论

慢性萎缩性胃炎是临床常见病，中医属“胃痛”、“嘈杂”、“痞满”等范畴，其发病与外邪侵袭、饮食不节、情志不舒、脾胃虚弱有关，主要病机为脾运不健，水湿不运，清阳不升，浊阴不降。临床胃镜及组织学检查显示胃黏膜炎症、糜烂、萎缩、肠上皮化生、异型增生等病理改变［3］。本实验结果显示，采用水杨酸钠灌胃、自由饮用MNNG水溶液，结合饥饱失常等综合因素，可造成大鼠胃黏膜慢性损伤。从大体上看，与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜变薄，组织弹性减弱，可见明显暴露的血管。SEM进一步证实，模型组上皮层脱落明显，局部出现糜烂等病变，说明造模成功。

图1 各组大鼠胃黏膜扫描电镜观察

乐胃饮具有健脾理气之功效，方中淮山药补脾气而益胃阴，培补脾胃，性质平和;薏苡仁健脾渗湿，性微寒而不伤胃，益脾而不滋腻;陈皮理气运脾，调中快膈，性温和且燥而不烈。此方组方思想明确，配伍精炼，补其虚以助其健而无滞脾碍胃之虑，祛其湿以顺其性而无伤津耗液之弊，行其气而和其用而无耗气伤阴之害，充分体现了“健脾关键在运脾”的主旨［4］。现代药理研究证实，组方中山药具有抗菌消炎作用，且能修复上皮组织，促进皮肤溃疡面和伤口愈合，具有生肌作用［5］;薏苡仁具有增强机体体液免疫、镇痛、解热、抗炎等作用［6］;陈皮有促进小鼠胃排空和肠推进的作用，其挥发油对消化道有缓和的刺激作用，利于胃肠积气的排出［7］。既往的临床研究中，乐胃饮对慢性萎缩性胃炎有良好的效果。此项实验结果显示，乐胃饮能使慢性萎缩性胃炎大鼠体重增加。扫描电镜观察显示，其使裸露的大鼠胃黏膜上皮结构修复，表面结构基本完整，还可见到黏液分泌，说明乐胃饮保护了黏膜上皮细胞的功能，具有促进组织修复的效果。

［1］朱君华，徐 珊.乐胃饮治疗慢性萎缩性胃炎临床研究［J］.中华中医药杂志，2007，22(8):526-527.

［2］徐 珊，周嘉鹤，王常松，等.慢性萎缩性胃炎证病结合模型的复制［J］. 中国中医药科技，2008，15(1):6-8.

［3］陈新宇，姒健敏，朱有法.给药条件下表皮生长因子对萎缩性胃炎逆转作用研究［J］.中华消化杂志，2003，23(5):312-316.

［4］徐 珊，杨 青，成信法，等.乐胃饮对脾虚实验大鼠胃泌素和胃动素的影响［J］.中国医药学报，2004，19(1):20-22.

［5］李锋涛，陈 毓.山药的研究进展［J］.海峡药学，2008，20(10):91-93.

［6］张明发，沈雅琴.薏苡仁药理研究进展［J］.上海医药，2007，28(8):360-363.

［7］欧丽娟，刘启德.陈皮药理作用研究进展［J］.中国药房，2006，17(10):787-789.