益气养阴方对动脉粥样硬化大鼠免疫炎症因子hs-CRP、sVCA M-1、s ICAM-1影响的实验研究

谢 心 吴 坚 竺春玲 邵筱宏 丁亚琴（上海市中西医结合医院，上海200082）

动脉粥样硬化是目前危害人类健康的主要疾病，具有很高的致死率和致残率，其发病率呈逐年上升趋势。许多学者认为，动脉粥样硬化的发生与低水平慢性炎症状态密切相关[1-2]。目前，与动脉硬化发病关系最密切、研究最多的炎症因子是超敏C反应蛋白（hs-CRP）、可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）和血管内皮细胞黏附分子-1（sVCAM-1）。 本研究通过观察益气养阴方对动脉粥样硬化大鼠免疫炎症因子hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1的影响，挖掘干预动脉粥样硬化免疫损伤的有效中药复方，为中医药防治动脉粥样硬化提供一个研究思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物中国科学院上海斯莱克实验动物公司提供的SD雄性大鼠46只，4周龄，体重（200±10）g，清洁级，许可证号SCXK（沪）2003-0003。饲养地点：上海中医药大学动物实验中心。

1.1.2 实验药物益气养阴方（黄芪15g、党参20g、麦冬15g、五味子6g、枸杞子15g、桑寄生15g）由上海中医药大学中药制剂室制作，配成3g生药/mL溶液备用。普伐他汀钠，20mg/片，由上海三共制药有限公司生产。

1.2 实验方法

1.2.1动物分组大鼠适应性饲养后，根据体重随机分组编号。将46只SD大鼠随机分成4组：正常对照组10只，模型组12只，中药组12只，西药组12只。

1.2.2造模方法采用VitD3+高脂饲料喂养：将150g维生素D3（VitD3，每克含VitD31×105IU）溶解于375mL蒸馏水中，配制成0.4g/mL，即4×104IU/mL的溶液。高脂饲料85kg，配方：80.3%大鼠标准饲料、2%胆固醇、2%鱼粉、0.5%胆酸钠、

10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白砂糖（中国科学院上海斯莱克实验动物有限责任公司加工）。按7×105IU/kg的总剂量灌胃给予VitD3，分3d给完，之后每天喂高脂饲料15g，喂养8周。

1.2.3 动物饲养与给药正常对照组只给予基础饲料；其余各组动物以VitD3灌胃3d，并每天喂高脂饲料15g，喂养8周。8周后，除正常对照组外，其余各组随机取出2只杀死，解剖颈动脉、胸主动脉确定造模成功与否。在确定造模成功的前提下，以上各组在原有饲料喂养下，正常对照组、模型组给予同等剂量的生理盐水灌胃，中药组给予益气养阴方，西药组给予普伐他汀钠。药物剂量参照药典，按动物与成人的等效剂量换算。继续喂养4周。所有动物自由饮水。

1.2.4 中药血清的制备喂养满4周结束时将大鼠麻醉，腹主动脉取血，放入15mL离心管中，留作标本，静置1h后。3000r/min，离心0.5h，取上清，56℃水浴1h。用0.2μm滤器将各组血清分别注入1.5mLEppendorf管中，-20℃冰箱保存。

1.2.5 检测指标 超敏C反应蛋白（hs-CRP）采用乳胶免疫增强比浊法试剂盒，sVCAM-1、sICAM-1采用酶联免疫法（ELISA）检测。试剂盒购自上海达安生物技术公司。以美国Bio-Rad公司的全自动酶免分析仪检测。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件包进行数据统计。结果用（±s）表示。采用单因素方差分析，方差齐者用SNK法，方差不齐用Dunnett’s T3法。

2 实验结果

2.1 一般情况 整个实验期间，各组动物反应灵敏，皮毛色白、致密有光泽，进食活跃，活动良好，体重增长。实验过程中正常对照组、模型组、中药组及西药组大鼠均无死亡。

2.2 各组大鼠治疗后血清sVCAM，sICAM-1及hsCRP含量情况 结果显示，与模型组比较，益气养阴方能明显降低动脉粥样硬化大鼠hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1指标水平 （P＜0.01）；与西药组比较，在降低模型大鼠sVCAM和hsCRP方面亦具有一定优势（P＜0.05）。见表1。

表1 各组大鼠治疗后血清sVCAM、sICAM-1及hsCRP水平

3 讨论

益气养阴方是在经典名方生脉散基础上加减化裁而来，由黄芪、党参、麦冬、五味子、枸杞、桑寄生等6味中药组合而成。方中黄芪益气帅血，党参补中益气为君；麦冬、五味子滋阴养心；桑寄生、枸杞子滋补肝肾以培阴精之本。诸药合用，切中脉痹病机，药专力宏，共奏益气养阴之功。反映中医辨证论治的临床特色，抓住动脉粥样硬化“本虚标实”的病机特点[3]，体现治病必求本，益气养阴为先的特色。

超敏CRP是最广泛应用的炎症标志物，是反映低度、持续炎症的指标[4]。动脉粥样硬化常伴有炎症病变，超敏CRP可直接影响动脉粥样硬化斑块与血栓形成，且已被证实是慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素[5-6]。它在体外可激活补体，诱导内皮产生单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1），上调ICAM-1、VCAM-1，介导巨噬细胞摄入天然LDL，使单核细胞组织因子增加，引起动脉内膜损伤，最终导致斑块和血栓形成。非活化内皮细胞有低于正常的VCAM-1表达。标准的免疫组化方法检测不到正常血管上VCAM-1表达，在体内炎症的病理条件下血管内皮有VCAM-1表达[7]。VCAM-1在以上这些细胞表达同时分泌相应的sVCAM-1。研究认为VCAM-1介导的炎症过程在动脉粥样硬化发生中起着极其重要的作用[8]，在病变早期，VCAM-1主要是促单核细胞向内皮黏附、迁移，在进展期，则促进已迁入病灶的单核细胞位移，T淋巴细胞的激活，增加其他细胞与细胞间的相互作用。动脉粥样硬化被认为是炎症损伤的反应，血管内皮细胞损伤后表达黏附分子，VCAM-1介导炎症细胞黏附和侵入血管壁是动脉粥样硬化发生的早期步骤。随着病程进展，VCAM-1介导更多的细胞进入斑块，促使斑块发展，同时影响斑块的稳定性。尤其在糖尿病病人sVCAM-1的水平越高，其心血管事件的风险就越大。

本研究发现，益气养阴方能明显降低动脉粥样硬化大鼠血清hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1表达，这为我们挖掘干预动脉粥样硬化免疫损伤的有效中药复方来防治动脉粥样硬化进展提供了一个研究思路。

[1] 王瑞英，禹远远，王棉，等，血管内皮功能与2型糖尿病患者大血管病变的关系.中国老年学杂志，2010，30（12）：1730

[2] 蔡穗珍.2型糖尿病内皮功能紊乱与动脉粥样硬化.福建医科大学学报，2006，40（4）：416

[3] 孟国凡.动脉粥样硬化的中医病因病机初探.云南中医中药杂志，2004，25（2）：55

[4] 惠玉芬，王兴宁.超敏CRP与2型糖尿病及合并冠心病的关系分析.实用医技杂志，2008，15（8）1013

[5] 单倚玲.超敏CRP-血管疾病的独立危险因子.国外医学生化与检验分册，2004，25（1）：72

[6] Ohrona L，Ardissino D，Merlini P，et al.C.reactive protein elevation and early outcome in patientswith unstablepectofis.Am J Cardiol，1997，80（8）：1002

[7] Wu KK，AleksicN， BallantnyneCM，etal.sICAM had a significantincreasein therisk ofCHD event.Circulation，2003，107：1729

[8] Hwang SJ，Ballantyne CM，Sharrett AR，et al.Circulating adhesion moleculesVCAM-1，ICAM-1 and E-selectin in carotid atherosclerosis and incident coronary heart disease cases the Atherosclerosis Risk In Communities （ARIC） study.Circulation，1997，96：4219