不同加工方法对北沙参多糖免疫调节功能的实验研究

荣立新，鲁 爽，刘咏梅

(中国中医科学院广安门医院，北京 100053)

北沙参又名海沙参、野沙参、莱阳沙参、辽沙参等，为伞形科植物珊瑚菜 Glehnia littoralis Fr.Schmidt ex Miq.的干燥根，具有养阴清肺、益胃生津之功效，主要用于肺热燥咳、劳嗽痰血、热病津伤口渴。北沙参主要分布于山东、河北、内蒙，在辽宁、江苏、广东、福建等省区也有分布，其中以山东莱阳栽培历史最为悠久、产量大、质量好，故又名“莱阳沙参”。传统的药材加工方法是在夏秋两季采挖，除去须根，洗净，稍晾，置沸水中烫后除去外皮，或洗净直接干燥［1］。研究表明，多糖是其中主要成分，可增强机体免疫功能［2，3］。本实验分别对去皮北沙参和未去皮北沙参中的粗多糖提出，得去皮北沙参粗多糖(GLP1)和未去皮北沙参粗多糖(GLP2)。并以甲亢型阴虚小鼠为研究对象，比较GLP1和GLP2对阴虚小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响，揭示其滋阴作用的免疫调节机制，以此改进北沙参炮制工艺，为今后北沙参的炮制加工和临床应用开发提供实验依据［4］。

1 材料与仪器

1.1 动物

6～8周龄雄性昆明种小鼠，体质量20±2g，购于潍坊医学院实验动物中心(动物合格证号鲁动环字200007001号)。

1.2 药物

北沙参采自于山东省莱阳市胡城北沙参种植基地，经鉴定为伞形科植物珊瑚菜(Glehnia littoralis F.Schmidt ex Miq.)的根。去皮北沙参:取新鲜北沙参根略晾、理顺，先将根细端置沸水中略烫，再将整体置沸水中煮约5～10 min，至根皮易拨离时取出，刮去皮、干燥。不去皮北沙参:取新鲜北沙参根，用清水洗净、理顺、干燥。

1.3 试剂

小牛血清(杭州四季青生物材料公司)，甲状腺素片(莱阳生物化学制药厂)，利血平(上海医科大学红旗制药厂)，PRMI-1640培养液(美国Gibico公司)，MTT、ConA(华美生物工程公司)，羊抗小鼠IgM-生物素(北京中山生物公司)，所用试剂均为分析纯。

1.4 主要仪器

J2-MC BECKMAN高速冷冻离心机(Bechman公司)，HH型电热恒温水浴锅(江苏金坛市宏凯仪器厂)，Model450型酶标仪(美国BIO-RAD公司)，CO2培养箱(丹麦HETO公司)，超净工作台(苏州净化设备厂)。

2 方法

2.1 GLP的提取及含量测定

图1显示，分别称取去皮和不去皮北沙参根250g，采用文献法［5］分别制得去皮北沙参粗多糖(GLP1)和不去皮北沙参粗多糖(GLP2)，检测GLP1和GLP2含量分别为63.88%和47.17%。

图1 去皮和不去皮加工GLP的含量测定

2.2 动物分组及给药

小鼠64只随机分为正常对照组(生理盐水20 mL/kg)、模型组(生理盐水20 mL/kg)、GLP1高剂量组(800mg/kg)、GLP1中剂量组(600 mg/kg)、GLP1低剂量组(400 mg/kg)、GLP2高剂量组(800 mg/kg)、GLP2中剂量组(600 mg/kg)、GLP2低剂量组(400mg/kg)8组，每组8只。每日上午除正常对照组灌服生理盐水外，其余各组均灌胃给予甲状腺素片150 mg/kg和利血平1 mg/kg，下午GLP各剂量组分别灌胃给予受试药物，连续6d，各组动物实验前后各称量体质量1次，计算体质量增加值并观察其外观变化。

2.3 检测各组小鼠脾脏NK细胞杀伤活力

将各组动物于给药后第7天处死，取脾脏组织制备脾细胞悬液，参照文献［6］采用MTT比色法检测各组小鼠NK细胞对靶细胞的杀伤率(%)。

2.4 检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞转化功能

将各组小鼠给药后第7天处死，取脾脏组织制备脾细胞悬液，参照文献［6］采用MTT比色法检测各组小鼠刺激指数(SI)。

2.5 检测各组小鼠血清抗绵羊红细胞抗体IgM含量

将各组小鼠给药后第7天处死，取小鼠血清，参照文献［6］采用间接酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测抗绵羊红细胞抗体IgM的含量。

2.6 统计学方法

应用SPSS 13.0软件进行统计分析，采取两均数比较t检验。

3 结果

3.1 GLP1、GLP2滋阴作用的整体效应观察

表1显示，小鼠给予甲状腺素和利血平造模4 d后，开始出现体质量减轻、身体瘦长、躁动不安，部分出现两眼不张、行动迟缓甚至死亡。GLP1和GLP2各剂量组动物各种虚象较轻，正常对照组动物外观和行为均正常。模型组动物体质量增加值显著低于正常对照组，GLP1和GLP2各剂量组的体质量增加显著高于模型组，表明阴虚动物体质量降低，而GLP1和GLP2均能显著增加其体质量且呈量效关系，其中GLP1和GLP2高剂量组接近正常水平，2种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)各同剂量之间的作用比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3.2 GLP1、GLP2对模型小鼠脾脏NK细胞杀伤活力的影响

表1显示，模型小鼠脾脏NK细胞杀伤活力明显低于正常对照组(P＜0.01)，GLP1和GLP2的高剂量组均可显著提高阴虚小鼠的NK杀伤率(P＜0.05)，接近正常值。2种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)同剂量之间的作用比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3.3 GLP1、GLP2对模型小鼠T淋巴细胞转化的影响

表1显示，小鼠造模后，其刺激指数明显降低(P＜0.01)，GLP1和GLP2高、中剂量组对阴虚小鼠的脾脏T细胞转化功能均有显著增强的作用(P＜0.01，P＜0.05)，接近正常水平。2种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)各同剂量之间的作用比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

3.4 GLP1、GLP2对模型小鼠血清抗绵羊红细胞抗体IgM含量的影响

表2显示，模型小鼠血清IgM抗体水平与正常组比较明显降低(P＜0.05)，2种北沙参多糖的中剂量和低剂量组对IgM抗体的生成有显著增强作用(P＜0.05)。2种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)的各同剂量之间的作用比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

4 讨论

经调查，北沙参沸水烫后去皮的加工方法距今已有二三百年的生产加工历史。目前北沙参加工方法只是在民间使用，并没有经科学验证。去皮的原因和目的，一般认为一是为了外观好看，去皮北沙参外表黄白色，像生晒人参一样;二是减少气味;三是不易生虫。1960年卫生部药政局复湖北商业厅中西药管理处的电文中指出:“北沙参可不刮皮使用。”经研究证明，北沙参带皮使用可提高疗效，并可省工省时、减少因加工造成的药材损失，这在《中华人民共和国药典》1990年版及以后的各版药典中均有记载［7］。李峰等［8］也证实，在北沙参的醇溶性浸出物和水溶性浸出物中，去皮北沙参与带皮北沙参的浸出物含量差异无统计学意义，说明“去皮”对北沙参浸出物含量无明显影响。因此2010版《中华人民共和国药典》收录北沙参项下既保留了这种传统的加工方法，又提出不去外皮的产地加工方法，即洗净直接干燥后使用［9］。

表1 GLP干预对各组小鼠体质量变化和各项免疫功能指标的影响(±s)

表1 GLP干预对各组小鼠体质量变化和各项免疫功能指标的影响(±s)

注:与模型组比较:＊＊P＜0.01，*P ＜0.05;与正常组比较:△P＜0.05

组别 例数 给药剂量/(mg/kg) 体质量增加值/g NK细胞杀伤率(%)T细胞转化指数(SI) IgM(lgR)正 常 对 照 组 8 5.25±1.04＊＊ 30.01±0.05＊＊ 2.30 ±0.58＊＊ 4.10±0.02*阴 虚 模 型 组 8 2.57±1.07 18.73±0.03 1.08±0.15 3.60±0.04模 型 +GLP 1高 剂 量 组 7 800 4.71±1.11＊＊ 27.52±0.44＊＊ 1.67±0.36＊＊ 4.05±0.03模 型 +GLP 1中 剂 量 组 8 600 3.75±0.89* 22.10±0.09 1.46±0.32＊＊ 3.35±0.05＊△模 型 +GLP 1低 剂 量 组 7 400 3.43±1.40 20.47±0.17 1.03±0.18 3.15±0.03＊△模 型 +GLP 2高 剂 量 组 8 800 4.03±1.30＊＊ 25.6±0.02＊＊ 1.39±0.20＊＊ 3.95±0.02模 型 +GLP 2中 剂 量 组 8 600 3.89±0.99* 20.89±0.06 1.24±0.07* 3.25±0.05＊△模 型 +GLP 2低 剂 量 组 8 400 3.00±1.20 21.57±0.11 1.02±0.17 3.10±0.02＊△

文献记载，北沙参可增强细胞免疫、体液免疫功能［10～12］。本实验分别从去皮加工北沙参和未去皮加工北沙参的根药材中提取粗多糖GLP1和GLP2，观察其对阴虚症小鼠免疫功能的影响。结果表明，GLP1和GLP2均可使阴虚小鼠体质量显著增加;显著增强甲亢型阴虚小鼠脾脏NK细胞杀伤率和T淋巴细胞转化功能，提高血清IgM含量，且2种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)各相同剂量组之间的作用比较差异无统计学意义(P＞0.05)，说明北沙参的加工过程可省略“去皮”这道工序。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社，2005:66.

［2］石俊英，李宝国，牟彩萍.山东地产药材北沙参多糖含量测定［J］.山东中医药大学学报，2002，26(2):139-142.

［3］谭允育，康娟娟，王娟娟.沙参对正常小鼠免疫功能影响的实验研究［J］.北京中医药大学学报，1999，22(6):39-24.

［4］刘波，刘咏梅，王金凤，等.北沙参不去皮的实验研究［J］.中药材，2010，33(7):1140-1142.

［5］屠鹏飞，徐国钧，徐珞珊，等.沙参类的研究-多糖的含量测定［J］.中草药，1992，23(7):355-366.

［6］司传平.医学免疫学实验［M］.北京:人民卫生出版社，1999:7-53.

［7］王健.北沙参加工方法的考证［J］.中药材，1990，13(10):28-30.

［8］李峰，石俊英，丛志刚，等.山东地产药材北沙参浸出物含量测定［J］.山东中医药大学学报，2001，25(4):310-312.

［9］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:92.

［10］李仪奎，姜名瑛.中药药理学［M］.北京:中国中医药出版社，1992:180.

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［12］冯蕾，杨宪勇，冀海伟，等.北沙参超临界二氧化碳萃取物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响及成分分析［J］.中国医院药学杂志，2010，30(20):1740-1742.