肺癌患者血清及组织中miR指标的变化分析

龚　星

作者单位:441000 湖北医药学院附属襄阳医院



肺癌患者血清及组织中miR指标的变化分析

龚星

作者单位:441000 湖北医药学院附属襄阳医院

【摘要】目的分析肺癌患者血清及组织中miR表达变化及其临床意义。方法收集48例肺癌住院患者作为肺癌组，纳入同时期体检的健康志愿者20例作为对照组。采用RT-PCR法对血清和组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平进行检测，比较组间差异。结果肺癌患者血清miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于对照组；肺癌组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于癌旁组织，P<0.05。血清miR-21、miR-31、miR-155表达水平越高的肺癌患者TNM分期、淋巴结转移程度更高，预后则较差，P<0.05。结论肺癌患者血清及组织中miR-21、miR-31、miR-155呈高表达，血清microRNAs检测可以作为肺癌初步诊断的指标，用于辅助判断肺癌的恶化程度和预测预后。

【关键词】肺癌；miR；血清；组织

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:645～647)

肺癌是威胁人类生命健康的首位恶性肿瘤[1]，如何提高肺癌的检出率对改善肺癌患者的预后十分关键。医学界一直致力于寻找肿瘤标志物用于肺癌的诊断，大量研究显示miR有可能成为肺癌诊断的新指标，为肺癌的临床诊断、治疗选择和预后判断提供更为可靠的依据[2-6]。然而目前大多数研究都只关注了肺癌组织中miR表达变化，因此只有当手术切除后经病理检测才能获取miR表达的信息，失去了miR在肺癌前期诊断中的应用价值。最近开始有研究关注肿瘤患者血清中的miR水平，以用于各种肿瘤的诊断[7-8]。本次研究我们对肺癌患者血清及组织中miR表达进行了较为综合和全面的探索，以期为肺癌的临床诊断提供更加简单、易测的指标。

1材料与方法

1.1临床资料

收集2012年7月至2013年9月期间来我院就诊的经病理检查证实为48例肺癌患者作为肺癌组。所有患者采取手术切除治疗且术前未经任何形式的放化疗治疗，男性25例，女性23例；年龄38～76岁，平均年龄(52.68±12.41)岁；根据2009年UICC肺癌TNM分期[9]，Ⅰ期12例，Ⅱ期19例，Ⅲ期17例；病理类型：腺癌26例，鳞癌22例；分化程度：低分化18例，中分化20例，高分化10例。纳入同时期来我院行健康体检的志愿者20例作为对照组，男性11例，女性9例；年龄39～72岁，平均年龄(53.75±12.56)岁。经统计学分析两组患者间性别、年龄等基线资料无显著差异，具有可比性。

1.2方法

1.2.1组织中miR表达的检测肺癌组患者取病理石蜡包片(肺癌组织和癌旁组织)，采用切片机将组织蜡块进行切片，厚度为10 μm/片，取4个切片，加入TRIzol提取总RNA。采用逆转录和实时荧光定量PCR法，检测组织中miR-21、miR-31、miR-155表达。逆转录程序：在去核酶PCR薄管中加入反应物，充分混合3～5 s，70°C孵育5 min，迅速放入冰中冷却，再加入其它反应物充分混匀，短暂离心，42°C孵育90 min，70°C加热10 min，冰终止反应。扩增基因片段：95℃预变性1min，95℃15 s、60℃20 s、70℃25 s，40个循环，然后95℃延伸反应20 s。反应结束后确认real time PCR的扩增曲线和融解曲线，进行PCR定量时制作标准曲线等。以U6为上样内参照，相对基因定量用ΔCT=ΔCTmiR-n-CTU6，ΔCt值越大，表示miR-21、miR-31、miR-155表达量越低。

1.2.2血清中miR表达的检测肺癌患者于术前，对照组受试者于体检时分别空腹取静脉血5 ml。分离血清，取血清1 ml，加入TRIzol提取总RNA。按照1.2.1方法进行逆转录和扩张基因片段，测定血清中miR-21、miR-31、miR-155表达量。

1.3观察指标

比较肺癌患者和健康志愿者间血清miR-21、miR-31、miR-155表达水平差异；比较肺癌组织中和癌旁组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平差异；比较不同病理类型肺癌患者血清和癌组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平差异。

对所有患者进行跟踪随访，比较生存期≤6个月与生存期为6～12个月的肺癌患者就诊时肺癌组织和血清中miR-21、miR-31、miR-155表达水平。

1.4统计学处理

2结果

2.1肺癌患者与健康志愿者间血清miR-21、miR-31、miR-155表达水平比较

研究结果显示肺癌患者血清miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于健康志愿者，P<0.05，见表1。

表1肺癌患者与健康志愿者间血清miR-21、miR-31、

组别miR-21miR-31miR-155健康志愿者(n=20)1.24±0.320.53±0.390.74±0.36肺癌患者(n=48)8.96±1.361.25±0.472.16±0.85t,P6.728,<0.052.541,<0.053.165,<0.05

*为与对照组比较，P<0.05。

2.2肺癌组织中和癌旁组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平比较

研究结果显示肺癌组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于癌旁组织，P<0.05，见表2。

表2肺癌组织中和癌旁组织中miR-21、miR-31、

组别 miR-21miR-31miR-155癌旁组织(n=48)3.97±1.151.56±0.672.09±1.71肺癌组织(n=48)12.68±3.655.32±2.177.82±3.21t,P7.642,<0.054.156,<0.054.453,<0.05

*为与对照组比较，P<0.05。

2.3肺癌患者血清中miR-21、miR-31、miR-155表达与其临床病理特征、预后的联系

根据肺癌患者血清中miR-21、miR-31、miR-155表达水平是否高于平均值，分别分为miR-21高表达组(ΔCT>8.96，27例)，miR-21低表达组(ΔCT≤8.96，21例)；miR-31高表达组(ΔCT>1.25，28例)，miR-31低表达组(ΔCT≤1.25，20例)；miR-155高表达组(ΔCT>2.16，25例)，miR-155低表达组(ΔCT≤2.16，23例)。

结果显示：肿瘤TNM分期、淋巴结转移程度和生存期miR-21、miR-31、miR-155高表达组和低表达组间有统计学差异，而性别、年龄及病理类型在两组间差异无统计学意义，见表3。

3讨论

microRNAs是一类广泛存在于动物和植物体内的内源性非蛋白质编码的小分子RNA，microRNAs只有17～22个核苷酸组成，通过与靶mRNA 3'端非翻译区互补配对，在翻译后水平调节靶基因的表达。随着科技水平的进步，越来越多的microRNAs被发现，医学界对其生物学功能也给予了热点关注[10-11]。大量研究表明，microRNAs参与了细胞生命活动，与机体的生长、发育、应激反应、癌变及凋亡密切相关[12]。

在癌症发生过程中，microRNAs可作为致癌基因或抑癌基因，调控肿瘤的生长、凋亡。已有研究证明多种microRNAs可作为癌症诊断和预后的判断指标。其中miR-7、miR-21、miR-31、miR-34、miR-143、miR-155、miR-221被发现与肺癌的发生发展相关，这些microRNAs在肺癌组织中的表达不同于正常组织。miR-21、miR-31、miR-155是研究较为广泛的致癌microRNAs。miR-21通过调节Ras/MEK/ERK通路从而抑制凋亡基因表达[13]；miR-31 通过对靶基因PPP2R2A 和LATS2 的抑制而起抗凋亡作用[14]；miR-155则通过下调S0CS1基因促进细胞增殖，阻断细胞调亡蛋白酶3的活性发挥抗调亡作用[15]。

表3　肺癌患者血清中miR-21、miR-31、miR-155表达与其临床病理特征的关系/例

本次研究选择了致癌基因miR-21、miR-31、miR-155作为观察指标，对肺癌组织和癌旁正常组织中这些microRNAs的表达水平进行检测，结果显示肺癌组织中miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于癌旁组织，研究结果与前人报道的结果一致。另外不同于前人的研究，本文创新性地对肺癌患者血清中miR-21、miR-31、miR-155表达水平进行检测，结果发现肺癌患者血清中miR-21、miR-31、miR-155表达水平显著高于正常健康人群。结果提示血清中miR-21、miR-31、miR-155表达水平升高可作为肺癌的临床诊断指标。随后我们又对血清miR-21、miR-31、miR-155高表达与肺癌患者的临床病理特征、预后关系进行了初步分析，结果发现miR-21、miR-31、miR-155表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移程度呈正相关，miR-21、miR-31、miR-155的高表达是肺癌患者预后不良的危险因子。

我们认为血清中microRNAs检测相比于肺癌组织病理活检具有更好的可操作性，血清microRNAs检测可以作为肺癌初步诊断的指标，用于辅助判断肺癌的恶化程度和预测预后。

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(编辑：吴小红)

Research about the Change of miR in Serum and Tissues of Lung Cancer

GONGXing.XiangyangHospital,HubeiUniversityofMedicine,Xiangyang,441000

【Abstract】ObjectiveTo analyze the change of miR in serum and tissues of lung cancer.Methods48 cases of lung cancer were lung cancer group,and 20 cases of healthy volunteers who took medical examination were the control group.The expression of miR-21,miR-31,miR-155 in serum and tissues were detected by RT-PCR,and the difference between the 2 groups were compared.ResultsThe serum expression of miR-21,miR-31,miR-155 in lung cancer group were higher than those of the control group,and the expression of miR-21,miR-31,miR-155 in lung cancer tissues were significantly higher than pericarcinoma tissues,allP<0.05.The higher the serum expression of miR-21,miR-31,miR-155,the higher the TNM staging and lymph node metastasis degree,the worse the prognosis,allP<0.05.ConclusionMiR-21,miR-31,miR-155 have high expression in serum and tissues in patients with lung cancer,the serum expression of microRNAs can be used in preliminary diagnosis of lung cancer,and in auxiliary judgment for the degree of deterioration and prediction of prognosis.

【Key words】Lung cancer；miR；Serum；Tissue

(收稿日期2014-11-24修回日期 2015-04-07)

中图分类号：R734.2

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2015)05-0645-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.005