TCF-4、MMP-7和Survivin在结直肠癌中的表达研究

黄慧云

作者单位:710077 西安医学院第一附属医院



TCF-4、MMP-7和Survivin在结直肠癌中的表达研究

黄慧云

作者单位:710077 西安医学院第一附属医院

【摘要】目的比较TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直肠癌组织与正常黏膜组织中的表达情况，分析三者与结直肠癌病理特征的相关性。方法选取68例结直肠癌手术切除石蜡包埋标本的结直肠癌组织4 μm连续切片数张作为结直肠癌组，随机选取50例结直肠癌两端均为阴性切缘组织的正常粘膜组织4 μm连续切片数张作为正常粘膜组，比较TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直肠癌组织与正常黏膜组织中的表达情况以及TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直肠癌组织中的表达与其病理特征的相关性。结果TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在结直肠癌中的阳性表达率均显著高于正常黏膜组织，差异具有统计学意义(P<0.05)；结直肠癌中TCF-4、Survivin蛋白表达与淋巴结转移、Dukes临床分期相关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、浸润深度、分化程度、远处转移均无相关性(P>0.05)；MMP-7蛋白表达在浸润深度、淋巴结转移、Dukes临床分期显著相关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、远处转移均无相关性(P>0.05)。结论TCF-4、MMP-7和Survivin与结直肠癌的发生和发展有紧密联系，三者可能参与了结直肠癌的恶性生长过程。

【关键词】TCF-4；MMP-7；Survivin；直肠癌；病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:665～668)

结直肠癌属于消化系常见恶性肿瘤，发病机制复杂。目前，分子生物学和遗传学研究结果显示，结直肠癌的发生与癌基因和抑癌基因改变、细胞凋亡机能受限、信号传导通路异常以及端粒酶活化等有紧密联系[1]。TCF-4、MMP-7和Survivin均为Wnt信号通路重要的调控分子，在结直肠癌的发生和病情进展中有重要的调节作用[2-3]。现对TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直肠癌组织与正常黏膜组织中的表达情况进行比较，分析三者与结直肠癌病理特征之间的相关性，为早期诊断和靶向治疗提供参考，报告如下。

1材料与方法

1.1一般资料

选取2013年4月至2014年4月我院收治的68例结直肠癌患者作为研究对象。其中男性患者41例，女性患者27例，患者年龄为27～80岁。所有患者均行根治性切除术，排除术前接受放疗、化疗或免疫治疗者以及有遗传性结直肠肿瘤和其它恶性肿瘤病史者。所有切除标本均经病理组织学检查证实且存在无瘤切缘，按照常规操作使用10%中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋，选取68例标本的结直肠癌组织4 μm连续切片数张作为结直肠癌组，随机选取50例结直肠癌两端均为阴性切缘组织的正常粘膜组织4 μm连续切片数张作为正常粘膜组。所有患者均签署知情同意书。

1.2方法

应用免疫组织化学染色技术(Elivision)检测正常黏膜组织和结直肠癌组织中TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白的表达情况，分析三者与结直肠癌患者病理特征之间的关系。使用已知相应蛋白阳性的标本作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。兔抗人TCF-4单克隆抗体、鼠抗人MMP-7单克隆抗体、兔抗人Survivin单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3观察指标

染色结果阳性反应判断标准：TCF-4阳性物质定位于细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒；MMP-7阳性物质主要定位于细胞质，呈黄色或棕黄色；Survivin阳性物质主要定位于细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒[4]。

于高倍镜(×400)下随机选择10个视野进行阳性细胞计数，计算阳性细胞所占视野内细胞总数的比例，取平均值作为结果进行评分，0分：<10%；1分：10%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。观察切片视野内细胞着色强度并进行评分，0分：不着色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。阳性细胞所占视野内细胞总数的比例评分×细胞着色强度评分=总评分。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白阳性表达判断标准：阳性：总评分≥2分；阴性：总评分0～1分[5]。

1.4统计学分析

应用SPSS 19.0软件分析数据，计数资料以百分率表示，差异性比较采用χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜组织和结直肠癌组织中的表达情况比较

TCF-4蛋白定位于细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒，MMP-7蛋白主要定位于细胞质，呈黄色或棕黄色，Survivin蛋白主要定位于细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在结直肠癌中的阳性表达率均显著高于正常黏膜组织，差异具有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜组织和结直肠癌组织中的表达情况比较(例，%)

2.2TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在结直肠癌组织中的表达与其临床病理特征的关系

结直肠癌中TCF-4、Survivin蛋白表达与淋巴结转移、Dukes临床分期存在显著相关性(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、浸润深度、分化程度、远处转移均无相关性(P>0.05)；MMP-7蛋白的表达与浸润深度、淋巴结转移、Dukes临床分期存在显著相关性(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、远处转移上均无相关性(P>0.05)(表2)。

3讨论

结直肠癌属于临床常见恶性肿瘤，其癌变机制涉及遗传、环境、社会等多方面因素[6]。目前，随着国内居民生活水平的提高和饮食结构的改变，结直肠癌发病率呈现逐年升高趋势。大量临床研究表明，结直肠癌的发生与癌基因和抑癌基因改变、细胞凋亡机能受限、多条信号传导通路异常以及端粒酶活化等有紧密联系[7]。因此，从分子水平研究结直肠癌的发生和发展机制，对结直肠癌癌的早期诊断和治疗的具有重要意义。

表2　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在结直肠癌组织中的表达与其临床病理特征的关系/例

临床研究表明，Wnt/β-catenin/TCF信号通路(一下均简称Wnt信号通路)在生物的细胞分化、形态发生、结构形成和肿瘤演进等方面起着重要作用，TCF-4、MMP-7和Survivin均为Wnt信号通路重要的调控分子[8]，本研究主要对三者在直肠癌组织与正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌病理特征之间的相关性进行研究。

TCF-4是Wnt信号通路的核内非常关键的信号因子，是细胞的转录调控的分子开关，在Wnt通路异常激活时，细胞质中的β-catenin躲避复合体的攻击进入细胞核，并与TCF-4发生特异性结合，启动下游基因的表达，对细胞恶性转化有重要作用[9]。Xie等[10]的研究表明，TCF-4 mRNA是43株结肠癌细胞系中共同表达的mRNA，且在结直肠癌中表达水平最高，提示TCF-4mRNA与结肠癌的发生有紧密联系且在结肠癌发展过程中有促进的作用。本研究中，TCF-4蛋白在结直肠癌中的阳性表达率均显著高于正常黏膜组织，与上述研究报道相符，提示TCF-4参与了结直肠癌的发生和发展。本研究中结直肠癌TCF-4蛋白的表达在淋巴结转移、Dukes临床分期上存在显著差异。Bishnupuri等[11]的采用免疫组化法研究非小细胞肺癌中β-carenin和TCF-4蛋白的表达，也发现TCF-4蛋白的高表达与NSCLC的分化密切相关。提示TCF-4的表达与结直肠癌恶性生物学行为有密切关系。

MMP-7和Survivin是核内转录因子TCF-4的下游靶基因，三者相互作用，协同参与了多种肿瘤的发生和发展过程[12]。其中MMP-7属于MMPs家族的成员，在人癌组织中呈过度表达水平[13]。临床研究表明，MMP-7与多种癌症(包括胃癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌等)的侵袭和转移均有紧密联系[14]。本研究中MMP-7蛋白在结直肠癌中的阳性表达率均显著高于正常黏膜组织，MMP-7蛋白的表达在浸润深度、淋巴结转移、Dukes临床分期上存在显著差异，提示MMP-7与结直肠癌的进展密切相关。Survivin则是目前发现的最强的凋亡抑制因子，与细胞生长周期密切相关，可参与细胞周期有丝分裂的调控，最终抑制细胞凋亡[15]。本研究中Survivin蛋白在结直肠癌中的阳性表达率显著高于正常黏膜组织，Survivin蛋白的表达在淋巴结转移、Dukes临床分期上存在显著差异，提示Survivin参与了结直肠癌的发生和发展以及恶性生长过程，与聂祝青等[16]的研究报道相符。

综上所述，TCF-4、MMP-7和Survivin与结直肠癌的发生和发展有紧密联系，三者可能参与了结直肠癌的恶性生长过程，可作为结直肠癌的早期诊断、靶向治疗以及预后判断的参考指标。

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[15]仰丽丽,文剑.p21和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义〔J〕.实用癌症杂志,2013,28(5):483-485.

[16]聂祝青,田小林,朱小宝.survivin在结直肠癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.结直肠肛门外科,2012,18(2):83-86.

(编辑：吴小红)

The Expression of TCF-4,MMP-7 and Survivin in Colorectal Cancer

HUANGHuiyun.TheFirstAffiliatedHospitalofXi'anMedicalUniversity,Xi'an,710077

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues,and its correlation with pathological features.MethodsColorectal cancer tissues 4 μm in 68 cases of patients with colorectal cancer were researched as the colorectal cancer group,serial section of 50 cases(from the colorectal cancer group) with 2 negative colorectal cancer margin of normal mucosa tissues 4 μm were number were the normal mucosa group.The expressions of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues were compared,and the relationship between the expression of TCF-4,MMP-7,survivin and pathological features of colorectal cancer were analyzed.ResultsThe positive expression rates of TCF-4,MMP-7,survivin in colorectal cancer group were higher than those of the normal mucosa group(P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were related with lymph node metastasis and Dukes clinical stage (P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,depth of invasion,differentiation,distant metastasis(P>0.05);The expression of MMP-7 was related with depth of invasion,lymph node metastasis,Dukes clinical stages(P<0.05);The expression of MMP-7 was not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,differentiation,distant metastasis (P>0.05).ConclusionThe expression of TCF-4,MMP-7,Survivin are related with development of colorectal cancer,and they are involved in the malignant growth of colorectal cancer.

【Key words】TCF-4;MMP-7;Survivin;Colorectal cancer;Pathological feature

(收稿日期2014-09-15修回日期 2015-04-07)

中图分类号：R735.3+5

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2015)05-0665-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.011