祛风定痛方(白芷、羌活、徐长卿等)对实验性偏头痛小鼠镇痛效果的研究

李 莉，李 健，

(1．山东省聊城市第二人民医院药事部，山东临清 252601; 2．山东中医药大学附属医院药学部，济南 250000)

祛风定痛方(白芷、羌活、徐长卿等)对实验性偏头痛小鼠镇痛效果的研究

李 莉1，李 健2，

(1．山东省聊城市第二人民医院药事部，山东临清 252601; 2．山东中医药大学附属医院药学部，济南 250000)

目的:探讨祛风定痛方对实验性偏头痛小鼠镇痛效果。方法:采用利血平致低五羟色胺(5-HT)型小鼠偏头痛模型，眼球取血记录凝血时间，ELISA试剂盒检测小鼠脑匀浆中5-HT含量，对比观察不同组别小鼠的凝血时间和脑匀浆中5-HT含量。采用福尔马林法观察祛风定痛方对于小鼠的镇痛效果。结果:偏头痛小鼠脑5-HT变化结果显示，高剂量组、中剂量组和正天丸组脑5-HT浓度明显高于模型组，差异有统计学意义，低剂量组脑5-HT浓度高于模型组，差异有统计学意义。偏头痛小鼠凝血时间变化结果显示，高剂量组、中剂量组和正天丸组凝血时间明显大于模型组，差异有统计学意义，低剂量组凝血时间高于模型组，差异有统计学意义。祛风定痛镇痛作用结果显示，高剂量组、中剂量组和盐酸曲马多组在第Ⅰ时相能够明显降低小鼠的添足时间，差异有统计学意义，但在第II时相对于小鼠添足时间的作用不明显，差异无统计学意义。结论:祛风定痛方对于利血平致低五羟色胺型小鼠偏头痛有一定的镇痛作用，值得进一步研究。

祛风定痛方;偏头痛;镇痛效果

偏头痛通常是局部、反复发作和自限性的严重头痛，伴有自主神经系统的相关症状，发病前往往有先兆出现，尚无治疗的有效方法［1-2］。据相关统计［3-5］，全球约有10亿人曾出现偏头痛症状，且其发病人群逐渐趋于年轻化，先兆症状的种类也趋于多样化。因此，避免触发、控制症状和药物预防仍然是针对该病的主要措施［6-8］，一旦发作疼痛可持续数小时，对于患者的生活和工作造成很大影响。祛风定痛方属于中医传统经验方，由白芷、羌活、徐长卿等药物组成，具有活血通络止痛的效果，对于多种病因导致的头痛均有一定的临床疗效［9］。很多中医学者认为［10-13］，该方对于偏头痛有一定的临床疗效，但其机制和镇痛效果的量化研究尚未见报道。故本文为探讨祛风定痛方对偏头痛的镇痛效果，利用利血平致低五羟色胺(5-HT)型小鼠偏头痛模型对该方的镇痛效果进行研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

取清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，室温(23±2)℃，相对湿度(50±5)%，每笼6只，保持室内安静，适应性喂养1周后开始实验。

1.2 实验药品和仪器

祛风定痛丸，山东中医药大学提供;福尔马林，西安藻露堂药业集团康复医药有限公司;盐酸曲马多，深圳海王药业有限公司;利血平注射液，天津金耀氨基酸有限公司;正天丸，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司(型号PL4002);离心机，Hitachi公司(型号CT15RE);酶标仪，雷杜Rayto RT-6000酶标仪。

1.3 方法

1.3.1 利血平致低5-HT型小鼠偏头痛模型取清洁级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量(20 ±2)g，按随机数字表法分为空白对照组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和正天丸组6组各10只。空白对照组给予生理盐水1ml·kg－1，皮下注射;其余各组给予利血平注射液1ml·kg－1，皮下注射，然后灌胃给药。空白对照组给予正常喂食、给水;模型组给予生理盐水1ml灌胃，每日1次;高剂量组给予祛风定痛方药液15 g·kg－1灌胃，每日1 次;中剂量组给予祛风定痛方药液7.5 g·kg－1灌胃，每日1次;低剂量组给予祛风定痛方药液3.75 g· kg－1灌胃，每日1次;正天丸组给予正天丸粉末3 g· kg－1+生理盐水1ml灌胃，每日1次。每天皮下注射和灌胃给药共7 d。采用眼球取血记录凝血时间，方法参考文献［11］，取出下丘脑及包含中缝核和蓝斑的脑干，组织匀浆，用ELISA试剂盒检测小鼠脑匀浆中5-HT含量。

给药剂量换算方法:d鼠=d人×(K鼠/K 人)，d鼠:欲求算的动物公斤体质量剂量，d人:人的公斤体质量剂量;K鼠、K人:折算系数，K小鼠为1，K人为0.11。

1.3.2 祛风定痛方镇痛作用 采用福尔马林法，取清洁级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量(20±2)g，按随机数字表法分为空白对照组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和正天丸组6组各10只。空白对照组给予生理盐水1 ml·kg－1灌胃，空白对照组正常给予喂食给水;模型组给予生理盐水1 ml灌胃，每日1次;高剂量组给予祛风定痛方药液15 g·kg－1灌胃，每日1次;中剂量组给予祛风定痛方药液7.5 g·kg－1灌胃，每日1次;低剂量组给予祛风定痛方药液3.75 g·kg－1灌胃，每日1次;曲马多组给予盐酸曲马多50 mg·kg－1灌胃，每日1次，连续3 d给药。末次给药1 h后，除空白对照组以外各组小鼠右后足跖皮下注射浓度为2.5%的福尔马林20 μL，记录第Ⅰ时相(0～5 min)和第Ⅱ时相(10～60 min)添足时间(给药剂量换算方法同上)。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，并采用t检验，多组资料比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 祛风定痛方对小鼠脑匀浆中5-HT影响

表1显示，偏头痛小鼠脑5-HT变化结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠脑5-HT浓度明显低于空白对照组小鼠脑5-HT浓度，差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，高剂量组、中剂量组和正天丸组脑5-HT浓度明显高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.01)，低剂量组脑5-HT浓度高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 不同剂量祛风定痛方对小鼠脑5-HT影响

2.2 祛风定痛方对小鼠凝血时间的影响

表2显示，偏头痛小鼠凝血时间变化结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠凝血时间明显小于空白对照组小鼠凝血时间，差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，高剂量组、中剂量组和正天丸组凝血时间明显大于模型组，差异有统计学意义(P＜0.01)，低剂量组凝血时间高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 不同剂量祛风定痛方对小鼠凝血时间影响

2.3 祛风定痛方镇痛作用

表3显示，祛风定痛方镇痛作用结果显示，高剂量组、中剂量组和盐酸曲马多组在第Ⅰ时相能够明显降低小鼠的添足时间，差异有统计学意义(P＜0.05)，但是在第II时相对于小鼠添足时间的作用不明显，差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

偏头痛的主要特点为久治不愈、反复发作，给人们的学习和生活带来极大困扰。中医并没有“偏头痛”的概念，认为其属于“头痛”范畴。中医辨病分标本，肝脾失调，经络瘀滞是偏头痛的“本”，而“风痰瘀”三邪是诱发疾病发作的重要因素［14-15］。祛风定痛方中白芷、羌活、徐长卿均有祛风通络止痛的作用，尤其是白芷和羌活属于治疗头痛的要药，并且可以引其他药物上行头部，整方对于头痛的治疗具有针对性，也是笔者研究其对于偏头痛作用的重要原因。

表3 不同剂量祛风定痛方镇痛作用结果

偏头痛小鼠脑5-HT变化结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠脑5-HT浓度明显低于空白对照组，说明利血平致偏头痛小鼠脑匀浆中5-HT浓度明显低于正常值。5-HT是5-羟色胺的简称，是一种神经递质，在大脑皮层及神经突触内含量最高，在外周组织中也可存在。有研究认为［16］，5-HT能够保护神经元免受“兴奋神经毒”的损害，对于增强记忆力也有一定作用，5-HT含量的减少可以引起易怒、烦躁、抑郁等多种情绪波动，在偏头痛的发病中常为降低状态。实验中，高剂量组、中剂量组和正天丸组脑5-HT浓度明显高于模型组，低剂量组脑5-HT浓度高于模型组，说明祛风定痛方对于偏头痛小鼠脑匀浆中5-HT浓度具有正向调节作用，能够增加脑组织中5-HT含量。偏头痛小鼠凝血时间变化结果显示，高剂量组、中剂量组和正天丸组凝血时间明显大于模型组，低剂量组凝血时间高于模型组，说明祛风定痛方对于偏头痛小鼠的凝血系统有影响，能够延长凝血时间。有研究认为［17-21］，90%以上的偏头痛患者会出现血液流变的异常，血液黏度增高、凝血时间缩短、血小板间歇性聚集均为可能出现的症状。本次实验中，模型组小鼠的凝血时间明显缩短，与以往的研究结果相一致。祛风定痛方镇痛作用结果显示，高剂量组、中剂量组和盐酸曲马多组在第Ⅰ时相能够明显降低小鼠的添足时间，但是在第II时相对于小鼠添足时间的作用不明显，说明祛风定通方在短时间内对于偏头痛的抑制作用较好。祛风定痛方以白芷、羌活、徐长卿为主药，均为针对性治疗头痛的要药，白芷主要针对阳明头痛，羌活擅长治疗太阳经头痛，徐长卿对于神经衰弱导致的头痛、失眠有作用，诸药搭配不仅可以缓解头痛的症状，对于流变学指标和脑匀浆中5-HT浓度也有积极作用。

综上所述，祛风定痛方对于利血平致低五羟色胺型小鼠偏头痛有一定的镇痛作用，对于偏头痛小鼠脑匀浆中5-HT含量有升高效果，并能延长凝血时间，值得进一步研究。

［1］ Chang YY，Tsai YT，Lai JN，Yeh CH，Lin SK et al．The traditional Chinese medicine prescription patterns for migraine patients in Taiwan: A population based study［J］．J Ethnopharmacol，2014，151(3):1209-1217．

［2］ 付秋菊．朱良春验方痛宁胶囊治疗瘀血偏冰痛的实验和临床研究［D］．南京中医药大学，2011．

［3］ 曾贵荣，马丽，郭建生，等．芎麻汤不同提取物对小鼠偏头痛模型的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(24): 162-164．

［4］ Ramachandran R，Bhatt DK，Ploug KB，et al．Nitric oxide synthase，calcitonin gene-related peptide and NK-1 receptor mechanisms are involved in GTN-induced neuronal activation ［J］．Cephalalgia，2014，34(2):136-147．

［5］ 孙晓萍，吕新勇，刘莉娜，等．天舒胶囊对利血平致小鼠偏头痛的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2013，19(16):210-212．

［6］ 程娜．垂体腺苷酸环化酶激活肽致大鼠实验性偏头痛［D］．山西医科大学，2011．

［7］ 马壮壮，梁茂新，张宏，等．蒡芎疏风颗粒对实验性偏头痛的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(24):180-184．

［8］ 吴珂．蜜环菌发酵提取物对小鼠镇痛、镇静及学习记忆作用的研究［D］．河南大学，2013．

［9］ Ducic I，Felder JM 3rd，Khan N，Youn S．Greater occipital nerveexcision foroccipitalneuralgia refractory to nerve decompression［J］．Ann Plast Surg，2014，72(2):184-187．

［10］ 袁博博．偏头痛实验动物模型的研究现状［J］．医学综述，2011，17(10):1447-1450．

［11］ 林艳艳，卢燕，聂克，等．祛风定痛方对小鼠偏头痛模型的影响［J］．中药新药与临床药理，2013，24(2):139-142．

［12］ 杨海霞，张玉芹，刘斌，等．头痛宁胶囊治疗偏头痛的疗效评价及其对血小板和血液流变学的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(5):230-232．

［13］ Singh Joy SD．Migraine sufferers at increased risk for stroke［J］．Am J Nurs，2014，114(2):57．

［14］ 赵丽娟．ERK在偏头痛动物模型中的激活及与肥大细胞脱颗粒间的关系［D］．山西医科大学，2011．

［15］ 张帆，王金钢．偏头痛实验模型综述［J］．湖北中医药大学学报，2012，14(6):69-71．

［16］ 吴小芳．偏头痛动物实验模型的研究现状［J］．医学综述，2013，19(18):3288-3291．

［17］ Royce JS，Goadsby PJ．Migraine with cranial autonomic features following surgically induced post-ganglionic sympathetic lesion ［J］．Acta Neurol Scand，2014，129(2):e6-8．

［18］ Foroughipour M，Golchian AR，Kalhor M，et al．A shamcontrolled trial of acupuncture as an adjunct in migraineprophylaxis［J］．Acupunct Med，2014，32(1):12-16．

［19］ 陈冲．颅痛颗粒治疗偏头痛大鼠的实验研究及联合针刺治疗的临床观察［D］．泸州医学院，2011．

［20］ 张明洁．抑郁与头痛相关性机制研究及头痛的文献学研究［D］．南开大学，2012．

［21］ 杨胜，张定堃，苏柘僮，等．川芎-白芷药对不同配比不同剂型对偏头痛动物模型的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(14):225-228．

Analgesic Effect of Qufeng Zhitong decoction to the Experimental Migraine Mice

LI Li1，LI Jian2
(1．Pharmacy department of the Second People’s Hospital of Liaocheng，Shandong Linqing 252600，China; 2．Pharmacy department of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，Shandong Jinan 250000，China)

Objective:To explore analgesic effect of Qufeng dingtong Recipe(Angelica，Notopterygium，Xu Changqing，etc)．On experimental migraine in mice．Methods:Reserpine-induced low serotonin(5-HT)mice model of migraine was used．Clotting time were recorded from eyeball blood．ELISA kit was used to detect 5-HT content in mouse brain homogenates．Clotting time and 5-HT content in mouse brain homogenates were compared．Formalin was observed Qufeng dringtong Recipe for analgesia in mice．Results:Changes in migraine 5-HT in mouse brain results showed that high-dose group，middle dose group and positive day pill group brain 5-HT concentration was significantly higher than the model group．The difference was statistically significant．Low-dose group of brain 5-HT concentrations higher than the model group．The difference was statistically significant．Migraine clotting time change results in mice showed that highdose group，middle dose group and positive day pill group clotting time was significantly greater than in the model group．The difference was statistically significant．Qufeng dringtong Recipe analgesia showed that high-dose group，middle dose group and tramadol hydrochloride groupⅠ in the first phase can be significantly reduced in mice add enough time．The difference was statistically significant．But in the second phase to add sufficient duration of action in mice was not obvious，the difference was not statistically significant．Conclusions:Qufeng dringtong Recipe induced by reserpine low side for migraine serotonin amine-type mice have some analgesic effect，which is worth to further study．

Qufeng dringtong Recipe;Migraine;Analgesic effect

R285．5

B

1006-3250(2015)03-0282-03

2014-12-19

李 莉(1976-)，女，副主任药师，医学硕士，从事中药质量控制与临床药学研究。