正交试验优选关黄柏炭最佳炮制工艺研究

刘会民 ，刘蓬蓬

(1.朝阳市第二人民医院，辽宁 朝阳 122000；2.辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)



正交试验优选关黄柏炭最佳炮制工艺研究

刘会民1，刘蓬蓬2

(1.朝阳市第二人民医院，辽宁 朝阳 122000；2.辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)

目的：优选关黄柏炭的炮制工艺。方法：以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀为指标，选择炒制温度、炒制时间为考察因素并结合饮片炒炭后的外观性状要求，采用正交试验优选关黄柏炭的最佳炮制工艺。结果：关黄柏炭的炮制工艺为每100g关黄柏在240℃条件下炒4min。结论：优化的关黄柏炭炮制工艺稳定、可行。

关黄柏；炮制；炒炭；正交试验

关黄柏为芸香科植物黄檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥树皮,其药性苦、寒，入肾、膀胱经，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效[1]。关黄柏中生物碱为其主要有效成分，其中包含小檗碱、黄柏碱、巴马汀、药根碱，具有抗炎、解热的功效。关黄柏制炭后，苦寒之性大减，收涩之性增加，清湿热之中兼具涩性，可用于治疗便血，崩漏下血[2]。本实验以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀为指标，选择炒制温度、炒制时间为考察因素，采用正交试验优选关黄柏炭的最佳炮制工艺，为工业化大生产提供研究基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪，Waters 2998型检测器；METTLER AE240型十万分之一分析天平(瑞士METTLER公司)；FA1004B型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；DFT-100型高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)等。

1.2 药材

生关黄柏饮片购自大连开发区保健大药房，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为芸香科植物黄檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥树皮。

1.3 试药

盐酸巴马汀对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号110732-200506)，盐酸小檗碱对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，纯度≥98%，批号MUST-10090303)；乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 正交试验

根据炮制规范对炒炭工艺进行正交实验设计，对关黄柏按照L9(34)正交因素水平表进行炮制，以关黄柏中的主要成分盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量为考察指标，结合生产实际选择炒制时间、炒制温度为考察因素，因素水平见表1。

表1 关黄柏炭工艺因素水平

2.2 样品制备

取9份关黄柏，每份20g，按照正交试验因素表炮制样品。

2.3 盐酸小檗碱、盐酸巴马汀含量测定[3]

2.3.1 对照品溶液制备 取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含105.2、14.96μg的对照品溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液制备 取各样品粉末(过60目筛)约0.2g，精密称定，置50mL量瓶中，加入60%乙醇40mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)45min，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 色谱条件 Agilent TC-C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氢钠使其达到0.02mol/L)为流动相B，按表2中的规定进行洗脱，检测波长：345nm，流速：1.0mL·min-1，柱温：25 ℃，进样量：10μL，结果见表3。色谱见图1-图3。

表2 流动相洗脱

图1 盐酸巴马汀对照品色谱

图2 盐酸小檗碱对照品色谱

图3 关黄柏炭炮制品色谱

2.3.4 线性关系考察 精密吸取各生物碱对照品溶液适量，注入液相色谱仪，按“2.3.3”项下色谱条件测定，并记录峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标X，峰面积(A)为纵坐标Y，绘制标准曲线，得盐酸小檗碱与盐酸巴马汀回归方程分别为：Y=4 062 106.770 8X- 12 224.201 8(r=0.999 3)，Y=4 131 597.030 5X+9 112.494 4(r=0.999 1)，结果表明盐酸小檗碱在0.005 26～0.157 8μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，盐酸巴马汀在0.006～0.09μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.5 精密度试验 分别精密吸取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品溶液5μL，连续进样6次，按“2.3.3”项下条件测定各对照品的色谱峰面积，计算其RSD分别为1.1%和1.3%，表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性实验 取同一关黄柏炭供试品，放置于室温，于0、2、4、6、8、10、12、24h后，按“2.3.3”项下条件操作，结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的峰面积RSD分别为1.5%和2.3 %，表明该供试品溶液在室温下24h内稳定。

2.3.7 重复性试验 取同一关黄柏炭供试品6份，按“2.3.3”项下条件测定盐酸小檗碱、盐酸巴马汀各成分的含量，计算其RSD分别为1.8%和1.5%，结果表明供试品重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验 取6份已知含量样品0.2g，精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品各10mL，按“2.3.2”项下条件操作。测得盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的平均回收率分别为101.97%和99.83 %，RSD分别为1.9%和1.2%。

2.4 炒炭工艺优选

盐酸小檗碱、盐酸巴马汀均为关黄柏中指标性成分，且在2010 年版《中国药典》中以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀为检测指标，故在综合评分中将盐酸小檗碱、盐酸巴马汀权重系数均定为0.5。综合指标OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/mBmax)×100。炒炭试验结果见表3，方差分析见表4。

表3 正交试验优化关黄柏炭炮制工艺测定结果

表4 方差分析结果

注：F0.05(2,2)=19.0。

2.5 结果

方差分析结果表明，炒制温度和炒制时间对关黄柏炭中小檗碱和巴马汀含量均有显著性影响，主次顺序为A(炒制温度)>B(炒制时间)。从正交试验结果可以看出A1B3综合评分最高，但结合关黄柏炭成品质量，即表面焦黑色，内部深褐色的要求，最终选定关黄柏的制炭优化工艺为A2B2，即每100g关黄柏在240℃条件下炒4min。

2.6 验证试验

按“2.5”项得到的炮制参数进行验证性试验，得到以下结果，见表5。从结果可以看出所指定的关黄柏炭工艺稳定可行。

3 讨论

试验中考察指标为盐酸小檗碱和盐酸巴马汀，为尽量客观反映各个因素之间的关系及因素水平对关黄柏炮制品质量的影响，拟采用综合加权评分法。即以一个综合指标(overall desirability，OD)，将各个考察指标统一综合考察，以综合指标进行直观分析。在综合评分中将盐酸小檗碱、盐酸巴马汀权重系数均定为0.5。综上，综合指标OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/ mBmax)×100。同时，在确定关黄柏炒炭的最佳工艺时将炮制后的饮片外观性状是否符合要求作为首要筛选条件。

本试验中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量测定方法参照2010版药典中关黄柏的含量测定内容。由于在实际进样时发现在同一进样量下各样品中指标成分含量差别较大，为了使其在同一线性范围内，故在1～20μL范围内根据实际情况选取不同的进样量。

本实验参照了文献中的关于盐酸小檗碱和巴马汀的测定方法，最终选定药典的方法，其操作方法简单，测定结果快捷。最终制定的关黄柏炒炭工艺在验证实验中结果良好，说明本工艺稳定可行，适合工业化大生产。

[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[S] .一部. 北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 贾天柱.中药炮制学[M].上海：上海科学技术出版社，2008.

[3] 张煊,崔征,周海燕,等. 高效液相色谱法测定关黄柏不同采收期及黄檗不同部位的小檗碱、巴马汀含量[J]. 沈阳药科大学学报,2003,20(3):194-197.

(责任编辑：魏 晓)

Study on Processing Technology of Phellodendron Amurense Rupr Carbonisatus by Orthogonal Experiment Design

Liu Huiming1,Liu Pengpeng2

(1.The second peoples hospital of chaoyang city, Chaoyang 122000,China; 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600,China)

Objective:To optimize the processing technology of phellodendron amurense rupr carbonisatus. Methods:The content of palmatine chloride and berberine hydrochloride was regarded as evaluated index, the heating temperature and heating time as examine factors, associate with appearance to optimize the best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus by orthogonal experiment design. Results:The best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus is frying for 4minutes at 240℃per 100g. Conclusion:The optimized processing technology is stable and feasible.

Phellodendron；Processing；Carbonizing by Stir-frying；Orthogonal Experiment Design

2014-09-25

国家自然科学基金项目(81274083)

刘会民(1968-)，男，辽宁省朝阳市第二人民医院副主任中药师，研究方向为中药制剂。

R283

A

1673-2197(2015)03-0019-03

10.11954/ytctyy.201503008