流感药效实验中体质量变化差值预测作用研究❋

刘厚涞，王克林，孙 刚，王笑红，翟志光，范红江

(中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

流感药效实验中体质量变化差值预测作用研究❋

刘厚涞，王克林△，孙 刚，王笑红，翟志光，范红江

(中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

目的:揭示体质量变化差值在流感药效实验中的预测作用。方法:采用甲型流感病毒感染小鼠模型，达菲作为阳性药物，每天固定时间称量体质量，计算体质量变化差值并进行药效预测;实验第5天解剖小鼠取肺组织称量后计算肺指数并确定药效;比较体质量变化差值药效预测结果与肺指数药效评价结果，最后判断体质量变化差值预测药效的可行性。结果:实验第4天体质量变化差值的药效预测结果和肺指数药效评价结果一致。结论:第4天的体质量变化差值可以用于预测小鼠流感实验的药效。

甲型流感病毒;体质量变化差值;肺指数;药效预测

在流感动物实验中，一般采用肺指数来判断小鼠肺损伤的程度以及评价药物疗效［1-2］。本文探讨体质量变化差值、体质量与肺指数在流感实验药效评价中的作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物

BALB/c小白鼠，体质量(16±2)g，雌雄各半，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(实验动物使用许可证号SYXK(京)2010-0032)。饲料由北京科澳协力饲料有限公司生产(生产企业审查合格证号京饲审(2009)06166)。

1.2 药物

达菲胶囊由瑞士Roche公司生产，上海分公司分装(批号B1162)。

1.3 流感病毒

甲型流感病毒小鼠肺适应株［A/FM/1/47 (H1N1)］从中国预防医学科学院(现国家CDC病毒所)引进。鸡胚传代培养，收集鸡胚尿囊液，于-80℃低温冰箱保存备用。

1.4 仪器

天平 (奥 豪 斯“Adventurer”系 列，型 号AR153CN)。

1.5 实验方法

1.5.1 小鼠分组 将小鼠按随机数字表法分为正常组、染毒组、达菲组3组各10只，雌雄各半。

1.5.2 小鼠染毒 实验第1天以35个LD50(半数致死量)的流感病毒给染毒组和达菲组小鼠滴鼻感染，每只小鼠35 ul。流感病毒传代及动物实验在相应级别的生物安全实验室中进行。达菲组小鼠按27.5 mg/kg体质量，每天下午1∶00灌胃给予达菲1次，其他组小鼠给予相同体积的生理盐水。

1.5.3 称量体质量、肺重并计算肺指数 实验周期为5 d，每天下午1∶00称量各组小鼠体质量。第5天解剖小鼠取肺组织，用滤纸吸干表面血液后称重并计算肺指数:肺指数(%)=肺重(g)/体质量(g)×100%。

1.5.4 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计分析，组间比较采用方差分析，实验结果以均数±标准差(±s)表示。

2 结果

2.1 小鼠一般状态及其体质量变化特征

2.1.1 一般状态 正常组小鼠精神状态好、活跃，毛发有光泽，抓力大，饮食正常;染毒组精神状态差、不活跃、易蜷缩，毛发灰暗无光泽，抓力小，饮食减少;达菲组毛发稍暗，其他方面与正常组无明显区别。

2.1.2 体质量值变化特征 各组小鼠体质量值都符合正态分布且方差齐性，因此采用LSD-t检验进行统计分析。

图1显示，正常组小鼠体质量值从第1天到第5天逐渐增加，但差异无统计学意义(P＞0.05)，5 d共增加1.38 g(+7.6%)。

图1 流感小鼠组内体质量随感染时间变化趋势(±s)

图1显示，染毒组小鼠体质量值第1天至第2天有增加趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05);第3天至第5天一直下降，与第1天比较差异有统计学意义(P＜0.01);同时第3天至第5天与各自前1 d比较差异有统计学意义(P＜0.01)，5 d共下降3.44g(-19.2%)。达菲组小鼠体质量值与第1天比较，第2天、第3天变化不明显(P＞0.05);第4天至第5天明显下降(P＜0.05)，与各自前1 d比较差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，5 d共下降0.96 g(-5.3%)。

图2显示，与正常组比较，第3天至第5天染毒组、达菲组小鼠体质量值均下降，差异有统计学意义(P＜0.01);与染毒组比较，第3天达菲组小鼠体质量值略高但差异无统计学意义(P＞0.05)，第4天至第5天达菲组小鼠体质量值较高，第4天差异有统计学意义(P＜0.05)，第5天差异更显著(P＜0.01)。

2.2 小鼠体质量变化差值的变化特征

体质量变化差值为当天体质量与染毒前1 d体质量之差值。各组小鼠体质量变化差值符合正态分布且方差齐性，故采用LSD-t检验进行统计分析。

图1显示，各组小鼠体质量变化差值的变化特征与体质量值变化特征类似。图2显示，与上述体质量值变化不同，第2天开始与正常组比较，染毒组小鼠体质量变化差值差异有统计学意义(P＜0.05)，达菲组小鼠差异有统计学意义(P＜0.01);与染毒组比较，达菲组小鼠差异无统计学意义(P＞0.05)。第3天至第5天与上述体质量变化类似，与正常组比较，染毒组、达菲组小鼠体质量变化差值差异有统计学意义(P＜0.01)，表明体质量变化差值比体质量更灵敏且能更早反映流感病毒致病性。其中，与上述体质量变化不同，第3天达菲组小鼠体质量变化差值高于染毒组，差异有统计学意义(P＜0.05);第4天差异有统计学意义(P＜0.01)，再次证明体质量变化差值是比体质量更灵敏的指标。

图2 流感小鼠组间体质量随感染时间变化特征(±s)

图3 流感小鼠组间体质量变化差值随感染时间变化特征(±s)

2.3 小鼠肺组织形态及肺指数统计分析

2.3.1 肺组织形态 正常组小鼠肺组织颜色呈粉白色、无充血;染毒组小鼠肺组织颜色呈血红色、有充血;达菲组小鼠肺组织颜色呈粉白色、无充血，表明达菲减轻了流感病毒导致的肺损伤。

2.3.2 肺指数比较 各组小鼠肺指数都符合正态分布且方差齐性，因此采用LSD-t检验进行统计分析。图4显示，与正常组比较，染毒组、达菲组小鼠肺指数较大且差异有统计学意义(P＜0.01);与染毒组比较，达菲组小鼠肺指数较低且差异有统计学意义(P＜0.01)，表明达菲既有减轻流感小鼠肺损伤并有减少流感小鼠体质量下降作用。因此，进一步证实肺指数是流感小鼠药效实验的客观指标［1-2］。

2.4 体质量变化差值与体质量值用于预测流感小鼠药效实验的比较分析

图4 流感小鼠肺指数比较(±s)注:与正常组比较:★★P＜0.01;与染毒组比较:▇▇P＜0.01

达菲组与染毒组差异性比较，第3天体质量变化差值差异有统计学意义(P＜0.05)，体质量值为P＞0.05，而肺指数差异有统计学意义(P＜0.01)。第4天体质量变化差值和肺指数的P值一致(P＜0.01)，体质量值为P＜0.05，而肺指数差异有统计学意义(P＜0.01)，表明体质量变化差值比体质量值更为灵敏。

表1～表3显示，3次实验和本项目组以往实验结果表明，体质量变化差值第4天的结果与实际药效评价结果相符程度更好，因此第4天的体质量变化差值可以预测小鼠流感实验药效结果。也就是说，第4天的体质量变化差值可以作为预测小鼠流感药效实验的参考指标。

表1 流感实验第3天各变量间比较(P)

表2 流感实验第4天各变量间比较(P)

表3 流感实验第5天各变量间P值

3 讨论

采用体质量变化差值预测指标，不用解剖小鼠(观察对象)就可以评价药效，符合中医“望、闻、问、切”的诊断特征，对开展中医药动物模型研究有重要意义。

流感药效实验一般至少分为正常组、染毒组、阳性药物组、实验药物组，其中实验药物组进一步分为大剂量、中剂量、小剂量3组共6组。每组往往需要收集血、肺、脾、肝、肾、肌肉(6种样品)以此计算，共要收集360个样品。采用本研究的体质量变化差值可以在取材前预测药效，减少变化不明显实验组的数量，减少2组来计算至少减少120个样品的收集，可以节约大量人力、物力。小鼠感染流感病毒后体质量下降的原因，可能是感染流感病毒后小鼠饮食减少导致体质量下降，也可能与流感病毒在小鼠体内大量复制，抑制蛋白质等物质正常合成有关，确切机制有待进一步的研究阐明。本实验采用体质量为(16±2)g的BALB/c小鼠，流感病毒感染率较高，这种小鼠生长速度适中，受节气等外界因素影响较小，实验重复性较好。

总之，体质量差值与肺指数用于评价流感小鼠实验药效结果相符，特别是第4天的体质量变化差值预测流感药效的准确率较高，因此体质量变化差值可以用于流感实验药效的预测。

［1］翟志光，王克林，孙刚，等.板蓝根颗粒和苦甘颗粒对流感病毒感染小鼠的保护作用研究［J］.世界中西医结合杂志，2011，11:987-989.

［2］赵铁华，邓淑华，杨鹤松，等.半枝莲总黄酮抗甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究［J］.中国药理学通报，2014，30 (1):147-148.

Study on the prediction of the difference of body weight in the influenza drug effect experiment

LIU Hou-lai，WANG Ke-lin△，SUN Gang，WANG Xiao-hong，ZHAI Zhi-guang，FAN Hong-jiang
(Institute of Basic Theories，China Academy of Chinese Medicine Sciences，Beijing 100700，China)

Objective:To reveal prediction of change value of body weight in effect of drugs against influenza. Methods:After infected with influenza A virus，A/FM/1/47(H1N1)，mice were weighed and taken Tamiflu everyday.On fifth day mice anatomized，lung tissue were taken out and weighed.Change value of Body weight and lung index was calculated then.The possibility of prediction of change value of body weight was analyzed in effect of drugs against influenza finally.Results:On fourth day，change value of body weight is consistent with the lung index in evaluation of drugs effect.Conclusion:Change value of body weight can be used to predict effect of drugs against influenza on fourth day.

Influenza A virus;Change value of body weight;Lung index;Prediction of drugs effect

R285.5

:B

:1006-3250(2015)11-1380-02

2015-01-14

国家科技重大专项(2012ZX10004301-008);中国中医科学院自主选题(YZ-1314，YZ-1413)

刘厚涞(1989-)，男，江西人，在读硕士，从事中医药防治流感的相关研究。

△通讯作者:王克林(1964-)，男，河北人，研究员，硕士研究生导师，从事中医药防治病毒性疾病的分子机制研究，Tel: 010-64089021。