238例支气管肺泡灌洗液细胞病理学结果分析与临床意义

李龙萍,匡晓燕, 李化梅，邓 飞

(1. 贵阳市第五人民医院 病理科，贵州 贵阳 550004；2.遵义医药高等专科学校附属医院 病理科， 贵州 遵义 563002；3. 遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

临床经验交流

238例支气管肺泡灌洗液细胞病理学结果分析与临床意义

李龙萍1,匡晓燕2, 李化梅2，邓 飞3

(1. 贵阳市第五人民医院 病理科，贵州 贵阳 550004；2.遵义医药高等专科学校附属医院 病理科， 贵州 遵义 563002；3. 遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

目的 通过对2012年3月至 2014年11月贵阳市第五人民医院238 例支气管肺泡灌洗液(bronchoalvelar lavage fluid, BALF)细胞病理学检查结果分析，探讨其在临床肺部疾病诊治中的意义。方法 留取支气管肺泡灌洗液15～20mL,所有标本用ThinPrep液基细胞学技术涂片后行HE染色、过碘酸-雪夫(PAS)染色、六胺银(GMS)染色、抗酸染色。结果 238例BALF标本中查见异常成分的80例(33.6 %)；其中卡氏肺囊虫47例，分枝杆菌15例，真菌8例，巨细胞病毒2例，复合感染3例，查见肿瘤细胞5例。结论 本院送检支气管肺泡灌洗液标本异常检出率高，细胞病理学检查为肺部疾病诊断提供方便快捷的形态学依据，有重要临床应用价值。

支气管肺泡灌洗液； 细胞病理学；异常检出率

近年来，随着纤维支气管检查术的改进，在纤维支气管镜应用基础上发展起来的支气管肺泡灌洗(brongchoalvelar lavage fluid,BALF)常规细胞病理学检查，在临床的应用越来越广泛。有人将支气管肺泡灌洗(BALF)称为“液性肺活检”。其操作简便，安全，损伤小，且能收集到下呼吸道表面覆盖的细胞以及纤维支气管镜所不能探及的细胞学标本进行诊断，因此在临床上应用越来越广泛。采用ThinPrep液基细胞学涂片技术可以使细胞单层平铺不重叠、形态清晰、背景干净易于观察。结合四种特殊染色方法：HE染色、PAS染色、六胺银染色、抗酸染色，使诊断率大大提高。我们对2012年3月至 2014年11月贵阳市第五人民医院238例支气管肺泡灌洗液细胞病理学检查结果进行统计分析，评价其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 标本收集自2012年3月至2014年11月贵阳市第五人民医院门诊和住院支气管肺泡灌洗液常规检查患者共238例，男198例，女40例，年龄10～79 岁，平均年龄38.4岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 参考《支气管肺泡灌洗液细胞学检测技术规范(草案)》[1],采集BALF将纤支镜顶端紧密楔入段或亚段的开口，经硅胶管快速注入生理盐水，每次25～50 mL,总量不超过300 mL,立即用负压吸引回收灌洗液,BALF应在刷检和活检前进行，以避免血液的污染。标本充分混匀后，用50 mL塑料瓶留取15～20 mL送检。

1.2.2 涂片制备及染色

1.2.2.1 涂片制备 所有病例均制备细胞涂片(采用ThinPrep液基细胞学技术)5张。ThinPrep液基细胞学技术，是通过特定微孔径的膜过滤吸附，转而将标本黏附到硅化片上，此技术能富集标本，提高检出率。

1.2.2.2 染色 细胞涂片分别进行进行HE染色、过碘酸-雪夫(PAS)染色、六胺银(GMS)染色、抗酸染色，具体操作步骤详详见人民卫生出版社2000年6月第1版《病理学技术》。部分特殊感染病例进行免疫组化染色，免疫组化染色采用Envision二步法。免疫组化试剂均购自北京中杉金桥公司。用枸橼酸pH6.0缓冲液高压锅热修复，二乙基联苯胺(购置丹麦Dako公司)显色，苏木素衬染，免疫组化显色后以细胞浆、膜、核内出现棕黄色为阳性表达。

1.2.3 异常成份观察 由经验丰富的细胞病理学医师在普通光学显微镜下进行细胞形态及异常成分观察。

2 结果

2.1 一般情况分析 238例标本中查见异常成分的80例，占总例数的33.6 %，其中查见卡氏肺孢子虫(PCP)47例；分枝杆菌15例；查见真菌8例(其中霉菌感染6例、隐球菌感染2例)；CMV2例；复合感染3例，所有病例均经病原学培养或临床治疗随访后证实。查见肿瘤细胞5例，其中2例肺腺癌，1例肺鳞癌，1例肺小细胞癌，1例非霍奇金弥漫大B细胞淋巴瘤，均经病理组织活检证实。80例阳性患者情况分析(见表1)。

表1 80例支气管肺泡灌洗(BALF)阳性患者情况分析

BALF阳性患者例数(占比) 性别(例数) 年龄 PCP47(19．7%)男39，女822～67，平均37．4分支杆菌15(6．3%)男10，女524～71，平均40．3霉菌6(2．5%)男4，女211～61，平均38．2隐球菌2(0．8%)男2，女020～65，平均40．4CMV2(0．8%)男2，女024～46，平均35复合感染3(1．3%)男3，女021～48，平均34．1肿瘤5(2．1%)男4，女134～68，平均56总计80(33．6%)男64，女1611～71，平均40．2

2.2 特殊染色、免疫组化在BALF及活检组织中的表达情况 238例阳性患者中，PCP47例阳性表达，阳性率为19.7%，BALF涂片中卡氏肺囊虫HE染色、GMS染色及免疫组化结果见图1。分支杆菌15例阳性表达，阳性率为6.3%，BALF涂片HE染色可见少量上皮样细胞及纤维组织细胞，部分可见干酪样坏死物；抗酸染色结核分枝杆菌结果见图2。霉菌6例阳性表达，阳性率为2.5%，主要为曲霉菌感染，BALF涂片霉菌丝GMS、PAS染色结果见图3。隐球菌2例阳性表达，阳性率为0.8%，BALF涂片隐球菌孢子HE染色、GMS染色结果见图4。CMV2例阳性表达，阳性率为0.8%，CMV主要累及肺泡上皮细胞，受累细胞体积增大，可形成巨细胞或核内包涵体；BALF涂片巨细胞HE及免疫组化结果见图5。肿瘤5例阳性表达，阳性率2.1%， 5例肺部肿瘤中有2例肺腺癌，1例肺鳞癌，1例肺小细胞癌，1例非霍奇金弥漫大B细胞淋巴瘤，均经组织活检证实。肺腺、鳞、小细胞癌及弥漫大B细胞淋巴瘤BALF涂片HE染色结果见图6。

A ：可见灶状分布的粉红色泡沫状， 内含成堆PC包囊 (HE ×200)；B： PC囊壁呈黑色，内有明显胞核(GMS染色×200 )； C：PC免疫组化，囊壁呈棕黄色(Envision法×200) 。

A ：结核分枝杆菌细长略有弯曲(抗酸染色×200)；B：MAC为短小杆状，位于组织细胞内(抗酸染色×200) 。

A ：霉菌菌丝粗细较一致，有锐角分枝，放射状排列(GMS染色×400)；B ：霉菌菌丝呈紫红色(PAS染色×400)。

A:灶状分布的泡沫状物质，内有隐球菌孢子(HE ×200)； B:隐球菌孢子呈圆形、新月形，半透明荚膜，聚集成堆(GMS染色×400)。

A：巨细胞呈圆形，胞质丰富，核增大、偏位(HE ×200)；B ：CMV免疫组化，核内包涵体呈 “鹰眼”状(EnVision法×200) 。

A：腺癌细胞团呈三维立体腺样结构，细胞核偏位，排列拥挤，可见胞浆内空泡(HE ×200)； B：鳞癌细胞胞浆丰富，核大、深染，染色质呈粗颗粒状(HE ×400) ；C ： 小细胞癌，细胞排列成松散的细胞团，核不规则，深浅不一，不见核仁(HE ×200)；D ： 弥漫大B细胞淋巴瘤，坏死物背景内见散在分布的异型淋巴样大细胞(HE ×200)。

3 讨论

近年来，通过纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗获取标本得到广泛应用，支气管肺泡灌洗液由于直接来自下呼吸道，能直观地反映肺局部的生理及病理生理信息，因此，通过对BALF细胞成分的检测，有助于理解疾病的发生机制、预测疾病的发展，并为临床治疗提供依据[2-4]。在病理情况下，BALF细胞组成会发生明显改变，同时可能会出现其他的异常成分，如恶性肿瘤细胞、细菌和真菌、卡氏肺囊虫等。因此，近年来在国内外已普遍应用于呼吸系统的诊断、预后和疗效观察[5]。我们回顾了贵阳市第五人民医院近3年的BALF常规检查结果联合特殊染色，分析不同疾病的检出情况，探讨其对临床诊断、治疗中的意义。

我们统计发现， 阳性病例中，最多的为卡氏肺囊虫感染，占总数的19.7%，这与国内及日本[6]的研究结果相近，低于西方的报道[7]，这可能与东方人群对PCP易感性低有关。PCP是AIDS患者最常见的机会性感染，70%～80%的AIDS患者有PCP，其中20%～40%导致死亡[8]。但随着近年化学药物预防及抗逆转录病毒治疗的广泛应用，PCP的发病率明显降低。其次为分支杆菌感染，检出率仅为6.3%,这可能部分是由于缺乏结核空洞性病变所致。此外，亚临床结核由于处于非活动期，灌洗液能够获取的结核菌的量较少，进一步加大检出的难度。真菌病是由真菌感染引起的一类疾病，在所有内脏真菌病中以肺真菌病最为多见，一般发生在机体免疫防御功能损伤的基础上，其发病率与死亡率近年都有所增加。肺部感染的真菌主要有3组：曲霉菌，新型隐球菌和二相性真菌[9]。本组病例中发现霉菌和隐球菌感染，分别占2.5%和0.8%。CMV检出率仅为0.8%，然而当存在其它感染因素，特别是与卡氏肺囊虫共存时，在肺泡灌洗液中检测到CMV是也是比较常见的。BALF细胞涂片发现复合感染3例，占1.3%，其中PCP合并分支杆菌感染1例，PCP合并真菌感染1例，分支杆菌合并真菌感染1例。这部分病人肺部感染的临床表现是非特异的，影像学表现亦是多样的，对任何特定的病原体不能确定诊断，并且可能重叠非感染性肺部疾病，所以这些病例需要支气管镜检查及细胞学涂片以建立一个明确的诊断。本组病例中发现5例肺癌，其中肺腺癌2例，肺鳞癌1例，肺小细胞癌1例，1例非霍奇金弥漫大B细胞淋巴瘤。占总数的2.1%，活体组织病理学检查能对病变准确的定性，便于临床医师对患者治疗方案的选择。238例BALF标本中异常检出率较高达到33.6 %，表明临床支气管镜检查和肺泡灌洗病例选择标准严格，能为临床多种疾病的诊断、治疗和分析预后提供有意义的参考。

BALF异常成分的检测可提示诊断并成为早期的诊断依据。首先，肺泡灌洗液作细胞学检查能确定病因，对超出支气管镜可视范围的周边型肺癌具有重要的诊断价值，可以辅助提高肺癌检出阳性率，BALF细胞病理学检查对周围性肺癌，尤其对X线胸片表现为弥散型肺癌具有较好的诊断价值，值得推广应用[10]；在细胞学诊断基础上结合病理活检检查，能为疾病预后的判断提供确切的依据。其次，标本中异常成分的检出也可以为某些特殊疾病提供重要的诊断依据，如检出细菌、真菌、卡氏肺袍子虫、肺吸虫等可直接诊断相应微生物或寄生虫感染[11]；涂片特殊染色对应某些疾病的临床诊断和治疗检测也有非常重要的价值，是一种简便有效的方法，如六胺银染色查见卡氏肺袍子虫可辅助诊断卡氏肺囊虫病(PCP),抗酸染色查见抗酸杆菌可辅助诊断结核病等，可引起临床医生的高度重视，减少误诊和误治，具有重要的临床意义。在细胞学诊断基础上结合病原形态学及病理活检，能为某些特殊疾病提供重要的诊断依据，BALF细胞学涂片可直接诊断相应微生物或病原体感染，减少误诊和误治，具有重要的临床意义。同时采用液基制片技术能够富集标本，从而有效地提高检出率。此外，有条件的情况下，在BALF常规细胞形态学检查的同时，也应进行其他免疫组化、分子生物学相关指标检测[12]，尽可能获取全面的疾病信息，辅助临床诊断、治疗和预后分析。BALF细胞病理学分析能对肺部疾病的诊断和鉴别诊断提供明确依据，这将极大提高肺部疾病诊断的准确性和敏感性，临床应用价值较大，在医学领域具有广泛的应用前景，值得深入开展。

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[收稿2014-12-05;修回2015-01-04]

(编辑：王福军)

Pathological analysis of 238 bronchoalveolar lavage cell samples and the clinical significance

LiLongping1，KuangXiaoyan2,LiHuamei2，DengFei3

(1.Department of Pathology,Guiyang City Fifth People's Hospital, Guiyang Guizhou 550004,China； 2.Department of Pathology,Affiliated Hospital of Zunyi City Pharmaceutical College, Zunyi Guizhou 563002, China；3.Department of Pathology, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University，Zunyi Guizhou 563099,China)

Objective From March 2012 to November 2014 in Guiyang Fifth People's Hospital 238 cases of bronchial alveolar lavage fluid ( BALF) were analyzed for cell pathology, and the clinical significance in lung disease diagnosis and treatment was explored.Methods Using 50 ml plastic tubes to collect bronchoalveolar lavage (15～20 ml). BALF was centrifuged for 5 minutes, the supernatant was discarded and the pellets were collected. The ThinPrep liquid based-cytology smear technique with HE staining, periodic acid Schiff (PAS) staining, silver staining (GMS) six amine, and acid fast staining were used for analysis.Results Of 238 cases of BALF specimens, we found that 80 cases were abnormal(33.6%); Of which 47 cases were Pneumocystis carinii, 15 cases of Mycobacterium, 8 cases of fungal infections, 2 cases of Cytomegalovirus,3 cases of compound infection, and 5 cases of carcinoma cells.Conclusion The abnormal rate of bronchoalveolar lavage specimens was high. Cell pathology examination provides the morphological basis for fast and convenient diagnosis of pulmonary diseases. Thus BALF analysis has important clinical application values.

bronchoalveolar lavage fluid;cellular pathology;abnormality detection rate

邓飞，男，博士，教授，硕士生导师，研究方向：霍奇金淋巴瘤的致病机理及治疗，E-mail:mdproffeideng@hotmail.com。

R734.2

B

1000-2715(2015)01-0080-05