鼻咽癌动态增强MRI相关参数及其与DLC-1表达的关系

鼻咽癌动态增强MRI相关参数及其与DLC-1表达的关系

周敬淳刘明张伟鄢敏袁家琳1张菁菁2

(深圳市人民医院耳鼻咽喉科，广东深圳518020)

摘要〔〕目的探讨鼻咽癌动态增强磁共振成像(MRI)/DCE-MRI相关参数及其与肝癌缺失基因(DLC)-1表达的关系。方法回顾性分析该院耳鼻喉科鼻咽癌患者89例均给予DCE-MRI检查，获取时间-信号曲线和最大上升斜率图，检查后经鼻咽纤维镜活检采集鼻咽癌组织标本，采用免疫组化方法检测DLC-1表达。结果鼻咽癌活检部位DCE-MRI相关参数〔最大上升斜率平均值(MMS)、最大线性斜率(LMS)与强化峰值(PV)〕、DLC-1表达与鼻咽癌临床分期、淋巴结转移具有明显相关性，其中临床分期越高，合并淋巴结转移者MMS、LMS与PV越高，而DLC-1阳性表达率越低(P<0.05)，DLC-1阳性组MMS、LMS与PV值明显低于DLC-1阴性组(P<0.05)，经Pearson相关性分析发现，MMS、LMS、PV与DLC-1表达呈负相关(r=-0.514，-0.497，-0.494，P<0.05)。结论鼻咽癌DCE-MRI相关参数与DLC-1表达呈负相关，两者均可作为鼻咽癌临床病理特征的重要评估方法。

关键词〔〕鼻咽癌；动态增强磁共振；DLC-1

中图分类号〔〕R739.63〔文献标识码〕A〔

基金项目：深圳市科技计划项目技术开发技术创新计划多方合作项目(No.CXZZ20140509151403304)

通讯作者：刘明(1956-)，男，博士，主任医师，主要从事耳鼻咽喉-头颈肿瘤研究。

1暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院放射科

2北京大学深圳医院耳鼻咽喉科

第一作者：周敬淳(1981-)，男，硕士，主治医师，主要从事耳鼻咽喉-头颈肿瘤研究。

肝癌缺失基因1，或肿瘤细胞生长抑制因子(DLC-1)是新型抑制癌症基因，近期研究发现DLC-1在胃肠癌、乳腺癌、前列腺癌和肝细胞癌等恶性肿瘤中表达减弱，其中RhoGAP结构域是DLC-1基因抑制癌症的原因〔1〕。动态增强磁共振成像(MRI)(DCE-MRI)是鼻咽癌的常见无创性诊断方法，其在鼻咽部良恶性肿瘤鉴别、鼻咽癌预后和疗效评估中的价值显著〔2〕。但关于DLC-1基因产物DLC-1蛋白在鼻咽癌中的表达及其与DCE-MRI特征的关系研究报道罕见，本研究就其相关性进行探讨。

1资料与方法

1.1临床资料回顾性分析2014年1～11月我院耳鼻喉科鼻咽癌患者89例。纳入标准：全部患者经鼻咽纤维镜活检证实鼻咽癌病理诊断〔3〕，鼻咽癌病灶可测量，未接受任何抗肿瘤治疗措施，接受鼻咽部DCE-MRI检查。其中男61例，女28例，平均年龄(51.24±6.27)岁，临床分期：Ⅱ期17例，Ⅲ期57例，Ⅳ期15例，淋巴结转移79例，无淋巴结转移10例。

1.2DCE-MRI检查方法①检查步骤：采用西门子公司Avanto1.5T超导MRI系统，常规鼻咽部T1加权横断面、矢状面和冠状面平扫，MRI平面扫面后严格遵照以下标准实施动态增强扫描，取仰卧位，头先位，采用头颈联合线圈，同时采用核磁共振专用高压注射器(Medrad injector system，Pittsburgh)经肘静脉注入Gd-DTPA造影剂(Magevist)0.1 mmol/kg(美国拜耳公司生产)，采用团注法以4 ml/s速度完成造影剂注射后采用相同速度注入生理盐水10 ml，注射造影剂同时开始行增强MRI矢状面和冠状面动态扫描，选择动态增强FLASH成像序列参数：TR=38 ms，TE=4.8 ms，翻转角30度，短阵64×128，视野23×17 cm2，时间分辨率2.5 s，连续扫描60次，第1～40次为预扫描，以确定信号强度基准，增强扫描50次，共146 s。最后行常规轴位T1WI增强扫描，扫描参数同平扫T1WI，然后行冠状位增强T1WI扫描。②DCE-MRI相关参数获取：由专业MRI诊断医师采用Functool 图像分析软件(GE公司)，采用盲法对动态增强MRI图像进行后处理操作，测量动态增强MRI参数，将动态增强MRI扫描图像输至工作站，按同一位置的系列图像所有像素点绘制时间-信号曲线，最大上升斜率(MRI参数)=选取最陡段终止点(SI-post)与开始点(SI-pre)差值，即SI-post-SI-pre，获取最大上升斜率图。根据时间信号曲线测定最大信号强度值(SI-max)和起点信号强度值(SI-baseline)；根据最大上升斜率图，选取鼻咽纤维镜活检部位(ROI1)和肿瘤实质内信号最强区域(肿瘤“热点” 区域，ROI2)，计算ROI1与 ROI2的最大上升斜率平均值(MMS)、最大线性斜率(LMS)=(SI-post-SI-pre)/ SI-baseline×100%、强化峰值(PV)=(SI-max-SI-baseline)/ SI-baseline×100%。

1.3DLC-1表达测定方法①试剂与仪器：SP-9000通用型免疫组化试剂盒(美国ZYMED公司)，DLC-1兔抗人多克隆抗人抗体(美国Santa Cruz公司)，微波炉(Sanyo EM-501 s/500 s 日本)。②操作步骤：取病理科鼻咽癌病理组织，蜡块切片脱蜡，采用3%H2O2处理10 min，蒸馏水洗涤6 min，放于乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液，100℃下微波炉抗原修复15 min，采用DLC-1抗体(1∶100)作为一抗染色，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素伊红(HE)复染，严格按照试剂盒说明说操作。③结果判定：细胞质呈浅棕色至棕黄色为阳性细胞，每张组织切片随机选取3个高倍镜视野，计数阳性细胞数目，取平均值，细胞无着色或阳性细胞数目比例<10%评定为阴性，阳性细胞数目比例位于10%～30%评定为弱阳性，阳性细胞数目比例位于30%～60%评定为阳性，阳性细胞数目比例>60%评定为强阳性。

1.4统计学方法应用SPSS18.0软件进行单因素方差分析、t检验、χ2检验和Pearson相关性分析。

2结果

2.1DEC-MRI相关参数与鼻咽癌临床病理特征的关系根据时间信号曲线，鼻咽癌DEC-MRI相关参数与鼻咽癌临床分期、淋巴结转移具有明显相关性，其中临床分期越高，合并淋巴结转移者MMS、LMS与PV越高，不同临床分期和淋巴结转移程度比较差异显著(P<0.05)。见表1。

表1　DEC-MRI相关参数与鼻咽癌临床病理特征的关系 ± s)

不同亚组间比较：P<0.05

2.2DLC-1表达与鼻咽癌临床病理特征的关系鼻咽癌21例DLC-1阳性表达，阳性表达率为23.60%，DLC-1表达与鼻咽癌临床分期、淋巴结转移具有明显相关性，其中临床分期越高，合并淋巴结转移者DLC-1阳性表达率越低(P<0.05)。见表2。

表2　DLC-1表达与鼻咽癌临床病理特征的关系〔 n(%)〕

2.3DLC-1表达与鼻咽癌DEC-MRI相关参数的关系DLC-1阳性组MMS、LMS与PV值明显低于DLC-1阴性组(P<0.05)，经Pearson相关性分析发现，MMS、LMS、PV与DLC-1表达呈负相关(r=-0.514，-0.497，-0.494，P<0.05)。见表3。

表3　不同DLC-1表达对鼻咽癌DEC-MRI相关参数的

3讨论

鼻咽癌是鼻咽部上皮组织癌，大部分鼻咽癌集中于东南亚，我国广东、广西和湖南省均为鼻咽癌好发区域〔4〕。由于鼻咽癌病理与解剖的特异性，放化疗是鼻咽癌的主要治疗手段〔5〕。同时，随着影像学技术提高，无创性MRI可初步作为鼻咽癌分期诊断的重要手段，DCE-MRI检查通过多方位、清晰显示肿瘤形态大小，周围软组织、肿瘤淋巴结转移及其血流灌注特点〔6〕。DEC-MRI检查采用对比增强造影剂Gd-DTPA，Gd与DTPA相结合形成螯合物，毒性低，安全性能高，毒副作用发生风险显著降低〔7〕。DLC-1基因位于人类染色体8p21.3-22，全长3.8 kb，含有14个外显子，编码1 091个氨基酸，123 kD蛋白质组成，与鼠p122-RhoGAP基因具有86%同源性〔8〕。该基因在人类正常组织中广泛表达，其中心肺组织表达量最高，DLC-1在乳腺癌、肝肠癌、前列腺癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中表达下降或缺失〔9〕。研究发现经转染DLC-1-cDNA肝癌细胞系具有抑制恶性肿瘤继续生长的作用〔10〕。DLC-1蛋白是Rho家族小分子GTP酶活化蛋白(RhoGAP)，RhoGAP具有调节细胞信号分子，GAP结合的活化状态向失活结合状态GDP转变。DLC-1蛋白通过下调RhoGAP活性发挥肿瘤生长抑制作用。但关于鼻咽癌DEC-MRI相关参数与DLC-1的关系有待进一步探讨。

本文结果揭示了DCE-MRI相关参数与DLC-1表达紧密相关。本研究采用DCE-MRI参数包括反映信号强度变化快慢(MMS、LMS)和信号强度变化程度(PV)两种类型指标〔11〕。随着鼻咽癌病情的发生和发展，肿瘤新生血管面积及其通透性增加，对比增强造影剂通过血管壁速度增快，DCE-MRI获取时间-信号曲线(TIC)上升增快，其MMS、LMS增加。因此，MMS、LMS反映肿瘤血管灌注与Gd-DTPA渗漏，其中DLC-1与鼻咽癌强化快慢的DCE-MRI参数紧密相关。肿瘤信号强度变化程度(PV)反映单位体积Gd-DTPA含量，其与肿瘤血管灌注和细胞、血管外间隙体积相关，TIC最高点位于造影剂首次通过时段，鼻咽癌血管内血流灌注量越多，强化峰值越大〔12〕。肿瘤新生血管生长时MMS、LMS、PV值越大，反之，抑制肿瘤细胞生长的DLC-1蛋白呈表达下降或缺失状态。因此，DCE-MRI相关参数与DLC-1蛋白表达紧密相关，两者均与鼻咽癌临床病理特征有明显相关性，主要体现在鼻咽癌临床分期越高，合并淋巴结转移者MMS、LMS、PV明显增加，而DLC-1蛋白表达显著降低。

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〔2015-04-15修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)