HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定的价值分析

金 冠 孙晋生

（吉林省神经精神病医院，吉林 四平 136000）

HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定的价值分析

金 冠 孙晋生

（吉林省神经精神病医院，吉林 四平 136000）

目的 探讨HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定的价值。方法 本次医学研究对碱化后的血清样品乙醚萃取物进行了有机相吹干检测，按照1.5∶2∶45∶90∶55的冰乙酸∶正丁胺∶水∶乙腈：甲醇比例流动相，设定检测波长为254 mm，VPODS柱。结果 人血清中阿米替林（AM）机器产物N-去甲阿米替林（N-AM）线性范围为25～400 μg/L，日渐RSD为1.96%～9.59%以及4.59%～7.70%，日内RSD分别为1.76%～9.46%以及5.52%～7.70%，回收率分别为109.9%～121.8%以及92.3%～125.7%。结论 HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定，重现性好、可操作性强，因而更加适用于人体药物动力学。

HPLC；阿米替林；去甲阿米替林；浓度测定

阿米替林（AM）属于一种三环类抗抑郁药，能够经去甲肾上腺素、5-羟色胺作用，阻断神经末梢的再摄取过程，进而提高突触间隙的递质浓度，达到抗抑郁治疗效果。AM作为一种三环类抗抑郁药，其镇静催眠效果也较为理想，口服吸收率在90%以上。本次医学研究就对HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定的价值进行了分析，报道如下。

1　试药与仪器

1.1试药：本次医学研究所用试药包括：正丁胺、冰乙酸、醋酸钠、乙腈、甲醇、乙醚为分析纯，中国药品生物制品检定所提供的decipone安定（diazepam，100570-200401），N-去甲阿米替林（Acetexa，Allegron，Motipress，Motival，Nortrilen），以及阿米替林（Amitriptyline），Inc，09214390［1］。

1.2仪器：本次医学研究所用仪器包括：天津市腾达过滤器件厂生产的隔膜真空泵，白洋离心机厂生产的B600 B型医用低速离心机，北京市康林科技有限责任公司生产的氮吹仪江苏海门市麒麟医用仪器厂生产的XW-80A型旋涡混合器，以及日本岛津LC-VP高效液相色谱仪［2］。

1.3方法

1.3.1配制溶液：取N-去甲阿米替林1 mg及阿米替林1 mg，溶于10 mL的甲醇中，获得N-去甲阿米替林和阿米替林的0.1 mg/mL浓度标准品。内标应用液：用甲醇将Risperidone储备液稀释为10.0 mg/L。

1.3.2色谱条件：柱温：40 ℃，检测波长：254 nm，流速：0.7 mL/min，1.5∶2∶45∶90∶55的冰乙酸∶正丁胺∶水∶乙腈∶甲醇比例流动相，色谱柱：C18ODS柱。

1.3.3标本提取：L磨口带塞离心管中取0.5 mL血清，加入4 mL乙醚、0.5 mL氢氧化钠溶液、50 μL安定内标液，转速3000 r/min，离心5 min，混合3 min，置于40 ℃水浴中用氮气吹干，用100 μL流动相溶解残渣，取30 μL进样分析。

2　结 果

2.1阿米替林色谱图：分别提取加药血清和空白血清后，实施色谱分离处理。内标安定、阿米替林以及N-去甲阿米替林的保留时间分别为9.8、7.3、5.1 min，因而三种药物均满足基线分离标准［3］。

2.2最低检测浓度和标准曲线：分别取5份1 mL的空白血清，加入50 μL不同浓度的混合标准液中，控制血清阿米替林和N-去甲阿米替林浓度在25～400 μg/L，适量内标加入后，根据“标本提取”的规定步骤进行色谱分离处理，绘制药物浓度（Y）与内标峰面积和药物峰面积（X）的线性回归方程，以此为标准曲线，即：阿米替林r=0.997，Y=439.68X+9.39，N-去甲阿米替林r=0.994，Y=531.08X+11.97［4］，Cerum 25.00，A（AM/DIA）0.082，A（NAM/DIA）0.063，A（DIA）190163.1，A（AM）15655.3，A（NAM）12098-06；Cerum 50.00，A（AM/DIA）0.239，A（NAM/DIA）0.201，A（DIA）141082.8，A（AM）33750.1，A（NAM）28340.7；Cerum100.00，A（AM/DIA）0.389，A（NAM/DIA）0.281，A（DIA）126250.2，A（AM）49086.3，A（NAM）35497.1；Cerum200.00，A（AM/DIA）0.524，A（NAM/DIA）0.408，A（DIA）182207.1，A（AM）95510.4，A（NAM）74368.8；Cerum400.00，A（AM/DIA）1.129，A（NAM/DIA）0.936，A（DIA）190624.8，A（AM）215231.3，A（NAM）178479.4。

2.3精密度：不同天内以及同一天内分别对高、中、低各种浓度的加药血清进行测试，并通过标准曲线计算其浓度，最终获得日间和日内的RSD。日间精密度（RSD%）：AM-25 8.73，AM-200 5.34，AM-400 2.15，AM-25 3.58，AM-200 4.09，AM-400 5.54；日内精密度（RSD%）：AM-25 6.61，AM-200 3.73，AM-400 2.56，AM-25 5.94，AM-200 5.10，AM-400 7.12。

2.4回收率：方法回收率：取1 mL空白血清，分别加入50 μL的NAM和AM对照品，根据样品操作要求进行测定，通过标准曲线对其进行计算，获得已知浓度与实测浓度的比值，也就是NAM和AM的方法回收率。Cerum 400 μg/L，NO1，C363.4NAM/ng，C365.0AM/ng，NO2，C403.3 NAM/ng，C376.7AM/ng，NO3，C 395.3NAM/ng，C390.8AM/ng，NO4，C410.4 NAM/ng，C378.9AM/ng，NO5，C 380.7NAM/ng，C407.3AM/ng。

萃取回收率：在空白血清中加入适量浓度不同的混合标准溶液，获得高、中、低三种浓度的液体，根据标本提取的程序，对色谱处理后的峰面积进行测定，并直接测得其与标准液之间的峰面积比值。400 μg/L，R72.0NAM%，R80.2AM%，200 μg/L，R73.1NAM%，R78.9AM%，25 μg/L，R71.3NAM%，R73.7AM%。

3　讨 论

高效液相色谱法是一种较为可靠且有效的体内药物及其代谢物检测技术，能够为临床给药方案制定、毒理、药物代谢动力学监测等提供可靠的临床依据［5］。N-去甲阿米替林在254 nm处有次吸收，234 nm处有强吸收，但需要对254 nm处阿米替林的吸收进行充分考虑，进而避开甲醇的紫外吸收范围，确定254 nm为紫外光谱扫描［6］。总而言之，HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林浓度测定，重现性好、可操作性强，因而更加适用于人体药物动力学。

［1］ 曾丽娟，黄叶盛，龚小兵.多潘立酮联合阿米替林治疗功能性消化不良的meta分析［J］.内科，2014，9（6）：653-654.

［2］ 许海龙，许建利，耿新龙.阿米替林联合肝素钠治疗间质性膀胱炎的临床研究［J］.基层医学论坛，2015，19（5）：581-582.

［3］ 罗琳，袁涛，宋莉.文拉法辛与阿米替林治疗抑郁症的成本-效果分析［J］.四川医学，2009，30（2）：199-200.

［4］ 刘庆军，姚继春.帕罗西汀与阿米替林治疗抑郁症的疗效对比分析［J］.中国实用医药，2010，5（7）：132-133.

［5］ 陈亮，谢亮，卢葭，等.西酞普兰与阿米替林治疗卒中后抑郁障碍的Meta分析［J］.中国药房，2012，23（24）：2221-2222.

［6］ 翟丽丽.应用Meta分析比较阿米替林与氟西汀治疗抑郁症的疗效研究［J］.中国医药前沿，2012，7（16）：44-45.

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1671-8194（2016）28-0029-02