RRM1 mRNA表达水平与晚期NSCLC吉西他滨维持治疗疗效的相关性分析

林立平　张绪超　胡家柱　黄福喜　李薇绽　黎秀月　韩建军　曹小龙

RRM1 mRNA表达水平与晚期NSCLC吉西他滨维持治疗疗效的相关性分析

林立平张绪超胡家柱黄福喜李薇绽黎秀月韩建军曹小龙

【摘要】目的探讨晚期NSCLC组织中RRM1 mRNA表达水平及其与吉西他滨维持治疗疗效的相关性。方法通过液相芯片法检测40例晚期NSCLC患者肿瘤组织中RRM1 mRNA表达水平，分析RRM1 mRNA表达水平与患者临床特征、吉西他滨维持治疗有效率、无进展生存及总生存时间的相关性。结果RRM1 mRNA低表达与高表达患者在各临床特征方面无显著差别，两组总生存时间比较无统计学差异(15.6个月 vs 12.1个月，P=0.582)，但RRM1 mRNA低表达患者具有更高的疾病控制率(85.7% vs 52.6%，P=0.023)和更长的无进展生存时间(7.0个月 vs 4.5个月，P=0.025)。结论晚期NSCLC 肿瘤组织中RRM1 mRNA低表达患者吉西他滨维持治疗疾病控制率更高；无进展生存时间更长，RRM1 mRNA是独立的预后因素，适合作为筛选吉西他滨维持治疗获益人群的指标。

【关键词】RRM1 mRNA；非小细胞肺癌；吉西他滨；维持治疗

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:022～025)

近年来，吉西他滨由于其较好的疗效和较小的累积毒性而成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)维持治疗比较有前景和希望的药物之一[1-2]。然而，在临床应用吉西他滨于晚期NSCLC维持治疗的过程中，肿瘤对吉西他滨的耐药仍然是导致部分患者疾病进展的主要原因之一，因此有必要筛选预测吉西他滨维持治疗疗效的指标。

核糖核苷酸还原酶(ribonucleotide reductase，RR) 是DNA合成通路中的限速酶，包括M1、M2 两种亚型，是吉西他滨主要作用靶点之一，其M1亚基即RRM1在体内及体外多项研究中均被证实与吉西他滨的疗效有关[3-4]。然而，既往的研究报道的多数是RRM1 mRNA与吉西他滨联合铂类一线治疗晚期NSCLC疗效的关系，目前尚无研究报道其在吉西他滨维持治疗中的疗效预测价值。为此，我们进行了本项研究，以分析晚期NSCLC肿瘤组织RRM1 mRNA表达水平与吉西他滨维持治疗疗效的相关性。

1材料与方法

1.1　资料

收集2009年9月至2013年8月在广州市番禺区中心医院肿瘤科以吉西他滨单药(1 000 mg/m2静脉滴注30 min，第1天，第8天，每3周一次)进行维持治疗的晚期NSCLC共40例，肿瘤组织为支气管纤维镜活检或肺穿刺组织石蜡标本。

入组标准：①经细胞学或组织学确诊为非小细胞肺癌；②按照AJCC/UICC第七版TNM分期分为Ⅳ期；③一线予4～6个周期不含吉西他滨的铂类联合方案化疗取得疾病缩小或稳定；④治疗前常规行血常规、肝肾功能、心电图检查并进行体力状况(PS)评价，具有正常的造血功能和心肝肾功能及良好的PS状态，适合进行吉西他滨单药维持治疗。

1.2　方法

1.2.1检测肿瘤组织中RRM1 mRNA水平将样本匀于均质溶液中，65 ℃处理2 h；将反应后的混合物离心，去除残留的石蜡和碎片，然后将上清液转移到一个新的离心管中；在96孔的反应板上每孔加入40 ml样品混合液，此外每一孔还加入18.5 ml无RNA酶的去离子水，33.3 ml的裂解液，2 ml的阻断剂，1 ml的磁珠和5 ml的特异结合目标基因的探针；将反应板密封后置于54 ℃ 750 rpm摇床孵育18 h。然后用96孔过滤板过滤混合物。真空状态下，用250 ml的洗涤缓冲液(0.1×SSC 和0.03%锂十二烷基硫酸钠)洗涤3次，去除未结合的RNA和其它杂质；通过以下几步检测结合到探针上的目标mRNA ：①50 ℃下，在100 μl预扩增溶液中孵育1 h；②用200 μl的洗涤缓冲液洗涤两次；③50 ℃下，在100 μl扩增溶液中孵育1 h；④用200 μl的洗涤缓冲液洗涤两次；⑤50 ℃下，在100 μl探针标记液中孵育1 h；⑥用200 μl的洗涤缓冲液洗涤两次。50 ℃下，用100 μl SA-PE溶液处理30 min；用Luminex 200系统分析每个样品的荧光值，经广州益善生物技术有限公司提供数据处理软件产生最终结果。

1.2.2疗效评价每2个疗程吉西他滨化疗后对目标病灶及非目标病灶进行疗效评价。按照实体瘤疗效评价标准(Response Evaluation Criterion in Solid Tumor，RECIST)[5]进行疗效评价，疗效定义为：①完全缓解(complete response,CR)：所有目标病灶和非目标病灶均消失，且肿瘤标志物正常；②部分缓解(partial response，PR)：基线病灶长径总和缩小 30%；③疾病稳定(stable disease,SD)：基线病灶长径总和缩小未达PR或增加未到PD，1个或多个非目标病灶和(或)标志物异常；④疾病进展(progression disease，PD)：基线病灶长径总和增加 20%或出现新病灶和(或)非目标病灶进展。

总生存(over survival,OS)定义为患者开始维持治疗至患者死亡或末次随诊时间，无进展生存(progression-free survival,PFS)定义为患者开始维持治疗至疾病进展或虽疾病尚未进展但患者因任何原因死亡的时间，均以月为计算单位。

1.3　统计学分析

两组的年龄、维持化疗周期数采用t检验，性别、PS状态、病理、吸烟状态、一线化疗疗效、维持化疗疗效、接受二线化疗比例等采用Pearson χ2检验，采用Kaplan-Meier生存分析法进行单因素生存分析，并进行Log-rank时序检验，采用Cox 回归以前进法进行多因素分析。应用SPSS 17.0软件进行分析，检验水准P<0.05，均为双侧检验有意义。

2结果

2.1　病例资料

40例中位年龄57岁(36～78岁)，≥65岁10例，<65岁30例；男性24例，女性16例，男女比例为1.5∶1；腺癌30例，鳞癌8例，其它2例；PS评分0分8例，1分29例，2分3例；中位维持化疗周期数为4个周期(范围1～12个)；吉西他滨维持化疗PR 8例(20%)，SD 20例(50%)，PD 12例(30%)。

2.2　肿瘤组织中RRM1 mRNA表达水平

40例肿瘤组织中RRM1 mRNA的中位表达值为0.28(范围0.08～0.60)，均数(0.30±0.15)；按照RRM1 mRNA表达水平分组，40例患者中21例为低表达组(≤0.3)，19例高表达组(>0.3)，RRM1 mRNA低表达组吉西他滨维持治疗疾病控制率(PR+SD)较高(85.7% vs 52.6%，P=0.023)，高表达组接受二线化疗患者的比例较高(63.2% vs 28.5%，P=0.028)，其余临床特征两组间无明显统计学差异，见表1。

表1　两组患者的临床特征(例，%)

2.3　生存结果

全组中位生存时间(Median survival time,MST)为14.9个月(95%CI:10.5-19.3)，中位PFS为5.4个月(95%CI:3.5～7.3)，1年生存率为57.7%。RRM1 mRNA低表达组与高表达组的MST 分别为15.6个月(95%CI:12.5～18.8) 和12.1个月(95%CI:9.1～15.1)(P=0.582)，中位PFS为7.0个月(95%CI:2.8～11.2) 和4.5个月(95%CI:1.7～7.3)(P=0.025)(图1、图2、表2)。

图1　RRM1 mRNA低表达组和RRM1 mRNA高表达

图2　RRM1 mRNA低表达组和RRM1 mRNA高表达

表2　总生存和无进展生存时间比较/%

2.4　Cox多因素分析

Cox多因素回归分析显示，RRM1 mRNA表达水平、吸烟状态是影响PFS的独立预后因素，RRM1 mR

NA高表达(P=0.041)、吸烟(P=0.000)提示患者PFS较短(表3)。

表3　多因素回归分析

3　讨论

Brodowicz等[1]的一项Ⅲ期随机对照研究表明，晚期NSCLC一线4周期吉西他滨联合顺铂方案化疗后疾病无进展的患者接受吉西他滨单药维持治疗较最佳支持治疗可以显著延长患者无进展生存时间。Perol等发表的IFCT-GFPC0502研究[2]也发现晚期NSCLC吉西他滨联合铂类治疗后予吉西他滨维持治疗较观察组虽然未见OS明确差别，但吉西他滨维持治疗PFS显著延长。国内李俊等[6]的研究也发现，吉西他滨维持治疗较最佳支持治疗可以延长晚期NSCLC患者PFS。与这些研究结果相比较而言，我们的研究虽然未设观察组进行对照，但是可以看到吉西他滨维持治疗全组患者的PFS达到了5.4个月，与文献报道相似，因此以上研究及我们的发现提示吉西他滨维持可以改善晚期NSCLC的无进展生存。

但是，国内外的一些研究结果也发现，并不是所有的晚期NSCLC患者都能从吉西他滨的药物治疗中获益。Rosell等[4]进行的一项回顾性研究发现RRM1 mRNA表达情况与吉西他滨一线联合铂类化疗疗效存在显著相关性，RRM1 mRNA低表达患者较高表达患者生存时间显著延长，认为RRM1 mRNA的低表达患者才可能是晚期NSCLC一线吉西他滨联合铂类化疗的获益人群。Simon等[7]报道的根据ERCC1和RRM1表达情况(RT-PCR检测)进行选择用药的前瞻性Ⅱ期随机对照研究更进一步证实了RRM1 mRNA的表达情况在晚期NSCLC一线治疗中的预测价值结果，其结果发现根据RRM1 mRNA的表达选择治疗人群使得治疗

的结果明显好于一般的第三代药和铂类联合的标准方案。而国内张艳等[8]进行的荟萃分析也发现，RRM1低表达的晚期NSCLC患者吉西他滨化疗有效率明显高于高表达患者。

以上研究结果提示我们，RRM1 mRNA低表达的患者可能是吉西他滨联合铂类一线化疗的获益人群，但是应当注意到上述结论是基于一线治疗的研究结果，无法回答RRM1 mRNA表达水平能否预测吉西他滨维持治疗疗效这一问题。而我们的研究结果发现，RRM1 mRNA低表达的患者吉西他滨维持治疗较高表达的患者有较高的疾病控制率和较长的PFS，多因素分析显示，RRM1 mRNA表达水平是吉西他滨维持治疗PFS的独立预后因素(P=0.041)，这一结果与既往RRM1 mRNA预测吉西他滨一线治疗疗效的研究结果类似。但是，与既往的吉西他滨一线治疗研究结果不同的是，在我们的研究中并没有发现RRM1 mRNA低表达的患者较高表达患者有更长的OS获益，我们考虑其原因可能是由于病例数较少以及RRM1 mRNA高表达组较低表达组的有更多的患者在疾病进展后接受了二线治疗所致。

综上所述，吉西他滨维持治疗虽然可以延长晚期NSCL患者PFS，但是应当注意到并不是所有的患者都能从中获益，我们的研究结果发现RRM1 mRNA低表达的患者吉西他滨维持治疗较高表达的患者疾病控制率更高，PFS更长，可以考虑作为筛选吉西他滨维持治疗获益人群的指标。最后，由于我们的研究仅仅是一项小样本的回顾性研究，因此有必要扩大样本量进行进一步的分析或者进行前瞻性的研究分析来进一步明确RRM1 mRNA表达水平对晚期NSCLC吉西他滨维持治疗疗效的预测价值。

参考文献

[1]Brodowicz T,Krzakowski M,Zwitter M,et al.Cisplatin and gemcitabine first-line chemotherapy followed by maintenance gemcitabine or best supportive care in advanced non-small cell lung cancer:a phase Ⅲ trial〔J〕.Lung Cancer,2006,52(2):155-163.

[2]Perol M,Chouaid C,Perol D,et al.Randomized,phase Ⅲ study of gemcitabine or erlotinib maintenance therapy versus observation,with predefined second-line treatment,after cisplatin-gemcitabine induction chemotherapy in advanced non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2012,30(28):3516-3524.

[3]Bepler G,Kusmartseva Irina,Sharma S,et al.RRM1 modulated in vitro and in vivo efficacy of Gemcitabine and platinum in non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2006,24(29):4731-4737.

[4]Rosell R,Danenberg K,Alberola V,et al.Ribonucleotide reductase messenger RNA expression and survival in Gemcitabine/Cisplatin treated advanced non-small-cell lung cancer patients〔J〕.Clin Cancer Res,2004,10(4):1318-1325.

[5]Patrick Therasse,Susan G,Arbuck,et al.New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors〔J〕.J Natl Cancer Inst,2000,92(3):205-216.

[6]李俊，郭晓红，孙爱华，等.吉西他滨维持治疗晚期非小细胞肺癌的疗效分析〔J〕.中国医药科学，2012，2(13):74-75.

[7]Simon G,Sharma A,Li X,et al.Feasibility and efficacy of molecular analysis-directed individualized therapy in advanced non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2007,25(19):2741-2746.

[8]张艳,苏欣,施毅,等.RRM1表达与吉西他滨治疗晚期NSCLC疗效关系:Meta分析〔J〕.解放军医学杂志,2012,37(2):135-140.

(编辑：吴小红)

Analysis of the Relationship between RRM1 mRNA Expression Level and Efficacy of Gemcitabine Maintenance Therapy for Advanced Non-Small Cell Lung Cancer

LINLiping,ZHANGXuchao,HUJiazhu,etal.PanyuCentralHospital，Guangzhou,511400

【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between RRM1 mRNA expression level in tumor tissues and the clinical efficacy of gemcitabine maintenance therapy for advanced non-small cell lung cancer.MethodsThe expression level of RRM1 mRNA in tumor tissues of 40 patients with advanced NSCLC were detected by the suspension biochip.Relationships between RRM1 mRNA expression level and the clinical characteristics,efficacy of gemcitabine maintenance therapy,progression free survival and overall survival were analyzed.ResultsThere had no significant difference between RRM1 mRNA low expression group and high expression group in clinical characteristics and overall survival (15.6 months vs 12.1 months,P=0.582).However,RRM1 mRNA low expression group had higher disease control rate (DCR) (85.7% vs 52.6%,P=0.023 ) and longer progression-free survival (PFS) (7.0 months vs 4.5 months,P=0.025).ConclusionPatients with RRM1 mRNA low expression have significantly higher DCR and longer PFS in gemcitabine maintenance therapy.RRM1 mRNA expression level is independent prognostic factor and it can be a indicator in selecting patients to accept gemcitabine maintenance therapy.

【Key words】RRM1 mRNA;Non-small cell lung cancer;Gemcitabine;Maintenance therapy

中图分类号：R734.2

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)01-0022-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.007

通讯作者：曹小龙

基金项目：作者单位:511400 广州市番禺区中心医院(林立平，胡家柱，黄福喜，李薇绽，黎秀月，韩建军，曹小龙)；511400 番禺区肿瘤研究所(林立平，胡家柱，黄福喜，李薇绽，黎秀月，韩建军，曹小龙)；510080 广东省人民医院(张绪超)；510080 广东省肺癌研究所(张绪超)

收稿日期(2015-01-01修回日期 2015-10-16)