酸性铬兰K分光光度法测定硫酸卡那霉素*

王　丽，李杨洲，徐　红，刘　红

(贵州医科大学，贵州　贵阳　550004)



酸性铬兰K分光光度法测定硫酸卡那霉素*

王丽，李杨洲，徐红，刘红

(贵州医科大学，贵州贵阳550004)

建立了利用分光光度法测定硫酸卡那霉素的新方法。在pH4.10的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中，酸性铬兰K溶液的特征吸收峰出现于525 nm处，随着硫酸卡那霉素的加入，该处的吸收峰强度下降。卡那霉素的浓度在0.08～6.0 mg/L范围内与对应溶液的吸光度差值遵守比尔定律，表观摩尔吸光系数ε=9.9×104L/mol/cm，检测限(3σ)为0.018 mg/L。方法应用于硫酸卡那霉素注射液的测定，结果满意。

分光光度法；硫酸卡那霉素；酸性铬兰K

氨基糖苷类抗生素具有良好的杀菌作用，在临床上常用作为抗感染药物使用，硫酸卡那霉素(Kanamycin Sulfate，KANA)就是其中的代表药物[1]。已有文献报道利用高效液相色谱法[2-3]、分光光度法[4-7]、共振瑞利散射法[8-9]等对微量卡那霉素进行定量测定，因此研究卡那霉素的微量分析对于临床用药、测定药物残留等都一定意义。

本文选择酸性偶氮染料铬兰K(Acid chrome blue K)为光度试剂，考察了在弱酸性条件下，酸性铬兰K与硫酸卡那霉素反应的光谱特征、适宜的反应条件和共存物质的影响，建立了测定微量卡那霉素注射液的光度分析方法。

1　实　验

1.1材料与仪器

20 mg/L硫酸卡那霉素标准溶液；0.34×10-4mg/L酸性铬兰K溶液；0.2 mg/L Britton-Robinson(B-R)系列缓冲溶液。

TU-1800pc紫外-可见分光光度计。

1.2试验方法

于10mL比色管中，依次加入B-R缓冲溶液(pH4.10)1.0mL、0.34×10-4mg/L酸性铬兰K溶液2.0mL、20 mg/L硫酸卡那霉素标准溶液或样品溶液适量，定容后静置15 min。分别用1 cm比色皿盛装溶液，在TU-1800pc紫外-可见分光光度计上进行光谱扫描，并选择在波长525 nm处进行溶液吸光度测定，试剂空白吸光度记为A0，含卡那霉素者吸光度记为A，记录ΔA=A0-A。

2　结果与讨论

2.1吸收光谱

酸性铬兰K及其与卡那霉素缔合物在400～700 nm 范围内的吸收光谱，如图1所示：以水为参比，酸性铬兰K的最大吸收峰在525 nm处(曲线1)，随着硫酸卡那霉素的不断加入，此处的吸光度值逐渐减小(曲线2～4)。以试剂空白为参比时，则525 nm处出现一强负吸收峰(曲线5)。故实验选择525 nm作为测定时的工作波长。

图1　体系的吸收光谱

2.2酸度的影响

试验了B-R缓冲溶液、C-L缓冲溶液、HAc-NaAc缓冲溶液，发现酸性铬兰K与卡那霉素的缔合在这些缓冲溶液中均能进行，但以在B-R中灵敏度较高，且pH最佳范围为pH2.69～7.96，故试验选择用pH4.10 B-R 缓冲溶液，用量1.0mL为宜。

2.3酸性铬兰K溶液用量的选择

卡那霉素浓度为4.0 mg/L，在选定的酸度条件下，酸性铬兰K最适宜的浓度范围为0.51×10-5～1.02×10-5mg/L。可能是浓度较小，酸性铬兰K与卡那霉素的结合反应不完全，灵敏度较低；浓度太大，体系颜色太深，并且酸性铬兰K分子可能自身聚合，导致灵敏度下降。试验加入量为：10mL比色管中加入0.34×10-4mg/L酸性铬兰K溶液2.0mL。

2.4吸光度的稳定性

控制反应温度分别为5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃，ΔA基本不变，试验可选择在室温下进行。室温(20℃)下按试验方法配制好溶液，立即计时测定，并且每间隔2 min记录一次吸光度值。结果显示，计时15～96 min内，ΔA基本不变。试验选在反应20～30 min期间进行测定。

2.5NaCl的影响

固定测定体系中卡那霉素浓度为4 mg/L，按试验方法配制溶液，加入NaCl试验离子强度对ΔA值的影响。体系中加入少量NaCl，对ΔA影响不大，但随NaCl加入量的增加(>585 mg/L)，ΔA降低。原因可能是NaCl浓度较大后，溶液中存在的大量Na+和Cl-，对酸性铬兰K和卡那霉素的结合反应产生了竞争。

2.6干扰实验

2.7方法的线性参数

按试验方法记录的ΔA，以ΔA与对应的卡那霉素浓度作图，绘制标准曲线，得到方法的各种线性参见表1。

525 nm处ΔA有良好的线性关系，计算得到其表观摩尔吸光系数ε=9.9×104L/mol/cm，对11份含有4.0 mg/L KANA的标准溶液进行精密度检验，相对标准偏差为1.68%，以3σ/k求得方法的检出限为0.018 mg/L，更适于痕量KANA的测定。

表1　线性范围参数和检出限

2.8分析应用

取一定量的硫酸卡那霉素注射液(规格：2mL:0.5 g，西南药业股份有限公司)稀释后，按试验方法配制溶液，测定硫酸卡那霉素含量，并进行标准加入回收试验，结果见表2。

表2　样品中硫酸卡那霉素的测定结果(n=7)

3　结　论

由于在酸性条件下，酸性铬兰K结构中磺酸基上的钠离子完全解离，以阴离子形式存在；而KANA分子中的氨基被质子化而带正电荷，以阳离子形式存在。此外酸性铬兰K中萘环和苯环具有疏水作用，而KANA除质子化氨基外的环醇母体也具有疏水性。两者可通过静电引力和疏水作用而形成离子缔合物。本文利用该缔合反应建立了测定微量卡那霉素的分光光度法。在最佳条件下，卡那霉素的浓度在0.08～6.0 mg/L范围内遵守比尔定律，表观摩尔吸光系数ε=9.9×104L/mol/cm，检测限(3σ)为0.018 mg/L。将该方法应用于硫酸卡那霉素注射液的测定，结果满意。

[1]诸玲玲,孟现民,张永信.氨基糖苷类药物的发展历程[J].上海医药,2011,32(7):322-326.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(第二部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:1316-1317.

[3]王金凤,杨化新,朱俐,等.HPLC-NQAD和HPLC-ELSD法测定硫酸卡那霉素注射剂的含量 [J].药物分析杂志,2014,34(4):644-648.

[4]徐红,刚果红光度法测定微量硫酸卡那霉素[J].贵阳医学院学报,2007,32(1):50-52.

[5]唐宁莉,杨兰玲,蒋杰,等.虎红光度法测定硫酸卡那霉素[J].桂林理工大学学报,2010,30(1):137-139.

[6]徐红,刘绍璞,罗红群.偶氮蓝分光光度法测定卡那霉素[J].理化检验-化学分册,2007,43(9):729-731.

[7]徐红,冯建.褪色光度法测定硫酸庆大霉素的新方法研究[J].化工时刊,2007,21(8):39-41.

[8]陈效兰,张慧,刘冰,等.纳米金核酸适配体共振瑞利散射光谱检测卡那霉素的研究[J].分析测试学报,2014,33(6):709-713.

[9]王明霞,刘忠芳,胡小莉,等.达旦黄与氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱研究及其应用[J].理化检验-化学分册,2006,42(1):16-21.

Spectrophotometric Determination of Kanamycin Sulfate with Acid Chrome Blue K*

WANG Li,LI Yang-zhou,XU Hong,LIU Hong

(Guiyang Medical University,Guizhou Guiyang 550004,China)

A determination method for Kanamycin Sulfate by spectrophotometry was studied.In pH4.10 Britton Robinson buffer solution,acid chrome blue K had a strong absorbance at 525 nm and the addition of Kanamycin Sulfate into acid chrome blue K solution resulted in the decrease in the absorbance value at 525 nm.The decrease in absorbance value was linear with the concention of Kanamycin Sulfate.Under the optimal conditions,Beer’s law was obeyed in the range of 0.08～6.0 mg/L,with apparent molar absorptivity of 9.9×104L/mol/cm and the detection limit of 0.018 mg/L.The method was applied to determine the sodium injection solution with satisfactory results.

spectrophotometry; Kanamycin Sulfate; acid chrome blue K

2014年高等学校大学生创新创业项目(201410660010)；贵州省科技厅联合基金(黔科合LG[2012]032号)。

王丽(1985-),女，讲师，主要研究方向：环境分析。

徐红(1970-)，女，教授，主要研究方向：分子光谱分析。

O657.31

A

1001-9677(2016)011-0158-02