女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体检测对病情的评估价值

蔡智慧，梁义娟，李瑞，王敬，杨媛媛，马晓慧

（1.河北大学附属医院妇科，河北 保定 071000；2.河北省望都县医院妇产科，河北 保定 071000）

论著

女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体检测对病情的评估价值

蔡智慧1，梁义娟1，李瑞1，王敬1，杨媛媛1，马晓慧2

（1.河北大学附属医院妇科，河北 保定 071000；2.河北省望都县医院妇产科，河北 保定 071000）

目的分析女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体检测对病情的评估价值。方法选取2012年7月-2014年7月间至该院接受检查的女性不孕患者138例作为观察组对象。另取同期在该院因宫颈炎症接受检查的已育女性106例作为对照组。比较两组研究对象的血清及宫颈黏液自身抗体水平、外周血调解性T细胞（Treg）水平，进一步分析观察组患者中自身抗体与Treg水平的相关性。结果①观察组患者的血清及宫颈黏液中抗精子抗体（AsAb）、抗卵巢抗体（AoAb）、抗人绒毛膜促性腺激素（AhCGAb）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、甲状腺自身抗体（ATA）、抗-β-2糖蛋白1抗体（α-β-2GP1）水平高于对照组女性（P＜0.05）；②观察组患者的外周血Treg水平低于对照组（P＜0.05）；③不孕症女性血清及宫颈黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗体水平与外周血Treg水平呈负相关（P＜0.05）。结论女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体水平大幅上升，与患者的疾病发生发展以及病情严重程度均关系密切，是临床诊断及指导治疗的理想指标。

不孕症；自身抗体；调解性T细胞

不孕症的临床发病率不低，其中女性不孕症占50%以上，发生原因至今仍未完全明了，主要包括炎症、组织损伤、自身免疫等等，其中自身免疫学说被较多学者认可。研究认为女性不孕症患者体内生殖相关抗体大量产生，通过与针对性抗原形成复合物导致性器官的病理损伤，最终导致受精卵形成、受精卵着床、胚胎生长等受阻。本次研究主要分析女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体检测对病情的评估价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年7月-2014年7月于河北大学附属医院接受检查的女性不孕患者138例作为观察组对象。另取同期在本院因宫颈炎症接受检查的已育女性106例作为对照组。均抽取外周静脉血及宫颈黏液。观察组患者年龄28～38岁，平均（32.18± 4.66）岁；对照组女性年龄27～38岁，平均（31.79± 4.35）岁。本次研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象在了解研究过程后均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 抗体检测标本采集抽取所有研究对象肘静脉血5 ml，经3 000 r/min离心后取上清液；用窥阴器暴露宫颈后，采用棉签擦拭宫颈管内约0.5 cm吸取宫颈黏液，随后置入试管内送检。

1.2.2 自身抗体检测采用抗体定性试剂盒检测所有研究对象血清及宫颈黏液中的自身抗体水平，具体包括：抗精子抗体（anti-sperm antibodies，AsAb）、抗卵巢抗体（anti-ovarian antibodies，AoAb）、抗人绒毛膜促性腺激素（anti-human chorionic gonadotropin antibodies，AhCGAb）、抗子宫内膜抗体（endometrial antibody，EMAb），甲状腺自身抗体（anti-thyroid autoantibody，ATA），抗-β-2糖蛋白1抗体（anti-β-2 glycoprotein 1 antibodies，α-β-2GP1），所有操作均按照试剂盒说明书进行。

1.2.3 调节性T细胞（regulatory cells，Treg）检测抽取患者外周静脉血，肝素抗凝后加入抗体，室温孵育后加入细胞裂解液，1 000 r/min洗涤5 min后弃上清液，震荡均匀后采用流式细胞仪测定其中Treg水平。1.3统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，相关性分析用Pearson分析、以相关系数r表示组间的相关性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清自身抗体水平

观察组患者的血清AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于对照组女性（P＜0.05）。见表1。

表1 两组研究对象的血清自身抗体水平比较（ng/ml，±s）

表1 两组研究对象的血清自身抗体水平比较（ng/ml，±s）

组别AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1观察组3.26±0.632.71±0.693.46±0.723.15±0.592.67±0.353.15±0.47对照组0.92±0.071.05±0.121.42±0.210.92±0.091.14±0.150.89±0.11 t值8.247.248.459.636.537.26 P值0.0150.0230.0130.0110.0270.021

2.2 宫颈黏液自身抗体水平

观察组患者的宫颈黏液AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于对照组女性（P＜0.05）。见表2。

表2 两组研究对象的宫颈黏液自身抗体水平（ng/ml，±s）

表2 两组研究对象的宫颈黏液自身抗体水平（ng/ml，±s）

组别AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1观察组3.82±0.491.92±0.191.91±0.271.76±0.271.82±0.191.76±0.35对照组1.01±0.090.74±0.081.08±0.180.72±0.081.02±0.131.18±0.21 t值6.385.887.128.368.729.27 P值0.0240.0290.0210.0170.0130.011

2.3 Treg水平

观察组患者的外周血TREG比例为（3.27± 0.38）%，水平低于对照组的（8.93±1.21）%（P＜0.05）。见附图。

2.4 自身抗体与Treg水平相关性

不孕症女性血清及宫颈黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗体水平与外周血TREG水平呈负相关（P＜0.05）。见表3。

附图两组患者外周血中Treg比例比较

表3 不孕症患者的自身抗体与TREG水平的相关性

3 讨论

全球不孕不育症发病率呈递增趋势，目前我国不孕症患病率约为5%～10%，其中以女方因素导致的不孕不育占50%以上。女性不孕症的发生因素较多，包括子宫、输卵管、卵巢等生育器官因素，炎症因素，自身免疫因素等。有研究显示免疫因素导致的女性不孕占12%以上，且有递增趋势，说明自身免疫原因已经成为造成女性不孕的最主要因素之一。

生殖免疫抗体可以从精子活性、受精卵形成、胚胎着床等多个环节干扰女性生殖过程，严重影响女性生育能力。AsAb是不孕不育患者体内最多见的自身抗体，在正常女性中当精子进入生殖道后，女性生殖道的自身屏障作用可以抑制对精子抗原产生免疫应答，故无AsAb产生。当生殖道炎症、出血等异常情况下，黏膜屏障被破坏，精子与血液接触后将激发女性免疫系统而产生AsAb，阻碍精子活力以及受精卵的形成。AoAb可以由卵巢任何一种成分在感染或者手术等诱因下产生，是卵巢组织的多靶位抗体，其与异常表达的抗原结合可以导致卵巢病理损伤，当发生颗粒细胞变性坏死、黄体细胞胆固醇代谢困难时，可以影响雌孕激素产生，引起强烈的抗生育作用。AhCGAb可以与hCG特异性结合降低hCG活性及浓度，致使hCG无法有效支配受精卵着床以及维持妊娠。EMAb是子宫内膜异位症的标志性抗体，以子宫内膜为靶细胞，可以导致子宫内膜免疫性损伤，最终引发子宫内膜发育不良、内膜细胞结构改变，导致受精卵着床困难，患者不孕或者流产概率成倍增加。本次研究对不孕症女性及正常可以生育的女性进行血清及宫颈黏液中上述抗体水平检测，结果显示，观察组患者的血清及宫颈黏液中AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb水平明显高于对照组女性（P＜0.05），提示不孕症女性体内存在高水平的生殖免疫抗体，与不孕症的发生关系密切。

α-β-2GP1是导致APS的主要抗体，当α-β-2GP1与ATA结合后可以导致血液凝固调节发生障碍，血管内血栓形成阻碍胎盘循环，胎盘功能迅速减低，最终导致流产发生。ATA普遍存在于育龄期女性中，在复发性流产女性中表达率大幅增加，是导致不孕、流产及早产等的独立危险因子之一。上述研究检测了不孕症及健康女性的血清及宫颈黏液中上述抗体水平，结果显示：观察组患者的血清及宫颈黏液中ATA、α-β-2GP1水平明显高于对照组女性（P＜0.05），提示ATA、α-β-2GP1在女性不孕症发生中也发挥了重要作用，是不孕症产生的因素之一。

Treg是一类控制体内自身免疫反应的T细胞亚群，与各类自身免疫性疾病的发生均关系密切。有研究显示Treg的异常表达是导致女性不孕症的一个重要因素，当Treg表达量降低时，对机体的自身抗体抑制性降低，最终导致自身抗体大量表达并引起组织病理损伤，最终导致不孕、流产及早产的发生。上述研究结果显示观察组患者的外周血Treg水平显著低于对照组女性（P＜0.05），提示Treg对自身免疫反应的抑制减弱与不孕症的发生关系密切，也间接证明了自身抗体的表达量增加及自身免疫反应的增强是导致不孕症发生的关键环节。在进一步对自身抗体水平与外周血Treg水平进行相关性分析后发现，不孕症女性血清及宫颈黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗体水平与外周血TREG水平呈负相关（P＜0.05），提

示自身抗体水平的升高可以直接表明不孕症患者自身免疫水平的紊乱，且与紊乱程度直接相关，可以作为判断病情严重程度以及指导临床治疗的重要指标之一。

综上所述，得出以下结论：女性不孕症患者血清及宫颈黏液中自身抗体水平大幅上升，与患者的疾病发生、发展以及病情严重程度均关系密切，是临床诊断及指导治疗的理想指标，值得在日后临床实践中推广应用。

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[8]刘彩霞,高美华,常继贤.自身抗体和生殖激素失调与女性不孕症的相关性研究[J].吉林医学,2011,32(2):219-223.

（张蕾 编辑）

Evaluation of autoantibodies in serum and cervical mucus of female infertility patients

Zhi-hui Cai1,Yi-Juan Liang1,Rui Li1,Jing Wang1,Yuan-yuan Yang1,Xiao-hui Ma2
(1.Department of Gynecology,the Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding,Hebei 071000, China;2.Department of Gynecology,the People's Hospital of Wangdu County, Baoding,Hebei 071000,China)

Objective To analyze the assessed value of autoantibodies in female infertility patients'serum and cervical mucus.Methods Totally 138 cases of female infertility patients in our hospital between July 2012 and July 2014 were chosen as observation group,at same time 106 cases of female with cervix inflammation were chosen as control group.Serum and cervical mucus levels of autoantibodies and peripheral Treg level were compared between the two groups.The relationships between the autoantibodies with Treg level in the observation group were further analyzed.Results The serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA and α-β-2GP1 in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05).The peripheral Treg level in the observation group was significantly lower than that in the control group(P＜0.05).In the observation group, serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA,α-β-2GP1 were inversely related with peripheral blood Treg level(P＜0.05).Conclusions In infertile females,serum and cervical mucus levels of antibodies significant increase,which are closely related to the development and severity of th disease,and are ideal indicators for clinical diagnosis and treatment guidance.

infertility;autoantibody;Treg

R711.6

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.008

1005-8982（2016）22-0038-04

2016-02-23

梁义娟，Tel：0312-5981092，15833868558