氩氦刀治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响

张鹏

（青海大学附属医院介入科，青海 西宁 810000）

论著

氩氦刀治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响

张鹏

（青海大学附属医院介入科，青海 西宁 810000）

目的分析氩氦刀治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2013年7月-2014年7月于该院接受治疗的肝癌患者88例作为研究对象。按照随机数字表法将所有入组患者分为观察组及对照组各44例，对照组患者接受单纯肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗，观察组患者接受TACE联合氩氦刀治疗。比较两组患者的治疗后血清血管新生相关指标、侵袭相关指标、肿瘤预后相关指标等水平差异。结果观察组患者的治疗后血清内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-α（HIF-1α）、层黏连蛋白（Lam）水平值低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组患者接受治疗后的血清细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）水平均低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组患者的治疗后甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、a-L-岩藻糖苷酶（AFU）、可溶性B7-H3（sB7-H3）水平低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论肝癌患者接受氩氦刀治疗，可以降低肿瘤细胞的恶性生物学行为，有助于治疗效果的实现以治疗预后的改善，具有积极的临床意义。

肝癌；氩氦刀；恶性生物学行为

原发性肝癌是临床最常见、恶性程度最高的肿瘤之一，对于无法接受手术治疗的患者肝动脉化疗栓塞（transarterial chemoembolization，TACE）是首选方式。随着TACE的应用增多，逐渐发现其无法阻断

所有肿瘤血供、肿瘤细胞坏死不完全，术后早期的复发率较高，多需要进行反复手术治疗，对患者免疫功能及肝功能均造成冲击[1]。氩氦刀靶向冷冻消融治疗在近年获得迅速发展，主要通过理化效应破坏肝癌细胞及供血血管，进一步引起相应组织细胞的坏死，达到杀灭肿瘤细胞的目的。氩氦刀创伤小、疗效肯定，据目前研究显示治疗有效率达90%以上，是肿瘤又一有效的辅助治疗手段[2]。目前，有较多学者推荐将TACE与氩氦刀靶向冷冻消融治疗组合成新的肝癌治疗方案，扩大肿瘤杀灭效果、优化肝癌的治疗有效性。本次研究主要分析氩氦刀治疗对肝癌患者癌细胞恶性生物学行为的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年7月-2014年7月于青海大学附属医院接受治疗的肝癌患者88例作为研究对象。纳入标准：①经细胞学或者病理确诊为肝癌；②因肿瘤侵犯肺血管无法切除、患者拒绝手术治疗、年龄较大等不适宜进行手术的患者；③治疗前1周未接受放化疗及分子靶向治疗；④预计生存时间不短于3个月；⑤不伴妊娠、哺乳，急慢性感染性疾病；⑥不伴有精神异常、无精神病史。

按照随机数表法将所有入组患者分为观察组及对照组各44例，两组患者的性别、年龄、肿瘤直径等基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组肝癌患者的基线资料比较（n=44，±s）

表1 两组肝癌患者的基线资料比较（n=44，±s）

组别男/女/例年龄/岁肿瘤直径/cm观察组24/2062.18±7.053.81±0.41对照组23/2161.76±7.223.76±0.37 t/χ2值0.310.290.16 P值0.3710.4280.572

1.2 治疗方法

对照组患者接受TACE治疗，具体如下：改良Seldinger法经股动脉穿刺，经腹腔动脉及肠系膜上动脉造影、了解肿瘤血供，采用微导管超选到肿瘤供血动脉。经导管缓慢注入化疗混合药物（FUDR750～1 000 mg，奥沙利铂100～150 mg，吡柔比星10～20 mg），其后采用吡柔比星及超液态碘化油、在DSA透视下对供血动脉进行栓塞（吡柔比星10～20 mg+超液态碘化油10～20 ml充分乳化），对于血供丰富难以栓塞者可以加用350～560μm明胶海绵栓塞，间隔4～6周后进行再次TACE术治疗。

观察组患者接受TACE联合氩氦刀治疗，先T ACE治疗，后氩氦刀冷冻消融治疗，TACE方法同对照组，氩氦刀治疗方法如下：所有患者均经计算机体层摄影（computed tomography，CT）引导下治疗，采用利多卡因局部浸润麻醉后，按照手术需要摆放患者体位。根据患者肿瘤大小选择不同规格的冷冻消融刀，术前CT扫描以确定进针点、进针方向。常规消毒铺巾后切开预定穿刺点的皮肤，冷冻消融刀穿刺至预定的肿瘤部位，开启冷冻主机并引入氩气冷媒，刀尖区域降温至-140℃以下，持续时间10～15 min（根据肿瘤大小合理调整冷冻消融的持续时间）。冷冻消融期间持续进行CT扫描监测，理想的冰球范围为超过肿瘤边缘。关闭氩气后引入氦气热媒，复温至20℃～30℃，重复冷热循环，最后拔除氩氦刀并布局包扎。术后注意进行心电图、血压、血氧饱和度等基本生命体征监护。

1.3 观察指标

1.3.1 血管新生相关指标治疗后3周，抽取患者空腹外周静脉血5 ml，高速离心后取血清，采用酶联免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）测定其中血管新生相关指标水平，包括内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及缺氧诱导因子-α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、Ⅳ型胶原纤维（collagenⅣ，CollⅣ）、层黏连蛋白（Laminin，Lam）。

1.3.2 侵袭相关指标治疗后3周，抽取患者空腹外周静脉血5 ml，高速离心后取血清，采用ELISA测定其中侵袭相关指标水平，包括细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、内皮细胞特异性分子-1（endothelialcellspecific molecule-1，ESM-1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator，uPA）。

1.3.3 肿瘤预后相关指标治疗后3周，采用ELISA法测定患者血清中肿瘤活性相关指标，具体包括甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、癌胚抗原（Carcinoembryonicantigen，CEA）、a-L-岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）、可溶性B7-H3（soluble B7-3 molecule，sB7-H3）。

1.4 统计学方法

选用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用t检验，计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血管新生相关指标

治疗前两组患者的血清血管新生相关指标水平，差异无统计学意义（P＞0.05），观察组患者的治疗后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平值低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.2 侵袭相关指标

治疗前两组患者的血清侵袭相关指标水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05），观察组患者接受治疗后的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA水平均低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.3 肿瘤预后相关指标

观察组患者的治疗后AFP、CEA、AFU、sB7-H3水平低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表2 两组患者的治疗前后血清血管新生相关指标值比较（n=44，±s）

表2 两组患者的治疗前后血清血管新生相关指标值比较（n=44，±s）

组别VEGF/（pg/ml）HIF-1α/（ng/L）CollⅣ/（pg/ml）Lam/（ng/ml）治疗前治疗前治疗前治疗前治疗后观察组2194.73±264.92734.56±80.47112.84±16.7247.26±6.33672.18±73.66113.72±10.67316.25±40.3753.18±4.88对照组2231.64±283.61 1063.27±105.61119.52±19.6266.42±7.47683.62±70.59316.09±34.28309.62±45.17114.67±10.81 t值0.537.380.398.270.428.380.369.63 P值0.4320.0190.4730.0150.4030.0130.4930.011治疗后治疗后治疗后

表3 组患者的治疗前后血清侵袭相关指标值比较（n=44，±s）

表3 组患者的治疗前后血清侵袭相关指标值比较（n=44，±s）

组别ICAM-1/（ng/ml）ESM-1/（ng/ml）MMP-13/（ng/ml）uPA/（μg/ml）治疗前治疗前治疗前治疗前治疗后观察组18.35±2.736.38±0.7421.73±2.647.39±0.85264.36±30.5193.73±9.524.73±0.511.17±0.21对照组19.17±2.9313.15±2.5317.15±2.5912.76±1.42271.84±34.21173.25±20.184.89±0.621.92±0.26 t值0.266.480.325.890.478.290.175.83 P值0.3920.0230.3510.0320.2630.0170.4630.041治疗后治疗后治疗后

表4 两组患者的治疗后血清肿瘤预后相关指标值比较（n=44，±s）

表4 两组患者的治疗后血清肿瘤预后相关指标值比较（n=44，±s）

组别AFP/（μg/L）CEA/（μg/L）观察组105.33±13.856.33±0.74对照组245.18±28.3714.27±2.83 t值8.239.16 P值0.0100.007 AFU/（u/L）sB7-H3/（ng/L）57.32±4.9163.92±5.88 92.61±7.88113.71±8.04 7.349.48 0.0150.004

3 讨论

原发性肝癌是临床肿瘤恶性程度排名前3位的疾病，5年生存率较低，由于肝脏代偿能力强、早期不表现出明显躯体不适，多数患者至临床确诊时已经到达中晚期。因此保守治疗是治疗肝癌的最主要方式，对于错失肿瘤手术切除时机的患者，目前临床治疗首选TACE。TACE通过将导管选择性的插入肿瘤供血动脉中并注入栓塞剂，达到闭塞肿瘤供血动脉、阻断肿瘤细胞营养供应的作用，最终实现肿瘤组织缺血坏死的目的。TACE治疗后短期内可以迅速缩小肿瘤直径、效果显著，但是该术式多难以完全杀灭肿瘤细胞、完全阻断肿瘤血供。故TACE治疗长期疗效有限，反复多次TACE治疗可以加重患者的肝功能损伤，制约TACE在肝癌中的应用。

氩氦刀是氩氦冷冻消融技术的简称，是一种微创超低温冷冻消融肿瘤的先进医疗技术，于上世纪90年代兴起，是微创肿瘤治疗技术发展的新成果，目前在临床中也有所应用[3]。氩氦刀治疗的机制是冷冻后肿瘤细胞内冰晶的物理损伤，不可逆性使肿瘤细胞坏死。氩氦刀技术纯属物理治疗，具有彻底摧毁肿瘤的作用，治疗中不会导致肿瘤细胞扩散，且治疗过程痛苦小、患者术后恢复快，还可以有效地调控细胞因子和抗体的分泌。在TACE治疗基础上加入氩氦刀进行联合治疗是一种最新的肝癌治疗模式，有望弥补单纯TACE治疗的不足，扩大整体治疗效果。本次研究中观察组患者接受TACE联合氩氦刀治疗，在先行TACE治疗后对碘油缺失区域进行氩氦刀治疗，对照组患者接受单纯TACE治疗，从肝癌相关恶性生物学行为指标的血清表达上判断治疗效果的差异[4]。

肝脏肿瘤细胞的活性有赖于动脉血液提供氧需及营养，TACE治疗也是基于该原理阻断肿瘤血供。血管新生因子的存在可以促进肿瘤新血管生成，为残留的肿瘤细胞供氧、促使肿瘤增殖形成新病灶，甚至可以发生远处转移，是TACE治疗效果不佳、术后复发转移的主要原因之一[5]。肝癌患者的血清血管新生因子的表达可以一定程度上反映临床治疗的有效性，也直接关系到治疗后患者的肿瘤复发可能性。VEGF、HIF-1α、CollⅣ、Lam均是临床多见的血管新生相关指标。VEGF是最主要的促血管生成因子，HIF-1α在缺氧条件下稳定表达，与靶基因结合后可加速肿瘤生长，CollⅣ、Lam是血管基膜及肿瘤包膜的主要成分之一。本次研究中观察组患者的治疗后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平均较低，提示加入氩氦刀治疗后可以更为彻底的阻断肿瘤细胞血供、进一步抑制肿瘤血管新生的能力，有助于临床效果的实现及维持。

恶性肿瘤细胞与良性肿瘤区别的关键之处在于前者具有侵袭能力，TACE及氩氦刀治疗的最终目的均是杀灭肿瘤细胞、最大程度的解除其侵袭转移能力。TACE联合氩氦刀可以取长补短，TACE治疗减少肿瘤血供并闭塞多处小血管后，大幅减少肿瘤内部的热池效应、提升氩氦刀冷冻区域的冷冻效应，靶区稳定降低更为彻底、肿瘤细胞完全坏死[6]。ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA均为侵袭相关因子，ICAM-1可以介导细胞间机制的相互作用，参与细胞黏附转移过程；MMP-13可以降解多种细胞外基质成分，促进肿瘤细胞的游走、转移；uPA是一种丝氨酸蛋白水解酶，在病理条件下参与细胞迁移、细胞周围基质降解过程[7]。上述研究中观察组患者的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA表达水平较低，提示在TACE治疗基础上进行氩氦刀冷冻消融治疗，可以更为彻底的杀灭肿瘤细胞活性、大幅降低其侵袭转移能力。这与氩氦刀毁损范围超过肿瘤边缘，冷冻时刀尖区域降温至-140℃以下且进行冷热循环操作、彻底杀灭肿瘤关系密切。

对于无法接受根治性手术治疗的肝癌患者，治疗的最终目的为延长患者有质量的生存时间，故治疗后的复发情况是临床最为关注的指标之一。较多因子与肿瘤复发相关，其水平亦可间接预测是否存在肿瘤复发[8]。AFP是肝癌的首选检测指标，与肝癌存在较强的特异性，当肝癌存在以及复发时其水平可大幅上升；CEA是人类胚胎抗原特异决定簇的糖类抗原，存在于原发性肝癌组织中，虽然是一种广谱肿瘤标志物，但是当肝癌患者治疗后CEA水平大幅上升时具有一定的肿瘤复发指向性；AFU在肿瘤组织中的转换增加，与AFP联合检测是可以作为肝癌诊断的有效指标；sB7-H3是B7家族的免疫调控分子，在多种肿瘤细胞中均有表达，当肿瘤复发时其水平可大幅上升[9]。上述研究中观察组患者的血清AFP、CEA、AFU、sB7-H3表达量均较低，提示TACE联合氩氦刀治疗杀灭肿瘤细胞更为彻底，在抑制肿瘤的远期复发方面也更有优势。

综上所述，得出以下结论：肝癌患者接受氩氦刀治疗，可以降低肿瘤细胞的恶性生物学行为，有助于治疗效果的实现以治疗预后的改善，值得在日后临床实践中推广应用。

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（张蕾 编辑）

Effect of argon-helium cryoablation on malignant biological behavior of cancer cells in liver cancer patients

Peng Zhang
(Department of Interventional Radiology,the Affiliated Hospital of Qinghai University, Xining,Qinghai 810000,China)

Objective To analyze the effect of argon-helium cryoablation on cancer cell biological behavior in liver cancer patients.Methods A total of 88 cases of liver cancer patients in our hospital between July 2013 and July 2014 were chosen as research subjects and divided into observation group and control group according to random number table method,each group had 44 patients.The patients in the ontrol group received transarterial chemoembolization(TACE)alone,while the patients in the observation group received TACE and argon-helium cryoablation.Serum angiogenesis-related indicators,invasion related indicators and tumor prognostic indicators were compared between the two groups.Results Serum VEGF,HIF-1α and Lam levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).Serum ICAM-1,ESM-1,MMP-13 and uPA levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).AFP,CEA,AFU and sB7-H3 levels in the observation group were lower than those in the control group,the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusions Argon-helium cryoablation treatment can reduce the malignant behavior of tumor cells in patients with liver cancer,is helpful to achieve a better therapeutic effect and improve the prognosis,and has positive clinical significance.

liver cancer;argon-helium cryoablation;malignant behavior

R735.7

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.009

1005-8982（2016）22-0042-04

2016-03-23