厄贝沙坦对自发性高血压肾素—血管紧张素—醛固酮系统转化酶2m RNA表达的影响

张兆

（菏泽市立医院内三科；山东 菏泽 274031）

厄贝沙坦对自发性高血压肾素—血管紧张素—醛固酮系统转化酶2m RNA表达的影响

（菏泽市立医院内三科；山东 菏泽 274031）

目的探讨厄贝沙坦对自发性高血压肾素—血管紧张素—醛固酮系统转换酶2mRNA表达的影响。方法68例自发性高血压随机分为厄贝沙坦组和对照组，测定各组用药前后患者血压变化，外周血来源巨噬细胞ACE、ACE2 mRNA的含量变化。所获数据采用方差分析和t检验。结果各组治疗4周、8周后血压均降低，厄贝沙坦组降压效果优于对照组（P＜0.05），治疗8周后厄贝沙坦组ACE2含量为（20.8±5.1）μ l，对照组ACE2含量为(15.9±7.8)u/L,两组比较P＜0.05, ACE2mRNA厄贝沙坦组为（0.71±0.07）μ l，对照组(0.50±0.03)μ l，两组比较P＜0.01。结论厄贝沙坦降血压降压效果明显，其降压作用一方面通过与AngⅡAT1受体结合，另一方面通过增加ACE2活性及基因表达实现的。

肾素—血管紧张素—醛固酮系统;高血压/治疗;血管紧张素转化酶2；厄贝沙坦/治疗应用

高血压由于其高发病率及高致残、致死率而成为主要的全球健康问题，目前我国成人高血压患病率为18.8%，约有高血压患者2亿。随着老龄人口的增加，到2025年全球将有15亿人口（大概全球人口的3%）诊断为高血压[1]。高血压是冠心病、心力衰竭、脑卒中等心脑血管病的危险因素。肾素-血管紧张素—醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone RAAS）是调节血压的一个重要机制[2]。不适当的激活RAAS可导致高血压、心脏病和脑卒中等[3]。近年来随着新的代谢轴ACE2-Ang(1-7)-Mas的发现，使这一系统的作用更加复杂，该系统的研究已成为该领域研究的重点及热点。为此，我们自2014年6月—2015年6月自发性高血压患者进行厄贝沙坦药物干预，进一步观察其对RAAS转化酶2（angioten converting enzyme2 ACE2）mRNA表达影响，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 门诊高血压患者68例，男40例，女28例；年龄38～66岁（58.4±8.8）岁。入选标准：高血压诊断符合1999年WHO/国际高血压联盟（ISH）高血压治疗指南中的诊断标准[收缩压＞140 mmHg （1mmHg=0.133kpa）和舒张压＞90 mmHg]。排除标准：继发性高血压患者，严重肝损害，肾功能障碍，心功能不全，糠尿病，甲状腺功能异常，精神疾病患者以及对厄贝沙坦药物过敏者等其他不适参加者。经本院伦理委员会批准，入选者均已鉴定知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 分组 高血压患者68例随机分为厄贝沙坦组和对照组。厄贝沙坦组38例，男22例，女16例；年龄（58.0±6.4）岁。治疗处方：厄贝沙坦组常规治疗基础上加厄贝沙坦150 mg/日[（赛诺菲（杭州）制药有限公司提供）]，对照组在钙离子拮抗剂基础上加β受体阻滞药，4、8周后复诊。两组入选患者常规行血压测定，血常规、尿常规、肝功能、肾功能、血脂测定。两组间性别、年龄、血压、应用钙离子拮抗剂及β受体阻滞剂的剂量比较，P＞0.05无显著性差异，具有可比性。

1.2.2 检测方法血压测量：采用水银柱血压计测量患者坐位右上肢血压。测量前让患者先休息10～15 min，共测量3次，取其均值。标本采集：入选者采晨时空腹12 h以上肘静脉血12 ml，其中2ml（EDTA抗凝全血）送生化室检测ACE、ACE2含量。10mlEDTA抗凝全血进行单个核细胞分离和及总RNA提取。ACE、ACE2测定：取2 ml EDTA抗凝全血，用ELISA双抗夹心法测定患者外周血ACE、ACE2的含量。ELISA双夹心法试剂盒由上海沪峰生物有限公司提供，按照试剂盒说明稀释标准品，建立标准曲线，构建反应体系，经加酶、温育、显色等步骤后用酶联免疫测定仪于450 mm波长测定吸光度。根据标准曲线测定相应样品中ACE、ACE2含量。

将抗凝血10 ml用生理盐水1∶1比例稀释，在离心管中加入等量淋巴细胞分离液，把稀释好的抗凝血沿管壁缓慢加于淋巴细胞分离液面上。水平离心2 000 r/min共20 min，分离外围血单核来源巨噬细胞。加入含10%胎牛血清RPMI 1 640培养液中，在37.0℃，5%体积CO2培养箱中培养4 h。弃去未贴壁细胞，用0.25%胰蛋白酶收集贴壁单核来源巨噬细胞。用生理盐水洗涤后分装。纯化后的单核来源巨噬细胞经抗CD14单抗的FCM流式细胞技术及瑞氏染色证实。参照试剂盒要求提取总RNA。

取2μ l RNA样本，加98μ l 10/00 DEPC水。在紫外分光光度仪上测总RNA浓度及纯度，A260/A280 为1.8～2.0为最佳。再取2ul总RNA进行RT-PCR扩增。引物采取Primer5.0程序设计扩增，ACE引物：上游：5′-ATGCCTCTGCGTGGGACCTC-3′；下游：5′-TACTGCACGTGGCCCATCTC-3；扩增片段114bp.ACE2引物：上游5′-CATTGGACGAAGTGTTGGATCTT-3′，下游为：5′-GAGCTAATGCATGCCATTCACA-3′扩增片段为110bp。GAPDHC上游：5-′CGGATTTGGTCGTATTGGG-3′，下游：5′TCTCGCTCCTGGAAGATGG-3′，扩增片段为218 bp、扩增条件：94℃预变性30 s，98℃变性15 s，59℃退火20 s，72℃延伸30 s（40个循环），4℃保存。扩增仪为伯乐lcycler定量PCR仪。CT值由PCR仪操作软件给出。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0软件，所获数据采用方差分析和t检验。

2 结果

2.1 两组治疗前后血压比较 见表1。对照组和厄贝沙坦组治疗4周后收缩压和舒张压均降低，厄贝沙坦组（132.1±5.8）mmHg，对照组（145.0±3.8）mmHg，两组比较，P＜0.05，有显著性差异；治疗8周后厄贝沙坦组（129.2±3.2）mmHg，降压效果仍强于对照组（138.0±5.1）mmHg，两组比较，P＜0.05，有显著性差异。

2.2 两组治疗前后血清中ACE，ACE2含量比较（见表2）两组治疗前血清中ACE，ACE2含量比较，P＞0.05,无显著性差异。两组治疗4周、8周后，ACE2含量比较，P＜0.05，有显著性差异。

2.3 两组治疗前后周血中单核来源巨噬细胞ACE mRNA、ACE2 mRNA的表达（见表3）治疗前,两组患者外周血单核来源巨噬细胞ACE mRNA、ACE2 mRNA的表达比较，P＞0.05，无显著性差异。治疗4周厄贝沙坦组ACE2 mRNA表达较对照组比较，P＜0.05，有显著性差异；厄贝沙坦组治疗8周后ACE2 mRNA表达与对照组比较，P＜0.01，有显著性差异；而ACE MRNA的变化与之相反。

表1 两组治疗前后血压的变化

表1 两组治疗前后血压的变化

注:与本组治疗前比较，△P＜0.05，与常规组同期比较，＊P＜0.05，1mmHg=0.133 kPa。

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表2 两组治疗前后血清血管紧张素转化酶（ACE）、ACE2含量变化（

表2 两组治疗前后血清血管紧张素转化酶（ACE）、ACE2含量变化（

注:与本组治疗前比较，△P＜0.05，与对照组同期比较，＊P＜0.05。

ACE2组别 例数 治疗前 治疗4周 治疗8周 治疗前 治疗4周 治疗8周对照组 30 25.3±7.2 21.2±4.8△ 20.1±7.0△ 13.0±4.8 15.3±3.9△ 15.9±7.8△厄贝沙坦组 38 27.8±8.9 18.2±7.4△＊ 15.6±6.9△＊ 12.5±6.7 17.6±7.4△＊ 20.8±5.1△＊ACE

表3 两组治疗前后血管紧张素转换酶ACE mRNA、ACE2 mRNA的表达

表3 两组治疗前后血管紧张素转换酶ACE mRNA、ACE2 mRNA的表达

注:与本组治疗前比较，△P＜0.05，与对照同期比较※P＜0.05，＊P＜0.01。

ACE mRNA ACE2 mRNA组别 例数 治疗前 治疗4周 治疗8周 治疗前 治疗4周 治疗8周对照组 30 0.72±0.08 0.64±0.06 0.61±0.01△ 0.44±0.06△ 0.46±0.06 0.50±0.03△厄贝沙坦组 38 0.81±0.03 0.52±0.07△※ 0.42±0.09△＊ 0.42±0.06 0.67±0.06△※ 0.71±0.07△＊

3 讨论

血管紧张素转换酶（ACE）2是一种含有805个氨基酸的ACE类似物，主要功能是水解血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,生成另外一种血管活性肽Ang（1-7）[4]。而Ang（1-7）的主要作用是对抗AngⅡ对机体的不利影响，如升高血压，促心肌肥厚及间质纤维化，促进动脉粥样硬化发展，损害血管内皮功能等[5]。近年来研究发现新的代谢轴ACE2-Ang（1-7）-Mas，研究证实，该系统的作用主要是对抗传统的RAAS途径的ACE-AngⅡ型受体（AT1）对机体的不利影响[6]。肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）在血压调节，水、电解质平衡等方面具有重要作用。血管紧张素转换酶抑制剂（ACEⅠ），AngⅡ受体抗剂（ARB）类药物以其特有的疗效使人们认识到阻断RAAS所带来的益处。目前针对新的代谢轴ACE2-Ang（1-7）-Mas各组分与高血压、心血管疾病的研究绝大多数仅仅局限于动物试验。这主要是因为人体心肌、血管组织需要创伤性手段方可采集，因而限制了该领域的研究。动物试验体外分离培养的单核来源巨噬细胞对醛固酮拮抗剂干预后表现为ACE mRNA的下调及ACE2 mRNA的显著上调，这与在体动物试验心肌，血管组织在醛固酮干预之下的变动一致[7]。Keidai等[8]研究发现人外周血单核来源巨噬细胞具有易采集，且与心肌细胞、血管内皮细胞一样，能够表达ACE mRNA、ACE2 mRNA，参与氧化应、应激反应、炎症反应，血管活性因子的调控等病理生理反应。因此,认为患者外周血中单核来源巨噬细胞可作为对RAAS代谢轴作用研究的媒介，由此间接反应心肌、血管组织中两代谢轴间的相互作用关系。

厄贝沙坦为血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）受体抗剂，能抑制AngⅠ转化为AngⅡ,能特异性地拮抗血管紧张素转换酶1受体（AT1），对AT1的拮抗作用大于AT 28500倍，通过选择性地阻断AngⅡ与AT1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用，广泛用于原发性高血压的治疗。近年来发现[9]AngⅡ受体拮抗剂（ARB）可使ACE2的活性以及基因表达增加，从而可将AngⅡ转换为Ang (1—7)发挥拮抗AngⅡ的作用，这是ARB产生降压作用的另一种新的重要机制。本研究发现厄贝沙坦组经治疗4周，8周后血压控制优于对照组，患者耐受性好，偶尔头晕、咳嗽，一般程度都是轻的，无一例发生严重不良反应而停药。用药8周后患者血清中ACE含量下降，而ACE2含量增加；同样外周血单核来源巨噬细胞ACE mRNA表达出现下调，而ACE2 mRNA的表达明显上调（P＜0.01），提示厄贝沙坦的应用一方面通过阻断AT1受体，拮抗了AngⅡ经AT1受体介异的血管收缩、升高血压的作用；另一方面通过新发现的ACE2-Ang(1-7)-mas代谢轴上调ACE2 mRNA，增加了ACE2活性，使Ang（1-7）的生成增加，从而发挥血管扩张，降血压的作用。

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The Effect of Irbesartan on Angiotensin Converting EnzyMe2 m RNA of RAAS Exp ression in the Spon taneous Hypertensive Patients

Zhang Zhaoli
(Heze Municipal Hospital,Heze 274031,Shandong)

ObjectiveTo observe the effect of irbesartan on the expression of angiotensin converting emzyme 2 (ACE2)mRNA of renin-angiotensin-aldosterone system(RAAS)in the spontaneous hyperten-sive patients.Methods68 spontaneous hypertensive patients were random ly divided into two groups:irbesartan group and control group.Then the content of ACE and ACE2 in serum was detected by ELISA,and the expression of ACE mRNA and ACE2 mRNA in spontaneous hypertensive patients was detected by RT-PCR before and after having been treated.The data obtained using analysis of variance and t test.ResultsA fter having been treated for 4 weeks and 8 w ddks,the blood pressure of patients in two groups were decreased sigifficantly,comparing with control group,irbesartan group seemed to have more obvious therapeutic effect(P＜0.05),in irbesartan group,the content of ACE2 in serum was increased after having been treated for 8 weeks than that in control group,[（20.8±5.1）u/l VS(15.9±7.8)u/l,P＜0.05];and the expression of ACE2 mRNA in spontaneous hypertensive patients in irbesartan group was obviously increased after 8 weeks comparing with control treatment group[（0.71±0.07）VS(0.50±0.03),P＜0.01].ConclusionIrbesartan can reduce blood-pressure by the up-regulation of ACE2 mRNA.

Renin-angiotensin-aldosterone system(RAAS);Hypertension/therapy;Rngiotensin converting enzyme 2(ACE2)Irbesartan/therapetuic use

R544.11

：A

：1008-4118（2016）01-0018-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.01.007

2015-12-25