重复使用的比色杯对TSGF测定的影响研究

雷 鹏

山丹县人民医院检验科 甘肃省山丹县 734100

重复使用的比色杯对TSGF测定的影响研究

雷 鹏

山丹县人民医院检验科 甘肃省山丹县 734100

大量生物学研究证明，细胞恶变时通常出现一些特征变化，如a-酸性糖蛋白和芳香族氨基酸在血清中的含量高于正常，肿瘤浸润或转移可引起羟脯氨酸代谢紊乱，导致其在血清中含 量升高。癌变早期，虽然任何一种肿瘤标志物的变化都比较微小，不易被早期检测。但TSGF（苯丙氨酸、酪氨酸、羟脯氨酸、a-酸性糖蛋白联合试剂盒）不是针对某个单一肿瘤标志物，而是联合检测苯丙氨酸、酪氨酸、羟脯氨酸和a-酸性糖蛋白，使其共同显色，提高了检测的灵敏度和特异性。但是在实际工作中，部分医院重复使用比色杯，在检验过程中对检验结果否影响，为了证实在检验过程中的影响，现特对本院20份标本进行TSGF测试，以检测和评估重复使用的比色杯对TSGF测定的影响。

重复使用的比色杯；TSGF测定；肿瘤特异生长因子(TSGF)

1 材料

1.1 试剂

TSGF试剂盒（福建新大陆生物技术有限公司提供）。

1.2 检测对象

本院20位住院患者，其中所用样本血清全部为正常标准血清（排除溶血，脂血标本）。

1.3 仪器与试剂

722S分光光度计(上海精密科学仪器有限公司提供)，TSGF试剂盒（苯丙氨酸、酪氨酸、羟脯氨酸、a-酸性糖蛋白联合试剂盒）；未开包装比色杯；重复使用的比色杯。

2 方法

2.1 蒸馏水调节

分光光度计波长至470nm。

2.2 分离血清

每份血清分离两份，一份用重复使用过的比色杯测定，另一份用新的比色杯测定。

3 过程

3.1 加样

准确吸取40ul待测血清及40ul六个浓度的标准品，分别加入盛有1ml试剂的反应管中，盖紧盖子，充分混匀；

3.2 显色

将反应管插入反应架中，置于100℃水浴锅中加热15分钟，迅速取出并置于冷水中冷却5分钟以终止反应；

3.3 比色

将反应液倒入0.5cm光程比色杯中，在470nm波长处，测定各管样本的吸光度值；

3.4 计算

TSGF标准品共有六个浓度，分别为0U/ml、20 U/ml、40 U/ml、60 U/ml、80 U/ml、100 U/ml。用标准浓度作横坐标，所对应的吸光度值为纵坐标作标准曲线，在标准曲线上查得血清标本吸光度值所对应的浓度单位。上清以分光光度法(λ=470nm，光径0.5cm,空比色杯调零)测定A，经标准曲线 计算TSGF含量(μ/ ml)。

4 根据以上结论对以下检测对象进行检测分析

①癌症40例。其中肺癌18例，消化系统癌6例，恶性淋巴瘤8例，白血病(A LL)5例，前列腺癌3例。②非癌疾病30例。其中急性炎5例，慢性炎5例，结核病6例，非炎症 14例。两组患者血清按双盲法检验。

5 TSGF测定

取血清40μl与反应管中试剂混匀，沸水浴内反应15min，自来水冷却后30 00rpm离心。上清以分光光度法(λ=470nm，光径0.5cm,空比色杯调零)测定A，经标准曲线 计算TSGF含量(μ/ml)。以TSGF>64u/ml为该项检测阳性。

6 癌症组

40例中TSGF含量71.7±15.7μ/ml；阳性31例(77.4%)。以肝癌、肺癌 、恶性淋巴瘤等阳性率高。

7 非癌组

30例TSGF含量59.1±12.2μ/ml，显著低于癌症组；阳性率25.0%(9/36 )亦显著低于癌症组(P<0.001)；阳性者主要来自急性炎症、结核病及慢性炎症。

7.1 对照

如表1所示。

表1：癌症组与非癌组血清TSGF含量（U/ml）和阳性率（%）

8 讨论

在酸性环境中，标本中的TSGF与试剂中显色剂反应，形成470nm处有一特征吸收峰的黄褐色物质。从检验结果可看出，癌症组绝大部分病人TSGF水平≥64U/ ml，结果表明肿瘤TSGF阳性率显著高于非癌组。厂家试剂盒推荐正常人TSGF浓度范围为（47±17）U/ml；<64 U/ml为阴性；可疑阳性为64～70 U/ml；阳性标准为≥71 U/ml。我们以TSGF>64u/ml为该项检测阳性。在测定中所得结果做以比较，重复使用过的比色杯所得结果80%处于可疑阳性区间，而使用新的比色杯所得结果则在批间（VC%）≤80%之内。 综上所述，血清TSGF是一种新的、敏感性和特异性较高的广谱肿瘤标志物，检测方法简便快捷，结果稳定。对恶性肿瘤的初筛、早期辅助诊断、疗效评价和预示肿瘤复发具有重要临床意义和应用价值。在检测过程中一定要谨慎处理，拿取比色杯时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，避免接触光学面。同时注意轻拿轻放，防止外力对比色杯的影响，产生应力后破损。 不能将比色杯放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤。当发现比色杯里面被污染后，应用乙醚和无水乙醇的混合液（各50%）清洗，及时擦拭干净。不得将比色杯的透光面与硬物或脏物接触。盛装溶液时，高度为比色杯的2/3处即可，光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸拭。若太脏可用洗液清洗，但时间要短（几秒钟)，再用清水清洗干净，切忌不能用洗洁精之类的清洁剂，以免影响测量。建议检测时使用新开包装比色杯。

[1]齐心亮，权兰秋，张华欣，赵勇，董菊子.恶性肿瘤特异生长因子(TSGF)检测的临床应用评价[J].西北国防医学杂志,2005(10).

[2]李新海等主编.肿瘤标志物的检验与临床[M].北京：人民卫生出版社,1996.

[3]杨进等.肺癌患者与正常人血、尿中氨基酸谱的对比研究[J].临川肺科杂志,2007,12(05):429-430.

[4]张友会主编.现代肿瘤学[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1993.

[5]夏玉宇.化验员使用手册[M].北京:化学工业出版社,1999.