胃癌脉管内癌栓中EGFR c-Met和Ki-67的相关性分析

王爱民， 焦海涛， 吴建龙， 张诗彤， 花海洋， 王学文， 王利民， 李建辉

(1.河北省承德市中心医院, 河北 承德 067000 2.承德医学院, 河北 承德 067000)

胃癌脉管内癌栓中EGFR c-Met和Ki-67的相关性分析

王爱民1， 焦海涛2， 吴建龙1， 张诗彤1， 花海洋1， 王学文1， 王利民1， 李建辉1

(1.河北省承德市中心医院, 河北 承德 067000 2.承德医学院, 河北 承德 067000)

目的：分析胃癌患者脉管内癌栓与EGFR、c-Met和Ki-67表达的关系及其对疾病预后影响。方法：检测EGFR、c-Met和Ki-67在88例胃癌组织，其中包括脉管内癌栓阳性者39例中的表达情况，分析脉管内癌栓阳性组与阴性组患者1年及3年生存率的差异。结果：脉管内癌栓阳性组中EGFR、c-Met和Ki-67的强阳性表达率均高于脉管内癌栓阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。脉管内癌栓阴性患者1年、3年生存率高于同期阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：EGFR、c-Met和Ki-67的表达与脉管内癌栓及患者预后密切相关，脉管内癌栓是胃癌患者预后不良的标志。

胃 癌； 脉管癌栓； EGFR

胃癌是消化道常见肿瘤,位列恶性肿瘤发病率的第2位、死亡率的第3位[1]。脉管癌栓已有研究证实是影响胃癌预后的独立因素[2]，但脉管癌栓与哪些病理因素相关的研究见报道。本文分析胃癌患者脉管内癌栓与EGFR、c-Met和Ki-67表达的关系及其对疾病预后影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料:收集承德市中心医院病理科2010年10月至2012年7月经石蜡包埋的胃癌组织，所有标本均按《中国胃癌诊治规范》进行处理，并按2010年美国癌症联合会(AJCC)发表的第7版《恶性肿瘤的TNM分期》为标准，选出Lauren分型为肠型、TNM分期为T2N1M0的胃癌标本149例，经随访选取其中生存时间≤1年及生存时间≥3年病例共88例进行研究。所有标本临床病理资料及随访记录齐全。胃癌病例中，男性52例，女性36例，平均年龄58.0±4.8岁，其中有脉管癌栓39例、无脉管癌栓49例，1年生存期36例，三年生存期52例。

1.2 主要试剂:甲醇、乙醇、二甲苯、3%双氧水、PBS、氨水、枸橼酸钠缓冲液、苏木素、中性树胶等。即用型兔抗人EGFR单克隆IgG抗体、即用型兔抗人c-Met单克隆IgG抗体、即用型鼠抗人Ki-67单克隆IgG抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。即用型快捷免疫组化试剂盒(鼠)及即用型DAB显色试剂均购自福州迈新生物技术公司。

1.3 方 法

1.3.1 标本的处理标本离体后均立即用10%中性福尔马林充分固定后，经取材、脱水及石蜡包埋制成4μm厚度蜡块，将蜡块连续切片，准备用于HE染色及免疫组织化学染色。

1.3.2 免疫组织化学方法将切片后的标本用二甲苯脱蜡至水后，应用免疫组织化学方法标记胃癌组织及正常胃粘膜组织EGFR、c-Met和Ki-67的表达情况。一抗为兔抗人单克隆抗体，阴性结果对照组以PBS代替，以试剂公司所提供的阳性切片做为阳性对照。

1.3.3 免疫组化结果判定:EGFR和c-Met阳性表达部位在细胞胞膜和胞浆，呈棕黄色颗粒。采用阳性细胞数评分和染色强度评分的Volm双评分法[3]对EGFR、c-Met的阳性表达水平进行判定，0分：阴性(-)；1～2分：弱阳性(+)；3～4分：中度阳性(++)；5～6分：强阳性(+++)。Ki-67在胃癌组织中的阳性表达部位是胞核，棕黄色颗粒状，本研究根据Lee HE等[4]的分类方法，应用20%作为截断值将Ki-67LI分为>20%和≤20%两个范围区间，并分别定义为Ki-67高表达与Ki-67低表达。

1.3.4 统计学方法:通过统计学软件SPSS19.0完成实验资料的统计，采用Kaplan-Meier法计算生存率，计数资料采用χ2检验的方法。统计学结果以P<0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌患者脉管内癌栓阳性及阴性组组织中的表达:39例脉管癌栓阳性胃癌组织中，EGFR强阳性例数为32例(82.1%)，49例脉管癌栓阴性胃癌组织中，EGFR强阳性例数为5例(10.2%)(图1)；39例脉管癌栓阳性胃癌组织中，c-Met强阳性例数36例(92.3%)，49例脉管癌栓阴性胃癌组织中，c-Met强阳性例数8例(16.3%)(图2)；39例脉管癌栓阳性胃癌组织中，Ki-67高表达例数为37例(94.8%)，49例脉管癌栓阴性胃癌组织中，Ki-67高表达例数为9例(18.4%)(图3)，经χ2检验，三者在两组中的表达差异均具有统计学意义(P<0.05)(表1)。

图1 EGFR在脉管癌栓阳性组及脉管癌栓阴性组胃癌组织中的表达(IHC×200)

图2 c-Met在脉管癌栓阳性组及脉管癌栓阴性组胃癌组织中的表达(IHC×200)

图3 Ki-67在脉管癌栓阳性组及脉管癌栓阴性组胃癌组织中的表达(IHC×200)

表1 EGFR、c-Met和Ki-67在脉管癌栓阳性组及脉管癌栓阴性组胃癌组织中的表达

*Ki-67高表达

2.2 胃癌患者脉管内癌栓阳性及阴性术后1年及3年生存率比较脉管内癌栓阴性组1年生存率为85.7%，阳性组1年生存率为66.7%，阴性组明显高于阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)；脉管内癌栓阴性组3年生存率为73.8%，阳性3年生存率为34.6%，阴性组明显高于阳性组，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 脉管癌栓阳性和阴性两组术后1年和3年生存率n(%)

3 讨 论

表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor，EGFR)在多种实体性肿瘤中存在过表达，如胃癌、前列腺癌、食管癌、头颈部肿瘤等[5]。EGFR分布较广泛，并在肿瘤的发生、发展中起重要作用，包括促进肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡，并与血管生成、黏附、侵袭和转移关系密切[6]。已有研究证实在癌旁组织及胃癌组织中，EGFR的表达均明显高于正常组织，且癌旁组织中EGFR的表达又明显高于胃癌组织，提示EGFR在胃癌中的表达呈明显正相关[7]。EGFR在肿瘤中表达增高提示患者存活率低、预后差、转移可能性大。因此，EGFR在实体瘤中过度表达，往往提示病情恶化和病变预后不良[8]。本研究在前人基础上进一步发现EGFR在脉管内癌栓阳性组中的表达高于脉管内癌栓阴性组，脉管内癌栓阴性组患者术后1年及3年生存率显著高于脉管内癌栓阳性组患者，这说明EGFR的高表达与了胃癌的发生、发展密切相关，且脉管内癌栓阳性的胃癌患者预后相对较差。EGFR是肿瘤靶向治疗中一重要靶点，而且针对此靶点的药物相对成熟，已在临床上用于肺癌患者的治疗，在胃癌治疗方面还尚未见报道，通过本实验发现可为靶向药物用于胃癌临床治疗提供一定的理论依据。

c-Met是肝细胞生长因子的受体，c-Met参与了肿瘤细胞增殖与移动的信号转导过程，并在此过程中发挥着巨大作用[9]。研究发现c-Met在很多肿瘤如：前列腺癌、肝癌、甲状腺癌、肾癌、乳腺癌、胰腺等都存在过表达，而且发现c-Met过表达与肿瘤转移和局部组织的侵袭密切相关[10]。对于c-Met的表达与胃癌的关系，有研究发现c-Met的过表达能促进胃癌的侵袭和快速进展，使胃癌患者病情恶化，导致预后较差，认为c-Met是能预测胃癌患者预后标记因子。本研究发现，合并脉管癌栓的胃癌组织中c-Met的表达明显高于无脉管瘤栓的胃癌组织，脉管内癌栓阴性组患者术后1年及3年生存率显著高于脉管内癌栓阳性组患者，进一步说明c-Met的高表达对于胃癌患者特别是胃癌合并脉管内癌栓的患者预后能更好的进行判断，提前针对性的给与临床干预。

脉管癌栓的形成与多种恶性肿瘤的预后不良相关，胃癌也被包括其中。这与我们本次研究结论相符：胃癌合并脉管内癌栓患者术后1年及3年生存率均显著低于脉管内癌栓阴性者，说明脉管癌栓与胃癌的预后不良存在明显的相关性。EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌合并脉管内癌栓患者中的表达均明显高于与脉管内癌栓阴性者，因此提示胃癌及合并脉管内癌栓患者EGFR、c-Met和Ki-67的表达程度越高胃癌患者的预后可能将越差，脉管内癌栓可作为胃癌患者预后不良的标志。

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Correlation Analysis on EGFR c-Met and Ki-67 in Gastric Cancer with Intravascular Cancer Embolus

WANGAimin,etal

(TheCentralHospitalofChengde,HebeiChengde067000,China)

Objective: To analyze the expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer with intravascular cancer embolus and their influence on the prognosis. Methods: The expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in 88 gastric cancer cases and 39 cases of intravascular cancer embolus were detected and the difference between 1-year and 3-year survival rate in cancer embolus positive and negative patients group were analyzed. Results: In gastric cancer tissue with intravascular cancer embolus, the strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 were all higher than those in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus (P<0.05). The strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus 1-year and 3-year survival rate were obviously higher than those of cancer embolus positive group (P<0.05). Conclusions: The expression and prognosis of EGFR, c-Met and Ki-67 are related to the gastric cancer with intravascular cancer embolus, and has rather poor prognostic significance in gastric cancer.

Gastric cancer; Intravascular cancer embolus; Epidermal growth factor receptor

1006-6233(2017)02-0218-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.02.013