尿单核细胞趋化蛋白-1水平在过敏性紫癜肾损害患儿中的意义

沈梦娇，戴霞华，王佳佩，郑吉卡，狄亚珍，钟世玲，应倩倩，傅诗薇

(1.宁波大学医学院，浙江 宁波 315000； 2.宁波市妇女儿童医院 小儿免疫风湿科，浙江 宁波 315000)

尿单核细胞趋化蛋白-1水平在过敏性紫癜肾损害患儿中的意义

沈梦娇1，戴霞华2，王佳佩1，郑吉卡2，狄亚珍2，钟世玲2，应倩倩1，傅诗薇1

(1.宁波大学医学院，浙江 宁波 315000； 2.宁波市妇女儿童医院 小儿免疫风湿科，浙江 宁波 315000)

目的 探讨尿单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平在过敏性紫癜(HSP)肾损害患儿中的作用及意义。方法 153例HSP患儿按是否合并紫癜性肾炎(HSPN)分成HSPN组(n=81)和HSP组(n=72)；根据24小时蛋白定量(TUPr)将HSPN组患儿分为3组，轻度蛋白尿组(n=28)(TUPr<25 mg/kg)，中度蛋白尿组(n=32)(25 mg/kg≤TUPr<50 mg/kg)和重度蛋白尿组(n=21)(TUPr≥50 mg/kg)。同时选取45例健康儿童为对照组，采用酶联免疫吸附测定方法检测各组尿液MCP-1水平。同时测定HSPN患儿血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)、尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mAlb)、尿免疫球蛋白IgG(IgG)、尿转铁蛋白(TRF)、TUPr，分析尿MCP-1与上述指标的关系。结果 HSPN组尿MCP-1水平显著高于HSP组和健康对照组(P<0.05)，HSP组与健康对照组尿MCP-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着TUPr增加，HSPN各组尿液MCP-1表达水平呈明显递增趋势(P<0.05)。HSPN组尿MCP-1水平与尿α1-MG、mAlb、IgG、TRF及TUPr呈正相关，与血清BUN和Cr无关。结论 紫癜性肾炎患儿尿MCP-1水平升高，且与尿蛋白相关，MCP-1作为炎性反应因子，可能参与了HSP肾损害的发生发展。

紫癜，过敏性；肾小球肾炎；趋化因子CCL2

过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura，HSP)是儿童时期最常发生的以小血管炎为主要病理改变的全身综合征，发病率呈逐年上升的趋势[1]。紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN)是HSP引起的肾损害，为儿童期最常见的继发性肾小球疾病之一，重者可逐渐进展为肾功能不全，直至终末期肾脏病而需要依靠长期肾脏替代治疗，严重影响患儿生存质量。HSPN的发病机制尚未完全明确，一项长期随访资料表明，在HSPN慢性进展阶段肾小球内存在持续炎症反应，HSPN的发生、发展，甚至终末期肾病的序贯过程，均有细胞因子的参与[2]。单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)作为一种重要的炎性细胞因子，在炎性反应中对炎性细胞有趋化和激活作用，且参与肾小球肾炎、狼疮肾炎、糖尿病肾病等多种肾脏疾病的发生发展[3]，故推测MCP-1可能与HSP或HSPN的发生发展也相关。通过检测HSP患儿尿液MCP-1水平，探讨MCP-1与HSP及其肾损害和损害程度的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2013年6月至2016年6月宁波市妇女儿童医院小儿免疫风湿科住院的HSP患儿153例为病例组，均符合HSP诊断标准[4]。入院前1个月均未应用过糖皮质激素及免疫抑制剂，排除其他血管炎疾病、血液系统疾病及感染性疾病。病例组根据是否存在肾损害再分为HSP组和HSPN组。HSP组72例，男38例，女34例，年龄2～17(7.71±3.40)岁。HSPN组81例，男45例，女36例，年龄3～16(8.04±2.83)岁。本组81例HSPN患儿，均在病程中出现血尿和(或)蛋白尿。其中肉眼血尿7例，镜下血尿69例[其中血尿(+++)21例，(++)32例，(+)16例]。根据24小时蛋白定量(TUPr)将HSPN组患儿分为3组[5]，轻度蛋白尿组(A组，28例)：男15例，女13例，年龄3～13(7.75±2.84)岁，TUPr<25 mg/kg；中度蛋白尿组(B组，32例)：男17例，女15例，年龄3～14(8.28±2.88)岁，25 mg/kg≤TUPr<50 mg/kg；重度蛋白尿组(C组，21例)：男13例，女8例，年龄4～16(8.04±2.87)岁，TUPr≥50 mg/kg。宁波市妇女儿童医院同期儿科门诊体检的健康儿童45例为对照组，男25例，女20例，年龄2～18(8.78±4.25)岁。各组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院学术伦理委员会讨论通过，所有患儿家属均知情同意。

1.2 检测方法 收集病例组及对照组儿童新鲜中段晨尿8 ml，3 000 r/min，离心10分钟，取上清液置于-80 ℃冰箱保存待测MCP-1，其中HSPN组采血送检血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)，并留取无菌清洁中段晨尿和24小时尿液分别检测尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mAlb)、尿免疫球蛋白IgG(IgG)、尿转铁蛋白(TRF)及24小时尿蛋白定量(TUPr)。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿MCP-1水平，操作严格按照试剂盒说明书进行。试剂盒购于美国RD公司，酶标仪为安图ANTHOS2010型，另外采用美国贝克曼AU5800生化分析仪检测血BUN、Cr、TUPr，采用美国贝克曼IMMAGE800全自动免疫分析系统检测尿α1-MG、mAlb、IgG、TRF采用免疫比散射浊法， 检测试剂均为仪器配套试剂。

2 结 果

2.1 尿液MCP-1水平 在HSPN组、HSP组和对照组中比较：HSPN组尿MCP-1水平(288.01±150.71) pg/ml显著高于HSP组(80.14±46.13) pg/ml和健康对照组(54.84±21.47) pg/ml(P<0.01)，HSP组与健康对照组尿MCP-1水平比较差异无统计学意义(P=0.183)，见图1。

图1 MCP-1浓度在HSPN组、HSP组及对照组中的变化

2.2 HSPN各组间MCP-1水平比较 尿MCP-1水平在A、B、C 3组随患儿蛋白尿程度增加而呈增高倾向(F=99.93，P<0.01)，C组HSPN患儿尿液MCP-1水平(472.14±90.98) pg/ml明显高于A组(142.39±80.64) pg/ml和B组(294.61±73.83) pg/ml，B组HSPN患儿尿液MCP-1水平显著高于A组(P<0.01)，见图2。

图2 尿液MCP-1浓度在HSPN各分组中的变化

2.3 尿液MCP-1水平与各项指标的相关性 HSPN组尿MCP-1水平与TUPr、α1-MG、mAlb、IgG、TRF呈正相关，与血清BUN和Cr无关，见表1。

表1 尿液MCP-1水平与各项指标之间的相关性

3 讨 论

HSPN继发于HSP的肾脏损害，发生率为30%～60%，其肾脏受损程度直接影响HSP患儿的远期预后，是儿童最常见的继发性肾脏疾病之一。HSPN的典型病理改变是系膜增生且伴有系膜区IgA沉积及上皮细胞新月体形成。尽管HSPN患儿大多预后良好，但仍有20%的HSPN患者迁延不愈、病情发展可至慢性肾病，严重者甚至出现肾小球硬化直至终末期肾病[6]。Kawasaki等[2]经过对HSPN患者长达23年的随访证实，肾小球巨噬细胞渗入增多及新月体形成是HSPN病情进展危险因素，约15%的患儿有持续性肾病。另有研究表明，浸润在HSPN患儿的肾小球及肾间质的单核-巨噬细胞通过合成释放大量的生物活性介质及炎症细胞因子，促进肾组织炎症反应[7]。均提示HSPN患者存在多阶段、慢性持续炎性反应。但HSP导致肾损害往往呈隐匿性，缺乏明显的早期症状及体征。国外亦有研究显示，部分HSP患儿血BUN、Cr、尿常规正常，但尿液检测出微量白蛋白时，肾活检结果表现为轻、中度系膜增生型肾小球肾炎，说明肾小球、肾小管的损害已存在[8]。

MCP-1是趋化因子CC亚家族一员，主要由浸润的单核-巨噬细胞、肾固有细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞等在各种细胞因子及理化因素的刺激下合成和分泌，MCP-1不仅对单核-巨噬细胞有趋化作用，对淋巴细胞、嗜碱粒细胞也有趋化作用，是肾脏表达最多、最广泛的趋化因子之一，参与多种肾小球及肾间质疾病的发生发展[9]。正常肾组织弱表达MCP-1，但在儿童狼疮性肾炎、新月体肾炎、糖尿病肾病、IgA肾病等的肾小球系膜区MCP-1表达增强，其表达上升的程度与肾组织的损害程度及肾组织间隙浸润的单核-巨噬细胞数量成正比[10-12]。另有研究发现，MCP-1呈局灶性节段分布于HSPN患儿肾小球系膜区，还可见于其肾小管上皮细胞[13]。Wada等[14]在动物肾炎模型中加入抗MCP-1抗体可以减少巨噬细胞和淋巴细胞浸润，从而减少新月体及瘢痕形成，降低肾功能不全的发生率。因此，可推测MCP-1在肾脏的炎症反应中对炎性细胞有重要的趋化和激活作用，促进肾脏炎症反应的增强和扩大。本研究显示，HSPN患儿尿液MCP-1水平明显高于HSP组和健康对照组，而HSP组和健康对照组MCP-1水平差异无统计学意义，推测尿MCP-1与HSPN有密切关系，MCP-1参与了HSP的肾损害病理过程，与Fuentes及崔玉华等[15-16]研究结果相符。HSPN患儿在肾脏发生炎症时，炎性因子IL-1β和TNF-α等促使MCP-1表达上调，MCP-1与受体CCR2的结合后，通过内皮细胞、单核-巨噬细胞、淋巴细胞等细胞膜上G-蛋白耦联的磷脂酰肌醇途径，将胞外信号转导到胞内，一方面促使循环中的单核-巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱粒细胞等发生迁移并聚集于炎症区域，释放多种活性物质如IL-1、TGF-β、黏附分子和组胺等，放大炎症反应，同时介导系膜细胞增生。另一方面通过细胞内Ca2+浓度增加，引起呼吸爆发，释放溶酶体酶，产生有害氧自由基，导致血管内皮损伤，同时参与了新月体的形成[17]。两者相互作用，从而加速肾间质纤维化、肾小球硬化，最终可导致肾功能衰竭。

研究证实，尿蛋白可反应肾脏疾病的病变程度[18]。本研究根据TUPr对HSPN组患儿予分组观察，结果显示，尿MCP-1水平随患儿蛋白尿程度增加而呈增高倾向，差异具有统计学意义。并且，尿MCP-1与尿α1-MG、mAlb、IgG、TRF、TUPr呈正相关，与血清BUN和Cr无相关性。研究显示，在伴有严重蛋白尿的膜性肾病中，肾小管上皮细胞MCP-1过量表达，并与间质单核细胞的聚集和成肌纤维细胞的活化相关，提示严重的蛋白尿可能是肾小管上皮细胞表达MCP-1上调的主要因素[19]。另有学者在糖尿病肾病患者中发现即使尿蛋白正常，尿MCP-1水平也增高，提示MCP-1水平增高可出现在蛋白尿之前[20]。故可推测尿MCP-1水平可一定程度上反应HSPN肾脏病变的严重程度，并在传统的肾功能指标出现异常前即可出现升高，可作为HSP患者肾损害的早期诊断指标。

本研究认为，尿MCP-1可能参与了HSPN的炎性反应损伤过程，并且在肾损害早期即可出现升高，其水平与肾脏病变的严重程度和尿蛋白有关，检测尿MCP-1水平可用于早期评估肾脏损伤程度或病变的严重程度，是评估HSP肾损伤的理想指标。

综上所述，研究尿MCP-1在HSPN患儿中的作用，可为HSPN发病机制提供免疫学依据，具有潜在的临床应用价值。本研究不足之处在于因肾穿刺为损伤性操作，患儿依从性差，部分家长难以接受，无病理学诊断指标支持，若能将尿MCP-1与肾穿刺结合起来，对今后的研究更有意义。

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Urine monocyte chemoattractant protein-1 in Henoch-Schonlein purpura children with nephritis

Shen Mengjiao1， Dai Xiahua2， Wang Jiapei1， Zheng Jika2， Di Yazhen2，Zhong Shiling2， Ying Qianqian1， Fu Shiwei1

1.Medicine School of Ningbo University， Ningbo 315000， China; 2.Department of Pediatric Rheumatoid Immunity， Ningbo Women and Children's Hospital， Ningbo 315000， China

Di Yazhen，Email：dyz028sci@163.com

Objective To investigate urinary monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) level and clinical significance in Henoch-Schonlein purpura(HSP) children with nephritis. Methods According to whether combined with Henoch-Schonlein purpura nephritis (HSPN)， 153 HSP children were grouped into HSP group (n=72) and HSPN group (n=81). According to total urine protein in 24 hours(TUPr)，HSPN group was further divided into mild proteinuria group(n=28)(TUPr<25 mg/kg)，moderate proteinuria group (n=32)(25 mg/kg≤TUPr<50 mg/kg) and severe proteinuria group (n=21)(TUPr≥50 mg/kg). Meanwhile， 45 healthy children were enrolled as control group. The level of urinary MCP-1 was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. At the same time，the levels of serum creatinine， blood urea nitrogen(BUN)， urinaryα1-micro globulin(α1-MG)， micro-albumin(mAlb)， immuno globulin G (IgG)， transferrin (TRF) and TUPr were detected for their associations with MCP-1.Results Urinary MCP-1 was significantly higher in HSPN group in comparison with HSP group and control group(P<0.05)， but no significant difference was found between HSP group and control group(P>0.05).With the increase of TUPr， urine MCP-1 concentration in HSPN groups showed an obviously increasing trend. Urinary MCP-1 correlated positively with urinaryα1-MG， mAlb， IgG， TRF and TUPr in HSPN， whereas it had no significant correlation with serum BUN and creatinine.Conclusion MCP-1 increase in children with HSPN was correlated with proteinuria. And MCP-1 played an important role in pathological process of HSP lesion.

purpura，Henoch-Schonlein;glomerulonephritis; cytokine CCL2

宁波市医学科技项目(2015C50014)；浙江省医院卫生平台研究计划(2015ZDA027)；宁波市自然基金项目(2014A610280)

狄亚珍，Email：dyz028sci@163.com

R692.34

A

1004-583X(2017)05-0409-04

10.3969/j.issn.1004-583X.2017.05.008

2016-12-06 编辑:武峪峰