TLR4基因多态性与冠心病易感性相关性Meta分析

黄萃园，张洪，白瑞丹

(武汉大学人民医院药学部，湖北武汉430060)

·荟萃分析·

TLR4基因多态性与冠心病易感性相关性Meta分析

黄萃园，张洪，白瑞丹

(武汉大学人民医院药学部，湖北武汉430060)

目的研究TLR4(1196C/T)基因多态性与冠心病(CAD)易感性的相关性。方法计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、VIP、Pubmed、Web of Science、Science direct以及Wiley online library等数据库，检索TLR4 1196C＞T基因多态性与冠心病相关性的病例对照研究，检索文献均为建库至2016年9月17日。由两名评价员按照纳入与排除标准单独进行文献筛选及资料提取，采用RevMan5.0和Stata11.0软件对纳入的文献进行统计分析。结果共纳入7篇文献累积7 891例冠心病和4 018例健康对照。Meta分析结果表明TLR4 1196C＞T基因多态性与CAD风险相关性无统计学意义[等位基因模型T/C：OR=1.02，95%CI(0.77～1.34)，P=0.91；显性模型CT+TT/CC：OR=1.01，95%CI(0.76～1.35)，P=0.92；隐性模型CC+CT/TT：OR=1.03，95%CI(0.61～1.75)，P=0.91；共显性模型CT/CC：OR=1.02，95%CI(0.76～1.36)，P=0.91；共显性模型CC/TT：OR=1.05，95%CI(0.62～1.77)，P=0.87]。各基因模型均无发表偏倚。结论TLR4 1196C＞T基因多态性与CAD易感性无明显相关性，受纳入文献数量限制，上述结论尚需开展更多研究予以验证。

TLR4；基因多态性；冠心病；Meta分析

冠心病(coronary artery disease，CAD)是一种由冠状动脉器质性狭窄或阻塞引起的心肌缺血缺氧(心绞痛)或心肌坏死(心肌梗塞)的心脏病。目前，在全世界范围内，尤其是发达国家，CAD已成为导致人类死亡的主要原因之一[1]。有研究报道，CAD患者的家族成员通常含有许多的易感基因[2]，而之前就有相关文献报道自然免疫系统的遗传变异与心血管疾病的易感性及发展具有重要的联系[3]。Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)是模式识别受体家族中最重要的一类受体蛋白，在先天性免疫反应和获得性免疫反应中发挥了重要的调节作用[4]。TLR4介导的炎症信号通路与动脉粥样硬化的起始、发展具有密切的联系[5]，而越来越多的研究表明，TLR4基因多态性与冠状动脉疾病的形成有关[6-8]。TLR4基因中的2个错义突变位点(896A＞G、1196C＞T)会导致TLR4蛋白表面性质的改变，从而影响TLR4与配体的结合[9]，对疾病的发生或发展产生影响。相关研究揭示了896A＞G与CAD易感性的关系[10]，但有关1196 C＞T与CAD易感性的Meta分析尚未见报道。1196C＞T位点多态性可导致第399位氨基酸由苏氨酸变为异亮氨酸，从而改变TLR4的细胞外结构，导致急性期反应物、可溶性粘附分子以及促炎细胞因子水平的降低，使促动脉硬化作用下降。为了探索TLR4(1196C/T)基因多态性与CAD发病风险的相关性，我们收集相关文献后采用Meta分析方法探讨TLR4(1196C/T)基因多态性与CAD易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 文献收集采用自由词和主题词组合的方式进行文献检索，以TLR4、Toll样受体4、基因多态性、冠心病、急性冠脉综合征、心肌梗死等为检索词在CNKI、VIP和万方数据库检索中文文献；以TLR4 or Toll-like receptor 4、mutation or polymorphism or variant、coronary heart disease or CHD or coronary artery disease or CAD or cardiovascular disease or CVD or myocardial infarction or MI为英文关键词在Pubmed、Web of Science、Science Direct以及Wiley online library数据库中进行检索。为了避免遗漏文献，查阅检索结果中所附相似文献及参考文献。

1.2 纳入标准(1)文献采用病例-对照研究，语言为中文或英文；(2)研究TLR4 1196C＞T(rs4986791)基因多态性与冠心病的关系；(3)研究病例必须确诊CAD、心肌梗死或急性冠脉综合征；(4)文中报告数据完整。

1.3 排除标准(1)研究数据不完整或无法获取数据的文献；(2)重复发表的文献；(3)综述性的文献；(4)对照组基因不符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验；(5)目的基因不包含TLR4 1196C＞T位点；

1.4 数据提取和方法学质量评价文献数据的筛选及提取由2名评议员按上述纳入及排除的标准单独进行，并相互核对。对存在歧义的文献由第三方评议员进行核查确认。提取内容包括：第一作者姓名、发表年份、研究地域、研究人种、疾病分型、基因型检测方法和疾病组与对照组基因型数量等。按照Newcastle Ottawa Scale(NOS)标准[11]对纳入的文献进行方法学质量评价。NOS对文献质量的评价采用了星级系统半量化原则，包括3个部分：①研究人群选择；②病例组和对照组的可比性；③暴露因素的测量。得分≥7分为高质量研究。

1.5 统计学方法应用RevMan5.0软件进行Meta分析，选取5种主要的基因模型计算比值比(OR)值及95%可信区间(95%CI)：等位基因模型(C/ T)、显性模型(CC/CT+TT)、隐形模型(CC+CT/TT)以及共显性模型(CC/CT和CC/TT)。运用χ2检验和I2检验评估异质性，若P≥0.05且I2＜50%，提示各合并的研究数据无显著的异质性，采用固定效应模型，否则采用随机效应模型。计算各研究及合并数据的OR值及其95%CI，绘制森林图。运用Stata11.0软件进行敏感性分析。运用Begg漏斗图及Egger′s检测评估发表偏倚。

2 结果

2.1 纳入文献与方法学评价通过文献检索，查找到了61篇相关文献。通过进一步阅读摘要及全文进行逐层筛选，最终纳入7篇文献[12-18]，累积病例7 891例，对照组4 018例。纳入文献的基本信息及方法学质量评价见表1。

表1 纳入文献的基本信息及方法学质量评价

2.2 Meta结果分析对纳入研究进行Meta分析，在等位基因模型T/C、显性模型CT+TT/CC以及共显性模型CT/CC下存在明显的异质性(P＜0.05，I2＞50%)，故采用随机效应模型。而隐性模型CC+CT/TT及共显性模型CC/TT同质性较好，因此采用固定效应模型。结果表明，在五种基因模型下TLR4 1196C＞T基因多态性与冠心病易感性的相关性无统计学意义。各基因模型合并OR值及95%CI分别为等位基因模型T/C：OR=1.02，95%CI(0.77～1.34)，P=0.91；显性模型CT+TT/CC：OR=1.01，95%CI(0.76～1.35)，P= 0.92；隐性模型CC+CT/TT：OR=1.03，95%CI(0.61～1.75)，P=0.91；共显性模型CT/CC：OR=1.02，95%CI (0.76～1.36)，P=0.91；共显性模型CC/TT：OR=1.05，95%CI(0.62～1.77)，P=0.87，见图1～图5。

图1 等位基因模型T/C的Meta分析森林图

图2 显性模型CT+TT/CC的Meta分析森林图

图3 隐性模型CC+CT/TT的Meta分析森林图

图4 共显性模型CT/CC的Meta分析森林图

图5 共显性模型CC/TT的Meta分析森林图

2.3 敏感性分析运用State 11.0进行敏感性分析。敏感性分析结果表明Kolek等[7]的研究对合并效应量OR的影响最大，剔除该研究后，OR及异质性发生显著变化，提示此可能是异质性存在的主要原因。等位基因模型T/C中剔除该研究后，合并OR值由1.02 (95%CI：0.77～1.34，P=0.91)变为1.134(95%CI：0.922～ 1.393，P=0.233)，同时异质性由P=0.0006，I2=75%变为P=0.051，I2=54.6%；在显性模型CT+TT/CC中剔除该研究后，合并OR值由1.01(95%CI：0.76～1.35，P=0.92)变为1.136(95%CI：0.904～1.428，P=0.274)，异质性由P=0.0006，I2=75%变为P=0.031，I2=59.2%；在共显性模型CT/CC剔除该研究后，合并OR值由1.02(95%CI：0.76～1.36，P=0.91)变为1.127(95%CI：0.887～1.433，P= 0.328)，异质性由P=0.001，I2=73%变为P=0.024，I2= 61.4%。隐性模型CC+CT/TT和共显性模型CC/TT的同质性较好，剔除该研究后OR分别由1.03(95%CI：0.61～1.75，P=0.91)变为0.849(95%CI：0.468～1.541，P= 0.590)、1.05(95%CI：0.62～1.77，P=0.87)变为0.840 (95%CI：0.463～1.526，P=0.567)。

2.4 发表偏倚分析TLR4(1196C/T)基因多态性与冠心病易感性相关性Meta分析发表偏倚见表2。Begg′s漏斗图可见所有的研究基本对称，呈倒置漏斗形(图6)。Egger′s test分析显示，t=-0.22，P=0.834＞0.05，95%CI为(-5.37，4.52)包含0(图7)，因此本研究无发表偏倚。

表2 各遗传模型发表偏倚结果

图6 等位基因模型T/C Begg漏斗图

图7 等位基因模型T/C Egger's线性回归

3 讨论

CAD的基础病理变化是冠状动脉的粥样硬化，而TLR4可以通过激活NF-κB、MAPK信号通路释放炎症因子，刺激炎症细胞的增殖和迁移以及影响动脉粥样硬化过程中单核细胞的聚集[19-21]。CAD造成人类发病和死亡的比例正逐渐上升，常规致病因素如高血糖、高血压、高血脂、吸烟、饮酒等不能完全解释其发病风险，而遗传因素在CAD发病风险中的作用正在逐渐被揭示，许多基因多态性被证明与CAD的发展相关[22-23]。TLR4基因位于9号染色体，包括4个外显子，其第399位(1196C＞T)氨基酸发生错义突变(由苏氨酸变为异亮氨酸)会改变TLR4受体蛋白的结构，导致促炎症因子和可溶性粘附分子表达降低，从而抑制动脉硬化作用。有关1196C＞T单核甘酸多态性(SNP)与CAD易感性的关系，国内外已有相关研究探讨，但尚无定论。王珺楠等[18]的研究认为，TLR4 1196C＞T突变型基因较野生型基因冠心病发生率明显下降，对冠心病的发病具有保护作用。同时，也有相关研究[13-14，16]认为TLR4 1196C＞T SNP与CAD发生无关联。为此，我们进行了本次Meta分析。

本文共纳入7篇病例-对照研究进行Meta分析，探讨TLR4(1196C/T)基因多态性与CAD发病风险的相关性。研究结果表明在以上5种遗传模型中，TLR4 1196C＞T基因多态性与冠心病易感性的相关性差异无统计学意义。Begg漏斗图和Egger检验表明在各个遗传模型中均无发表偏倚，因此结果较为可靠。敏感性分析表明，各个研究存在一定的异质性，该异质性的来源可能是种族、性别、年龄的不同导致的。受纳入文献数量的限制，本文未进行亚组分析；同时，由于各文献于缺乏基因-基因、基因-环境相互作用的数据使得无法评估其交互作用的影响；纳入文献均为已发表的文献，缺乏灰色文献等，以上原因使得结果存在一定的局限性。目前有关TLR4基因多态性与冠心病关系研究较少，其基因位点的突变频率在各个种族不同，产生的结果也可能不同。开展TLR4基因多态性与CAD关系的研究可以为临床治疗提供新的药物作用靶点和方向。

总之，本研究结果表明TLR4(1196C/T)基因多态性与CAD的风险无关。基于本研究的局限性，需要更多高质量、大样本的病例对照研究进一步证实，并适时在本Meta分析的基础上更新，以期进一步研究TLR4 1196C＞T SNP与CAD风险关系。

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Association between the 1196(C/T)polymorphism of TLR4 and susceptibility of coronary artery disease:a meta-analysis.

HUANG Cui-yuan,ZHANG Hong,BAI Rui-dan.Department of Pharmacy,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the association between TLR4 1196(C/T)gene polymorphism and susceptibility of coronary artery disease(CAD).MethodsThe case-control studies of TLR4 1196 C＞T gene polymorphism and susceptibility of coronary artery disease were searched in CNKI,Wanfang database,VIP,Pubmed,Web of Science, Science direct and Wiley online library,which were published up to September 17,2016.According to the inclusion and exclusion criteria,literature selection and data extraction were performed independently by two reviewers.RevMan5.0 and Stata11.0 software were used for statistical analysis of the literatures.ResultsA total of 7 studies involving 7 891 patients and 4 018 controls were analyzed in the study.The results of meta-analysis showed that TLR4 1196C＞T gene polymorphism and CAD risk had no statistically significant correlation(allele model T/C:OR=1.02,95%CI(0.77-1.34, P=0.91);dominant model CT+TT/CC:OR=1.01,95%CI(0.76-1.35,P=0.92);recessive model CC+CT/TT:OR=1.03, 95%CI(0.61-1.75),P=0.91;co-dominant model CT/CC:OR=1.02,95%CI(0.76-1.36,P=0.91);co-dominant model of CC/TT:OR=1.05,95%CI(0.62-1.77),P=0.87).There was no publication bias in each gene model.ConclusionThere is no significant correlation between TLR4 1196C＞T gene polymorphism and CAD susceptibility.Due to the limited number of documents included in the literature,the above conclusions still need to carry out more research to be verified.

TLR4;Gene polymorphism;Coronary artery disease(CAD);Meta-analysis

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.15.048

R541.4

A

1003—6350（2017）15—2550—05

2017-03-01)

张洪。E-mail：cuiandli92@163.com