花旗马铃薯品种茎尖脱毒与快繁技术

王 芳，黄 坚，严成其,，庞万幅，程 晔，金黎平(.宁波市农业科学研究院，浙江 宁波 5040； .中国农业科学院 蔬菜花卉研究所，北京 008；.浙江省植物有害生物防控省部共建国家重点实验室培育基地，浙江 杭州 00)

花旗马铃薯品种茎尖脱毒与快繁技术

王 芳1，黄 坚1，严成其1,3，庞万幅2，程 晔3，金黎平2
(1.宁波市农业科学研究院，浙江 宁波 315040； 2.中国农业科学院 蔬菜花卉研究所，北京 10081；3.浙江省植物有害生物防控省部共建国家重点实验室培育基地，浙江 杭州 310021)

取带1～2个叶原基大小为0.2～0.4 mm的茎尖，在MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1培养基中培养50 d，成苗率50%。试管苗经指示植物检测出试管苗脱毒率为59%，脱毒苗茎段快繁的最佳配方为MS+6- BA 0.20 mg·L-1+NAA 0.20 mg·L-1。双层基质栽培脱毒试管苗生长快、长势好，微型薯产量高、成本低。

花旗马铃薯品种； 茎尖脱毒； 组织培养； 快繁技术

在侵染马铃薯的18种病毒中，有9种是专门寄生于马铃薯上的病毒，其中国内发现的有类病毒PSTV，以及PVX、PVY、PVS、PVM、PVMA、PVA、PLRV7种病毒[1]。这些病毒一旦侵入马铃薯块茎和植株，就表现为束顶、花叶、卷叶几种类型，植株表现为矮小、顶部叶片变色、卷缩，叶片失绿、叶片卷曲坏死、块茎表现为龟裂、变尖、变小、内部网状坏死等各种各样的退化类型，严重者失去发芽能力，不能作种，一般减产30%左右，严重者减产80%以上[2]，病情逐年加重，最后失去种用价值。

利用茎尖脱毒快繁是目前解决马铃薯种薯退化最直接有效的方法。按照规范、严格的技术流程，并通过茎尖脱毒快繁获得无毒微型薯进行良种繁育，不断地为生产提供优质种薯，可长期保持马铃薯优良品种的增产潜力[3]。

1 材料与方法

1.1材料

花旗马铃薯品种是地方特色优质高效品种，采于宁波市海曙区梅树孔村。

1.2方法

1.2.1 材料采集与消毒

选取健康无病斑的花旗马铃薯洗净后用30 mg·kg-1GA3浸种30 min，埋在消毒过的泥炭中，放入25 ℃培养箱中暗培养催芽，露芽后30 ℃热处理7 d。剪取生长旺盛的茎尖5 cm，切去叶片，用75%的乙醇浸泡20～30 s后，用无菌水冲洗1遍，然后用0.1%的升汞消毒6 min，最后用无菌水冲洗4次备用[4]。

1.2.2 茎尖剥离与培养

在双目解剖镜下，将消毒后的茎尖置于载玻片上，用解剖针轻轻剥去叶片，并用解剖刀切去，仅留1～2个叶原基的茎尖，大小为0.2～0.3 mm。将留下的茎尖接种在含有不同浓度NAA和6- BA的MS培养基中。培养条件为温度(28±2)℃，湿度50%，光照强度2 000～3 000 lx，光照时间12～16 h·d-1。

1.2.3 试管苗脱毒鉴定

用指示作物千日红进行试管苗脱毒鉴定。

1.2.4 脱毒苗快速繁殖

以MS为基本培养基，附加不同浓度的NAA和6- BA，置于温度25 ℃、光照强度2 000 lx和光照时间12 h·d-1的环境中培养，30 d后统计植株高度、叶片数、根数等生长情况。

1.2.5 脱毒苗大田种植试验

脱毒苗的移植采用4个配方，蛭石、蛭石+泥炭(1∶1)、蛭石+河沙(1∶1)、双层基质即底层铺20 cm厚的营养土，上层铺蛭石5 cm，脱毒苗移植后用塑料薄膜覆盖，夏天高温还需加黑膜，保持湿度90%以上，温度在30 ℃左右，pH 6.5左右，基质就有良好的通气性。

2 结果与分析

2.1不同培养基对茎尖成苗率的影响

设13组含有不同浓度激素的MS培养基，每组培养基接20个茎尖，50 d后观察结果。表1表明，MS培养基中添加不同浓度的激素均可诱导茎尖成苗，对花旗马铃薯茎尖再生成苗率最好培养基配方是MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1，成苗率达到50%。

2.2指示植物病毒检测结果

以千日红对试管苗用嫁接法进行病毒检测，脱毒率达到59%。对已脱毒苗进行快速繁殖，对未脱毒的苗进行淘汰[5]。

2.3不同培养基对脱毒苗快速繁殖的影响

表2表明，NAA能促进脱毒苗的生根，但随着6- BA浓度的升高，NAA的生根作用被抑制。6- BA浓度高于0.50 mg·L-1时，茎段出现愈伤组织化，且苗生长缓慢，颜色变浅。由此可见，低浓度的NAA与低浓度的6- BA结合最适合组培苗的快速繁殖[6]。

表1 茎尖分生组织在不同培养基中成苗情况

表2 不同培养基对花旗马铃薯品种脱毒苗快速繁殖的影响

2.4脱毒苗的大田种植

将花旗马铃薯脱毒苗种在4个基质配方中，7 d后打开薄膜(表3)生长在蛭石配方中其成活率可达95%，脱毒苗移栽成活率最高的是生长在底层铺一层20 cm厚的营养土，上层铺蛭石5 cm双层基质中其成活率可达到96%，在蛭石+泥炭配方中为85%，成活率最低的是生长在蛭石+河沙 配方中70%；生长50 d后统计每株微型薯数结果为，生长在蛭石配方中，每株平均微型薯数为3.1粒，接微型薯最好的是在底层铺20 cm厚的营养土，上层铺蛭石5 cm双层基质，其每株平均微型薯数3.5粒，在蛭石+泥炭配方中每株平均微型薯数为2.0粒，每株微型薯最低的是生长在蛭石+河沙配方中，每株平均微型薯数1.5粒。

表3 花旗马铃薯脱毒苗对微型薯生产的影响

3 小结与讨论

马铃薯茎尖分生组织可以获得脱毒苗，为马铃薯病毒病的防治展示了广阔的前景[7- 8]。但不同激素浓度的培养基对茎尖出苗率有很大的影响。6- BA是影响花旗马铃薯成苗的一个重要因子。NAA是影响甘薯茎尖成苗的一个次要因子，其浓度在0.1～0.2 mg·L-1最为合适。在马铃薯茎段快速繁殖过程中，低浓度的6- BA和NAA结合能促进腋芽的萌发，高浓度的6- BA使植株愈伤化严重，且NAA对植株的生根作用也会随着6- BA浓度的升高而受到抑制。脱毒马铃薯原原种生产中，试管苗栽培基质的选用比较重要。生产上一般采用蛭石、珍珠岩、粗砂等作基质，也可用棉籽皮、锯末、灰渣、森林土等，但必须进行高温消毒。使用单一基质生产脱毒种薯存在营养供给不足的现象，双层基质栽培试管苗生长快、长势好，原原种产量高，成本低，比单一基质栽培具有明显的优势。

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[3] 王芳. 无土基质栽培生产脱毒马铃薯微型薯的关键技术[J].作物杂志，2008(5)：95- 99.

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[5] 梁秀芝. 脱毒马铃薯微型薯工厂化生产的关键技术[J]. 内蒙古农业科技，2001(1)：22- 23.

[6] 裘尧军，王芳，林波，等.甘薯甬紫薯1 号的特性及栽培技术[J].浙江农业科学，2014(1)：20- 21.

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(责任编辑：张瑞麟)

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浙江省重大攻关项目(2012C12901- 2)；宁波市重大科技项目(2015C110013),浙江省农业新品种选育重大科技专项(2016C02050- 7- 6)

王 芳(1981—)，女，浙江宁波人，农艺师，主要从事良种选育推广工作。

文献著录格式：王芳，黄坚，严成其，等. 花旗马铃薯品种茎尖脱毒与快繁技术[J].浙江农业科学，2017，58(9)：1577- 1578，1583.

10.16178/j.issn.0528- 9017.20170924