TRPC1在儿童肝母细胞瘤中的表达与临床病理特征及预后的关系

黄召， 李勇， 刘登辉， 肖雅玲

临床研究

TRPC1在儿童肝母细胞瘤中的表达与临床病理特征及预后的关系

黄召， 李勇， 刘登辉， 肖雅玲

目的检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达，分析其与临床病理特征及预后的关系。方法收集湖南省儿童医院普外科自2008年1月至2015年12月行肝脏肿块切除的16例肝母细胞瘤患儿的病理资料和临床资料，采用免疫组织化学法检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达情况，并分析其与临床病理特征(肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤的大小)的关系，随访3～5年分析其与预后的关系。结果TRPC1在16例肝母细胞瘤患儿癌组织中表达程度不同，高表达占62.5%(10/16)，低表达占37.5%(6/16)。TRPC1高表达与肝母细胞瘤临床病理特征中的肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤大小比较差异有统计学意义(P<0.05)；患儿3年生存率为72.73%(8/11)，5年生存率为50%(3/6)。TRPC1表达与3年、5年生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TRPC1表达可能与儿童肝母细胞瘤的发生、发展有关，但不一定与预后有关。

肝母细胞瘤； TRPC1； 免疫组织化学； 临床病理特征； 预后； 儿童

肝母细胞瘤是儿童最常见的肝脏恶性肿瘤，约占15岁以下儿童恶性肿瘤的l%和肝脏原发恶性肿瘤的79%；肝母细胞瘤总的发病率是(0.5～1.5)/1 000 000，男孩多见，男女比例为1.2～3.6∶1[1]。现在针对肝母细胞瘤的治疗方案是根据PRETEXT分期系统对肿瘤进行分期，联合手术、化疗(辅助和新辅助)和肝移植、放射治疗、免疫、生物治疗等综合治疗[2-4]。

TRPC1是一种广泛分布于细胞膜及细胞质中的非选择性Ca2+通道蛋白，于1995年由Wes等[5]首次确认其位于人染色体3q11，并与当时已知的其他TRP家族基因有至少38%以上的同源性。TRPC1基因编码的TRPC1蛋白主要表达在胎儿的大脑、肝脏和肾脏，成人的心脏、肌肉、大脑睾丸及卵巢。TRPC1通道单独或与其他离子通道共同参与的细胞内Ca2+的变化与机体多种生理功能密切相关，如神经信号的传递、肌肉的发育、心肌自律性、细胞分化信号的调控等。TRPC1的异常表达可能与相关疾病的发生有关。

TRPC1与儿童肝母细胞瘤的关系目前未见相关研究及报道，本研究的目的主要是通过免疫组织化学实验方法来检测TRPC1分子在16例儿童肝母细胞瘤患者病理标本的癌组织中的表达，并进一步分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系，对TRPC1在儿童肝母细胞瘤的发生、发展及预后过程中可能的作用进行了初步探讨和分析。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2008年1月至2015年12月湖南省儿童医院行肝叶切除术的肝母细胞瘤患儿16例，其中男9例，女7例；年龄1～7岁，平均(4.0±0.3)岁。所有病理诊断均为肝母细胞瘤，同时收集了肿瘤组织及肿瘤组织边缘2 cm的正常组织，以及所选病例的相关病理资料和临床资料，并进行随访3～5年。

1.2 主要试剂 TRPC1抗体采用兔抗人多克隆抗体(Santa Cruz CA，Cat.No.sc-50414)，对应二抗采用免疫组织化学SP法二抗试剂盒(Gene Tech，Real EnvisionTMDetection Kit,Rabbit/Mouse. Code No.GK500705)。

1.3 实验方法 免疫组织化学检测：石蜡块标本连续切片，采用免疫组织化学SP法。一抗浓度为1∶100。以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 TRPC1分子主要表达是在肝细胞膜及胞浆，阳性染色为出现黄色、棕黄色、棕褐色着色颗粒，阳性细胞数≥10%判为TRPC1为高表达，<10%为低表达。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理，计数资料采用Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TRPC1表达与组织病理学特征的关系 见表1。

表1 TRPC1表达与组织病理学特征的关系[n(%)]

注：与肿瘤旁组织比较，aP=0.029；与肿瘤直径≥5 cm比较，bP=0.036。

表1可见，TRPC1在肝母细胞瘤组织的高表达显著多于肿瘤旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)；TRPC1在直径≥5 cm肝母细胞瘤组织中的高表达显著高于直径<5 cm肿瘤组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 TRPC1表达与预后的关系 见表2。

表2 TRPC1表达与3年、5年生存率的关系[n(%)]

本研究16例患儿完成3年随访的有11例，其中死亡3例，生存率为72.73%(8/11)。完成5年随访的仅6例，生存率为50.0%(3/6)。TRPC1表达与3年、5年生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

儿童肝母细胞瘤从胚胎期至发病一般需2年时间，故发病通常在1～3岁，90%血清甲胎蛋白水平明显增高，10%～20%病例转移至肺、肝门、脑和骨[6]。由于其具体发病机制尚未阐明，目前的治疗效果并不理想。欧洲小儿肝脏肿瘤研究者(SIOPEL)报导手术切除率80%，3年生存率85%，5年生存率70%，无瘤生存率67%[7]。国内由于就诊晚，治疗不规范，手术完整切除率低，3年生存率低于50%[8]。

一般认为，肝母细胞瘤的发生，发展，转移是一个涉及多个因素，多个环节的复杂的生物学过程。随着分子生物学的发展，有关生物学治疗的研究成为了肝母细胞瘤诊治的热点及新的突破口。人们试图通过研究细胞的生物学行为，在分子水平解释其发生、发展、转移的分子生物学活动机制，以参与肿瘤发生、发展、转移过程的关键分子作为靶点，通过靶向药物或其他手段特异性地将其杀伤，从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的[9]。

瞬时受体电位(transient receptor potential，TRP)通道是位于细胞膜上的一类重要的非电压依赖性阳离子通道，被激活时允许包括钙离子在内的阳离子进行跨膜运输[10]。TRP在多种哺乳动物组织中广泛表达，主要有TRPA、TRPC、TRPV、TRPM、TRPP、TRPN、TRPML 7个亚族[11]。TRP基因编码的蛋白是一种能通透Ca2+的阳离子通道，参与机体多种生理功能，如钙的平衡、痛温觉的感知等，在维持机体生理功能中发挥着重要作用。TRPC1是TRPC亚族的一种，是一种非选择性的Ca2+通道，属于储存控制型通道[12]。Ca2+在信号转到过程中作为第二信使发挥着广泛作用，尤其在细胞体积、肌肉收缩、细胞周期调控及细胞凋亡、神经传递、酶和激素分泌等多种生理活动中发挥重要作用。细胞增殖的各个阶段都有钙离子的参与[13]。

TRPC1通道激活开放后，对钙的进出细胞过程产生影响，可能导致感受器细胞内Ca2+浓度升高和细胞膜的去极化，促使动作电位的发生及信号转导，从而达到调控细胞生理功能的作用。TRPC1通道蛋白的异常表达，可能会影响机体的正常生理过程，导致疾病的发生。

TRPC1在肿瘤中的研究已取得不少进展，但与儿童肝母细胞瘤的关系目前未见相关研究及报道。本研究结果显示，TRPC1在肝母细胞瘤肿瘤组织及非肿瘤组织中，以及在直径<5 cm和直径≥5 cm的肿瘤组织中，表达程度均有显著差异。因此我们推测，TRPC1的表达差异可能与儿童肝母细胞瘤的发生和发展有关。其具体机制可能是TRPC1作为非选择性Ca2+通道，通过调节作为第二信使的Ca2+进出细胞，影响细胞体积变化以及增殖分化的信号转导。TRPC1的异常表达可能使得正常肝细胞的生理活动改变，在其增殖、分化过程中变异，导致肿瘤的发生、发展。

在有关预后的研究中，TRPC1表达与患儿术后生存率没有显著差异。我们不能认为TRPC1表达程度影响了肝母细胞瘤的预后，但并不能断定TRPC1与其无关。因为样本数量较小、随访不满意，而且研究方法简单，并不能完全说明问题，需进一步研究以确定其相关性。

综上所述，TRPC1表达可能与儿童肝母细胞瘤的发生、发展有关，但其与预后的关系有待进一步研究。

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RelationshipoftheexpressionofTRPC1withclinicopathologicalparameterandprognosisofhepatoblastomainchildren

HUANGZhao，LIYong，LIUDenghui，XIAOYaling.

HunanChildren'sHospital,Changsha410007,China

ObjectiveTo defect the expression of TRPC1 in the tissues of hepatoblastoma and to analyze its relationship with clinicopathological features and prognosis.MethodsThe pathological data and clinical data of 16 children with hepatoblastoma(HB) were collected, who underwent hepatectorny in Hunan Children's Hospital from Jan. 2008 to Dec. 2015. The expression of transient receptor potential channel-related protein 1(TRPC1) in HB tissues was detected by immunohistochemistry, its relationship with clinicopathological features(neoplastic tissues and non-neoplastic tissues, the sizes of neoplasm) was analyzed, and its relationship with prognosis was analyzed in the 3 to 5 years of follow-up.ResultsThe expression of TRPC1 in the 16 HB children was different, with high expression accounting for 62.5%(10/16) and low expression 37.5%(6/16).The high expression of TRPC1 had statistical difference in the neoplastic and non-neoplastic tissues and in the sizes of neoplasms(P<0.05).The 3-year survival rate was 72.73%(8/11),and the 5-year was 50%(3/6).There was no statistical significance in TRPC1 expression comparing 3-year with 5-year survival rate(P>0.05).ConclusionThe expression of TRPC1 may be related to the development and progression of HB in children, but it may be irrelevant to prognosis.

Hepatocastoma; TRPC1; Immunohistochemistry; Clinicopathological festures; Prognosis; Child

410007 长沙，湖南省儿童医院普外二科

黄召(1986-)，男，医学硕士，医师。研究方向：小儿胃肠、肝胆、肿瘤疾病的诊治

肖雅玲，E-mail：etyypwk@sina.com

10.3969/j.issn.1674-3865.2017.06.011

R725.7

A

1674-3865(2017)06-0495-03

2017-09-19)

吴迪)