复方牛磺酸滴眼液对小鼠肠系膜微循环的影响及大鼠抗眼过敏试验研究

刘锡军，才 凤，肖春莹

（1.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032； 2.辽宁省食品检验检测院，辽宁 沈阳 110015）

视疲劳是临床常见病、多发病，发病率逐年升高。祖国医学称视疲劳为“肝劳”，认为是肝肾精亏、肝血不足，目失濡养所致。相关资料表明，应用中医药治疗视疲劳具有良好的前景。牛磺酸是一种特殊的氨基酸，是人体必不可少的一种营养元素[1]。眼药中大都含有牛磺酸，可强化角膜的自我修复能力，对抗眼疾[2－3]。牛磺酸是由中药中提取的一种有效成分，在内科中作为解热、抗炎和强肝利胆药，不良反应极少[4－5]。复方牛磺酸滴眼剂是由牛磺酸、盐酸萘甲唑啉、维生素B6、马来酸氯苯那敏组方，具有无色、无味、无毒副作用等特点，原料容易获得，且外源性的牛磺酸能顺利地通过晶体细胞膜，无需载体，且不消耗能量，对于维持眼的代谢功能十分重要，临床主要用于防治近视和眼疲劳。本研究中分别观察了该滴眼液与萘扑维滴眼液对小鼠肠系膜微循环的影响和大鼠抗眼过敏作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

药物：复方牛磺酸滴眼液（辽宁省药物研究院自制，规格为每支10 mL），主方为牛磺酸、盐酸萘甲唑啉、维生素B6、马来酸氯苯那敏，含量分别为2%，1%，0.5%（以牛磺酸含量计）；空白溶剂为透明质酸钠和氯化钠；萘扑维滴眼液（山东正大福瑞达制药有限公司，规格为每支10 mL），主方为盐酸萘甲唑啉、马来酸氯苯那敏、维生素B12，含量为0.02%（以盐酸萘甲唑啉计）。

试剂：肾上腺素（上海禾丰制药有限公司，批号为20030702）；卵清蛋白（美国 Sigmag公司，批号为041008）；乌拉坦（上海山浦化工有限公司，批号为030315）；硫酸铝钾（国药试剂集团）；DL－二硫基苏糖醇（美国Sigmag公司，批号为020606）；偶氮蓝（国药集团化学试剂有限公司，批号为20030531）；无水硫酸钠（北京化工厂，批号为000701）；丙酮（北京北化精细化学有限责任公司，批号为051016）。以上试剂均为分析纯。

动物：昆明种小鼠，体质量18～22 g，60只，雌雄各半，合格证号为 SCXK（辽）2003 －008。Wistar大鼠，体质量180～220 g，30只，雌雄各半，合格证号为SCXK（辽）2003－012。所有动物均由沈阳药科大学动物室提供，自由采食和摄水。均严格符合眼科与视觉研究中使用动物的科学声明。所有手术均在全身麻醉情况下进行，肌内注射1.25 g/kg乌拉坦，尽量减少其痛苦。

仪器：显微镜（重庆光电仪器有限公司）；BJ－2000型微循环（四川成都泰盟科技有限公司）；UV－1601型紫外分光光度仪（Shimadzu公司）；离心机（金坛市荣华仪器制造有限公司）；电子秒表（深圳市泛华亚精密工具仪器公司）。

1.2 方法

1.2.1 对小鼠肠系膜微循环的影响[6－8]

分组：将雌雄各半小鼠随机分为5组，空白对照组、萘扑维组、大剂量组（复方牛磺酸滴眼液2%）、中剂量组（复方牛磺酸滴眼液1%）、小剂量组（复方牛磺酸滴眼液 0.5% ），每组12只。

造模：取小鼠腹腔注射乌拉坦1.25 g/kg麻醉，开腹，轻取小肠一段放微循环观察架上，显微镜下（40×）观察。将血管粗细、血流速度相近的肠系膜毛细血管置显微镜视野中央，滴肾上腺素 0.03 mL（0.015 mg），待毛细血管血流停止后，立即局部滴药0.1 mL，记录滴药后至毛细血管中血液开始流动的时间为循环恢复时间。分别测定各组对循环恢复时间的影响，滴药体积均为0.1 mL。

1.2.2 抗眼过敏作用[9－12]

分组：将雌雄各半Wistar大鼠随机分为5组，空白对照组、萘扑维组、大剂量组、中剂量组、小剂量组，每组6只。

造模：各组大鼠均腹腔注射卵清蛋白磷酸盐缓冲液1 mL（含卵清蛋白 100 g，硫酸铝钾 20 mg）免疫。14 d后，各眼滴1 mol/LDL－二硫基苏糖醇溶液20 μL，以消除结膜黏液屏障，提高攻击效果。15 min后，鼠尾静脉注射偶氮蓝（每100 g体质量1.25 mg）溶液1 mL，并立即用微量加样器，取10%卵清蛋白磷酸盐缓冲液10 μL滴眼攻击。于攻击前3 h开始给药，30 min 1次，每次滴0.05 mL，共滴眼 4 次。攻击后 30 min，放血，处死大鼠，剜出眼睑、结膜和眼球，去除脂肪，置入5 mL硫酸钠－丙酮浸液中振荡，24 h后离心，吸取上清液，采用分光光度计在620 nm波长处比色，即得光密度值（OD）。

1.3 统计学处理[13]

数据均以均数±标准差（）表示，行t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对小鼠肠系膜微循环的影响

结果见表1。可见，空白对照组循环恢复时间为3.53 min，各给药组循环恢复时间缩短至1.18～2.03 min，与空白对照组比较均有显著性差异（P＜0.01），大剂量组作用明显强于萘扑维组（P＜0.05），表明该药局部应用可显著改善局部微循环。

表1 各组小鼠肠系膜微循环比较（n=12）

2.2 对大鼠偶氮蓝渗出量的影响

结果见表2。可见，各给药组对偶氮蓝渗出量抑制率为24.3% ～59.1%，与空白对照组比较均有显著性差异（P＜0.05），且大剂量组作用明显强于萘扑维组（P＜0.01）。结果表明，复方牛磺酸滴眼液高、中、低剂量均能明显抑制偶氮蓝的渗出量，具有明显的抗眼过敏作用。

表2 各组大鼠偶氮蓝渗出量比较（±s，n=6）

表2 各组大鼠偶氮蓝渗出量比较（±s，n=6）

注：与空白对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

组别OD 抑制率（%）0.419 ±0.072 0.188 ±0.050**0.172 ±0.045**0.225 ±0.046**0.317 ±0.124*空白对照组萘扑维组大剂量组中剂量组小剂量组55.3 59.1 46.6 24.3

3 讨论

根据模型的发展，证候动物分为生化模型、病理模型、病理生理模型，模型的成功与否多是通过动物机体的生物化学、细胞酶学、激素水平、神经因子、基因组学、蛋白组学等相关指标的测定结果来判断，有时所测指标并不能解释或不能完全解释中医证候的变化。因此，建立或有效反映生物表征的动物模型，使中医临床研究和病理学研究紧密结合起来，可促进中医症－证研究的快速发展。

牛磺酸是一种特殊的氨基酸，为含硫氨基酸，也存在于动物体内，具有多种药理学活性，具有自由基清除剂作用，在维持正常眼功能方面发挥着重要作用，牛磺酸缺乏可使视网膜产生病理改变，甚至导致失明。

本研究结果显示，复方牛磺酸滴眼液可明显改善小鼠肠系膜微循环作用，对大鼠具有明显的抗眼过敏作用，且与萘扑维滴眼液的作用较接近，表明复方牛磺酸滴眼液具有改善局部微循环和抗眼过敏作用。