益母草不同炮制品质量研究

翁志平 梁锦杰

广东省新兴中药学校，广东 云浮 527400

益母草为唇形科植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)新鲜或干燥地上部分，其味苦、辛，性微寒；归肝、心包、膀胱经。具有活血调经，利尿消肿，清热解毒之功效。用于月经不调，痛经经闭，恶露不尽，水肿尿少，疮疡肿毒等症[1]，为妇产科要药，故有“益母”之称。益母草分布在全国大部分地区，包括湖北、山东、安徽、江苏、广东、河北、河北等[2]，主要含有生物碱类、黄酮类、二萜类、挥发油类等化学成分[3]，其中《中国药典》含量测定成分为盐酸水苏碱、盐酸益母草碱。

益母草的炮制方法繁多。唐代的《新修本草》，有关于益母草的炮制记载，方法为“捣汁”，是益母草最早的炮制记载。宋代有烧炭炮制法，见于《太平圣惠方》[4]。明代陈嘉谟在《本草蒙荃》中记载“细剉醋炒，马啮堪敷”[5]。清代屠道和在《本草汇纂》中载有“微炒”[6]。清代鲍相璈在《验方新编》中有“烧灰存性”的记载[7]。清代严西亭的《得配本草》中载有“蜜水炒”“酒拌蒸”[8]。

到了近现代关于益母草炮制的方法有“炒制”、“醋制”、“酒制”、“蜜制”、“姜酒共蒸制”、“炒炭”以及广东地区特有的“四制法”(即酒、醋、盐、姜四种辅料)等。1963年9月广东省药品检验所邀请全省名老药工举办了广东省药材加工炮制经验交流会，并编著了《广东药材炮制手册》一书，是四制益母草最早的文字记载。广东省新兴县中药炮制历史悠久，曾有“中药炮制之乡”的美誉，在长期的实践过程中形成独特的炮制的方法，为了挖掘、保护、传承新兴县传统中药炮制技术，本文结合新兴县中药炮制特色，对益母草干品、酒蒸品、醋蒸品及四制品进行定性定量的分析比较，为制定四制益母草质量标准提供科学依据，为传承新兴县中药炮制提供理论基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT/JY-001高效液相色谱仪(岛津企业管理(中国)有限公司)；DHG-9140A/JY-026电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；KQ5200VD型/JY-007数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FA2004/JY-003电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；NewclassicMFMS105DU/JY-024分析天平(岛津企业管理(中国)有限公司)；FW315/JY-022中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；SX-4-10/JY-027箱式电阻炉(北京市永光明医疗仪器有限公司)。

1.2 试药 益母草(湖北)，盐酸水苏碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110712-201513)，盐酸益母草碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111823-201303)，丙酮(上海专业试剂厂，批号：20180323)，盐酸(上海专业试剂厂，批号：20170605-1)，乙腈(上海星可高醇溶剂有限公司，批号：0113181201)，辛烷磺酸钠(天津市大茂化学试剂厂，批号：20180401)，磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：167217)，冰醋酸(西陇科学股份有限公司，批号：160820-1)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品制备 干品：益母草取原药材除去杂质及老茎，水洗净润软，切长段，晒干。

醋益母草：每10 kg益母草，用醋2 kg。取醋加入净益母草段中，拌匀，润至吸干，置蒸具内。于开水锅内蒸透气后1 h，取出，晒干。详细炮制工艺以新兴县药工为准。

酒益母草：每10 kg益母草，用黄酒2 kg。取黄酒加入净益母草段中，拌匀，润至黄酒被吸干，置蒸具内。于开水锅内蒸透气后1 h，取出，晒干。详细炮制工艺以新兴县药工为准。

四制益母草：每10 kg益母草，用酒、醋、生姜汁各0.6 kg，盐0.2 kg。取酒、醋、姜汁、盐水的混合液，加入净益母草中，拌匀，闷润至辅料被吸干，置蒸具内，于开水锅内蒸1 h，取出晒干。详细炮制工艺以新兴县药工为准。

2.2 水分的测定 参照《中国药典(2015年版)》四部通则0832项下的烘干法，对益母草不同炮制品进行水分测定，药材含水量不得过13.0%(结果见表1)。

2.3 总灰分的测定 参照《中国药典(2015年版)》四部通则2302项下的灰分测定法，对益母草不同炮制品进行总灰分测定，总灰分含量不得过11.0%(结果见表1)。

2.4 浸出物的测定 参照《中国药典(2015年版)》四部通则2201项下水溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，对益母草不同炮制品进行浸出物含量测定，浸出物含量不得少于15.0%(结果见表1)。

2.6 含量测定

2.6.1 盐酸水苏碱含量测定

2.6.1.1 色谱条件 Polar-Propylamide(250 mm×4.6 mm)；以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80∶20)为流动相；柱温25 ℃；流速：1.0 mL/min。理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于6000。如图1所示。

2.5 二氧化硫的测定 参照《中国药典(2015年版)》四部通则2331项下的二氧化硫残留量测定法(第一法酸碱滴定法)，对益母草不同炮制品进行二氧化硫的检测，二氧化硫含量不得过150 mg/kg(结果见表1)。

表1 益母草不同炮制品水分、总灰分、二氧化硫、浸出物含量测定结果 (n=5)

2.6.1.2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.6.1.3 对照品溶液的制备” 取盐酸水苏碱对照品约10 mg，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.6.1.4 精密度实验 取2.6.1.3项下盐酸水苏碱对照品溶液，按2.6.1.1项下色谱条件，平行测定6次，结果RSD为1.02%，表明测定方法精密度良好。

2.6.1.5 重复性实验 取干益母草5份，按“2.6.1.2项下供试品溶液的制备”制备样品，按2.6.1.1项下色谱条件测定，结果RSD为1.46%。实验表明样品的重复性良好。

2.6.1.6稳定性实验 取干益母草1份，按“2.6.1.2项下供试品溶液的制备”制备样品，放置0，2，4，6，8，12，24 h，按2.6.1.1项下色谱条件测定，结果RSD为1.54%。实验表明样品溶液室温放置24 h内质量稳定。

2.6.1.7加样回收率实验 在已知含量的干益母草,中加入3.0 mg盐酸水苏碱对照品，按“2.6.1.2项下供试品溶液的制备”制备样品，按2.6.1.1项下色谱条件测定，结果平均回收率为99.08%，RSD为1.99%。

2.6.1.8样品测定 分别精密吸取对照品溶液5 μL、10 μL，供试品溶液10～20 μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。本品按干燥品计算，含盐酸水苏碱不得少于0.50%。(结果见表2)。

2.6.2盐酸益母草碱含量测定

2.6.2.1色谱条件 UltimateXB-C18(150 mm×4.6 mm)；以乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24∶76)为流动相；柱温25 ℃；检测波长为277 nm；进样量：10 μL，流速：1.0 mL/min。理论板数按盐酸益母草碱峰计算应不低于6000。见图2。

2.6.2.2 供试品溶液的制备 同2.6.1.2项下制备，供试品备用。

2.6.2.3 对照品溶液的制备 取盐酸益母草碱对照品约7.5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取母液1 mL，至10 mL容量瓶，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL约含30 μg的溶液，即得。

2.6.2.4 精密度实验 取2.6.2.3项下盐酸益母草碱对照品溶液，按2.6.2.1项下色谱条件，平行测定6次，结果RSD为1.28%，表明测定方法精密度良好。

2.6.2.5 重复性实验 取干益母草5份，按“2.6.2.2项下供试品溶液的制备”制备样品，按2.6.2.1项下色谱条件测定，结果RSD为2.01%。实验表明样品的重复性良好。

2.6.2.6 稳定性实验 取干益母草1份，按“2.6.2.2项下供试品溶液的制备”制备样品，放置0，2，4，6，8，12，24 h，按2.6.2.1项下色谱条件测定，结果RSD为2.34%。实验表明样品溶液室温放置24 h内质量稳定。

2.6.2.7 加样回收率实验 已知含量的干益母草,中加入0.25 mg盐酸益母草碱对照品，按“2.6.2.2项下供试品溶液的制备”制备样品，按2.6.2.1项下色谱条件测定，结果平均回收率为98.90%，RSD为2.26%。

2.6.2.8 样品测定 精密吸取2.6.2.3项下盐酸益母草碱对照品溶液与2.6.2.2项下供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含盐酸益母草碱(C14H21O5N3·HCl)不得少于0.050%。见表2。

表2 益母草不同炮制品含量测定结果 (n=5)

3 讨论

中药炮制是保证中药质量的重要环节，关系到中医临床的疗效，为了继承和发扬中药炮制技术，必须对它进行认真研究。刘霞等[9]归纳总结古代记载益母草多种炮制方法，包括炒制、制炭、酒制、醋制、蜜制和四制益母草等，但国内关于新兴县中药传统炮制工艺的研究报道不多，仅刘光明[10]等人调查了广东省新兴县中药炮制现状。关于新兴县传统炮制成品质量标准研究基本没有，国外文献更未见相关报道，未见关于新兴县传统炮制品益母草的质量研究，本文研究为新兴县中药炮制品制定质量标准和种植推广应用提供理论依据。

益母草在炮制方法方面，主要沿袭了古代的酒制法，现代以醋制、酒蒸法沿用较多，四制益母草乃广东地区独有的一味传统炮制中药。益母草炮制方法差异，其功效亦有所差异，干品具有活血调经，利尿消肿，清热解毒功效；酒蒸善于活血通脉，调经止痛；醋制能增强通利血脉、活血散瘀的作用；四制后可增强祛瘀生新，调经止痛的功效。本实验没有进行益母草不同炮制品药理部分的研究，益母草质量研究还有待完善，期待日后完善益母草炮制品的质量标准。

本实验根据《中国药典(2015版)》标准对5批次干益母草、酒蒸益母草、醋蒸益母草和四制益母草质量进行研究，在水分测定中，四种炮制品水分含量均符合药典要求，含水量不超过13.0%，其中四制益母草水分含量最高；在总灰分含量测定中，四种炮制品总灰分含量在6.8%～7.9%，不超过药典要求的11.0%；在浸出物含量测定中，四种炮制品浸出物含量在16.3%～17.9%，不少于药典要求的15.0%；考虑到二氧化硫残留对人体产生危害，本实验也做了二氧化硫残留量测定，经测定，四制益母草炮品均无检出二氧化硫。在含量测定中，选用盐酸水苏碱和盐酸益母草碱作为评价指标，四种炮制品含量均超过药典规定含量，盐酸水苏碱含量≥0.50%，结果显示干益母草>酒益母草>醋益母草>四制益母草，盐酸益母草碱含量≥0.050%，结果显示干益母草>醋益母草>酒益母草>四制益母草，结果与程轩轩、江海燕[11-12]研究结果有一定的相似性。本实验对不同益母草炮制品进行水分、总灰分、浸出物、二氧化硫和含量测定，下一步将继续完善显微鉴别和薄层鉴别，为益母草炮制品品质评价及应用提供科学依据。