孕妇脊髓性肌萎缩症携带率筛查及产前诊断意义研究

广东省江门市新会区司前人民医院（529159）李妍

脊髓性肌萎缩症（SMA）作为临床中较为常见的运动神经元遗传性疾病，其是婴幼儿阶段中最为常见的疾病，发病率约为1/6000～1/11000，携带率为1/38～1/70[1][2]。本研究以江门区作为观察对象，利用江门市妇幼保健院在江门地区最大孕妇产检量这一独特的优势，分析了先进技术对孕妇SMA筛查率和产前诊断的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究于2017年1月～2018年12月选取江门地区8431名孕妇作为调查对象，采用荧光定量PCR方法对脊髓性肌萎缩症（Spinal muscular atrophy，SMA）携带率进行筛查，并采用第二代高通量测序技术（NGS）结合第三代测序方法，对SMNI第7外显子缺失区域和断裂点进行分析。所有孕妇的年龄范围为23岁～45岁，平均年龄范围（27.35±2.14）岁。经江门市妇幼保健院、司前人民医院伦理委员会批准，并与患者签署知情同意书后进行外周血样采集。

1.2 方法 在展开研究的过程中，首先对DNA进行提取，采用的方法是血液标本采集，样本量为3mL。在血样采集的过程中，采用由上海生工生物技术有限公司提供的全血DNA提取试剂盒（Universal Genomic DNA Extaction Kit Ver.3.0）提取DNA。与此同时，采用分光光度计对提取的DNA浓度进行检测。在研究的过程中，将DNA浓度统一为50μg/μL，并将其放置在温度为4℃的环境下进行保存有备使用。

筛查结束后，建立江门地区孕妇SMA携带者人群库，并利用由美国llumina公司提供的二代测序仪以及由Sequel该公司提供的三代测序平台，对全基因组进行测序和数据分析，以对该地区SMA的携带情况等进行整理和分析。

1.3 观察指标 观察指标为SMA携带率以及SMNI外显因子的缺失情况。

1.4 统计学处理 采用SPSS19.0软件，对携带率等计数资料进行统计，并采用（%）表示。

2 结果

8431名孕妇中，SMA携带者190例，携带率为2.25%。其中，83名孕妇存在SMNI第7外显子缺失，占比为43.68%。51名孕妇存在第8外显子缺失，占比为26.84%。SMNI第7外显子缺失中，纯合缺失携带者26例，占比为31.33%，杂合缺失携带者57例，占比为68.67%。对7对SAM携带者夫妇进行产前诊断，避免2例SAM患儿出生。

3 讨论

现阶段，我国是SMA发病率最高的国家之一，其携带者已高达3000万人。也就是说，目前SMA是一种世界性的常见常染色体隐性遗传神经肌肉疾病之一，其也是影响婴幼儿生存的关键[3]。在孕期对孕妇SMA携带情况进行筛查，属于一级预防，其不仅能够避免SMA患儿的出生，而且还能够提高我国新生儿的人口质量。除此之外，在对SMA患儿展开治疗的过程中，其每年的治疗费用高达75万美元左右，因而采用先进的技术，对孕妇SMA携带率进行筛查，以预防SMA患儿的出生，也是一种经济且有效的SMA防治方法，进而对减轻家庭的经济负担和社会的负担均有较好的价值。本研究依托江门地区作为筛查对象，并结合所拥有的资源，对SMA筛查率进行筛查，以对该地区孕妇SMA携带率情况进行分析，进而为预防该地区SMA患者的出生以及提高该地区人口质量提供参考和依据。

在本研究中，本研究采用荧光定量PCR法对其进行筛查，结果显示，8431名孕妇中，SMA携带者190例，携带率为2.25%。其中，83名孕妇存在SMN1第7外显子缺失，占比为43.68%。51名孕妇存在第8外显子缺失，占比为26.84%。SMN1第7外显子缺失中，纯合缺失携带者26例，占比为31.33%，杂合缺失携带者57例，占比为68.67%。对7对SAM携带者夫妇进行产前诊断，避免2例SAM患儿出生。上述研究结果说明，江门地区SMA携带者占有一定的比重，主要以SMN1第7外显子和第8外显子缺失为主。SMN1基因是SMA致病的主要基因，现阶段全国关于孕妇SMA携带率的筛查已经给予了一定的关注和重视，但现有文献关于SMA携带率筛查及其发病机制的研究还比较少。SMA是一组脊髓前角细胞变性，进而导致以肌萎缩、对称性肌无力作为主要特征的常染色体隐性遗传的神经肌肉病，其主要表现为肌张力低、肌肉萎缩以及腱反射减弱[4]。婴幼儿期中，SMA是常见的致死性常染色体隐性遗传病之一，依据病情严重程度以及发病的年龄可将SMA分为四型，其中约有80%以上的患儿均为I或II型。SMA主要对SMA的神经肌肉表型、相关脊髓前角细胞缺失等进行了描述。SMN1基因是主要致病基因，其主要有9个外显因子。SMN1基因的全长为28072bp，其编码在主要是由294个氨基酸RNA结合蛋白构成。SMN1基因中内含子6和内含子7以及外显子7和外显子8。据相关报道显示，SMN1基因纯合缺失是导致SMA的主要致病因，约有94%的患者呈现出这一基因缺失。这一研究结果与本研究一致[5]。

近年来，SMN1外显子7缺失呈现增长的趋势，其对人们的身体健康和生命安全均产生了严重的威胁，国外研究学者在研究的过程中早就建议在普通人群中筛查SMA，我国是近几年才开始给予关注和重视的。目前，我国采用的筛查技术主要是以多重PCR-DHPLC分析方法虽然具有一定的优势，但也存在一定的不足，如对于少数人群中携带SMN12+0型的患者还无法进行确定，因而这一技术在应用的过程中存在一定的不足。第二代高通量测序技术以及第三代测序技术结合应用于大样本筛查中，其不仅具有高敏感性以及高通量和高自动化的优势，因而比较适合大样本的筛查。与此同时，这一技术在降低筛查成本以及提高筛查速度方面也有较好的价值。第三代测序技术的出现，具有长度长、单分子优势，可以检测基因组区域结构变异、重复区域、区分真假基因，因而采用先进的技术具有更加快捷和准确的优势，对于提高产前诊断的准确性和可靠性更具优势，因而值得推广和应用。

综上所述，PCR、第二代高通量测序以及第三代测序技术（TGS）应用于孕妇SMA筛查和产前诊断中，对于预防SMA患儿出生以及提高江门出生人口质量有重要的价值和意义，应予以重视。现阶段，本研究虽然取得了一定的成果，但关于SMA致病基因SMN1基因缺失，尤其是第7外显子的缺失区域和断裂点的研究还未取得成果。因此，在数据库完善的基础上，未来在研究的过程中还应对SMN1第7外显子的缺失域和断裂点还有待进一步的研究，这也是本研究在现有研究结果基础上的重点研究方向。