霞浦县兽医实验室非洲猪瘟检测能力比对及分析

左璐雅 霞浦县动物疫病预防控制中心 福建霞浦 355100

2019 年以来，福建省动物疫病预防控制中心分批次组织各建设完成病原学PCR实验室的动物疫病预防控制机构实验室进行非洲猪瘟检测能力比对。2019年12月，霞浦县动物疫病预防控制中心申请参加比对试验，专人负责在指定时间领取比对试验盲样，试剂不作统一发放，按照要求在规定时间完成实验室检测过程，出具检测报告。现将霞浦县兽医实验室参加非洲猪瘟检测能力比对试验的情况汇总如下。

1 材料与方法

1.1 试剂 非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒（荧光探针法），唐山怡安生物工程有限公司生产，试剂盒中样本裂解液和样本稀释液储存于2～8℃，其余组分避光条件下储存于-20±5℃。

1.2 方法

1.2.1 样品及预处理 4份血清样品均来自福建省动物疫病预防控制中心提供盲样，放置于室温（18～25℃）平衡备用。用样本稀释液进行5倍稀释后，取5μL直接上样。

1.3 荧光PCR扩增

1.3.1 扩增试剂准备 从试剂盒中取出PCR反应液、阴性对照、阳性对照，待所有组分完全溶解后，振荡混匀5 s，瞬时离心5 s。

1.3.2 配制反应体系 在0.2 mLPCR管中配制反应体系，ASFV-PCR反应液20μL，经预处理的样本（或阴性/阳性对照）5μL，总体积25μL，操作完毕压紧管盖，瞬时离心。

1.3.3 设置反应条件 按表1设置反应条件。

表1 扩增反应条件

1.3.4 荧光通道的选择 选择FAM通道检测ASFV核酸。

1.4 判定

1.4.1 质控标准 阴性对照的FAM检测通道无S型扩增曲线。阳性对照的FAM检测通道有典型S型扩增曲线，且Ct值≦23。阴性对照和阳性对照检测均符合上述结果，则试验有效，否则试验无效。

1.4.2 结果判定 如果样本在FAM检测通道无典型S型扩增曲线且无Ct值，判定为非洲猪瘟病毒核酸检测阴性。如果样本在FAM检测通道有典型S型扩增曲线，且Ct值≦23，判定为非洲猪瘟病毒核酸检测阳性。

2 结果与分析

阳性对照Ct值为19.6，阴性对照无Ct值，判定试验有效。4份检测样品中有1份为阳性，其余3份均为阴性（见表2）。

表2 非洲猪瘟检测能力比对数据统计

参加该次非洲猪瘟检测能力比对，霞浦县兽医实验室的检测能力合格，但在过程中凸显出几点问题值得注意和思考。

一方面是2019年以前尚未建设病原学PCR实验室，兽医实验室主要承担血清学检测，对病原学检测相关知识知之甚少，经验不足。另一方面是进行病原学试验，对生物安全水平的要求非常高，一旦操作不规范很容易造成污染；同时，试验结束后要认真对样品进行无害化处理。实验室人员要举一反三，迅速掌握检测技术要点。