环氧虫啶液相色谱通用分析方法研究

徐成辰，吴 晗，唐慧敏，杨淑娴

(江苏省农产品质量检验测试中心，江苏南京 210036)

环氧虫啶是华东理工大学和上海生农生化制品有限公司联合开发的一种新型新烟碱类杀虫剂。研究表明其作用机制不同于传统的新烟碱类杀虫剂，其对nAChR具有一定的拮抗作用，对大多同翅目害虫，尤其对稻飞虱、蚜虫、粉虱具有优异杀虫活性，同时对鳞翅目、鞘翅目、双翅目害虫也有效[1]。基于其广谱、高效、无交互抗性、低毒、低残留等特点，可以被应用于水稻、蔬菜、果树、小麦、棉花、玉米等作物害虫的防治，特别是对水稻飞虱、甘蓝蚜虫及黄瓜蚜虫具有良好的田间药效[2,3]。

环氧虫啶登记有原药和可湿性粉剂，前者已有相关分析方法的研究报道[1]，后者还没有。为了满足企业生产质控、相关市场监管等需求，本文开发了一种适用于环氧虫啶原药及其可湿性粉剂定量分析的液相色谱通用方法。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

乙腈：色谱纯(德国Merck公司)；水：超纯水；醋酸铵：分析纯(国药集团化学试剂有限公司)；冰醋酸：分析纯(国药集团化学试剂有限公司)；环氧虫啶标样：已知含量≥98.0%(上海生农生化制品有限公司)；环氧虫啶原药(上海生农生化制品有限公司)；25%环氧虫啶可湿性粉剂(上海生农生化制品有限公司)。

1.2 仪器

Agilent 1290高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器及色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；超纯水制备系统(Millipore)；色谱柱：Zorbax SB-C18不锈钢色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)(美国安捷伦科技有限公司)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；过滤器：滤膜孔径0.45 μm (Millipore)。

1.3 色谱操作条件

流动相：乙腈+醋酸铵缓冲液(20 mmol/L，pH= 7.0)=20+80(体积比)；柱温：30 ℃；检测波长：340 nm；流动相流速：1.0 mL/min；进样体积：5 μL；保留时间：环氧虫啶约4.6 min。环氧虫啶原药、可湿性粉剂的高效液相色谱图如图1和图2。

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取0.1 g(精确至0.000 1 g)环氧虫啶标准品于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超声波振荡 5 min使样品溶解，冷却至室温，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。

1.4.2 试样溶液的配制

称取含环氧虫啶0.1 g(精确至0.000 1 g)的试样于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超声波振荡5 min使样品溶解，冷却至室温，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，以0.45μm滤膜过滤。

1.4.3 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的峰面积变化小于1.2%后，再按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样分析。

1.4.4 计算

将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液的峰面积分别进行平均，按下式计算环氧虫啶的质量分数(X)。

式中：A1为标样溶液中环氧虫啶峰面积平均值；A2为试样溶液中环氧虫啶峰面积平均值；m1为环氧虫啶标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中环氧虫啶质量分数。

2 结果分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

通过Agilent1290高效液相色谱仪的二极管阵列检测器进行紫外光谱扫描，得到环氧虫啶的紫外吸收光谱图(图3)，环氧虫啶在340 nm有最大紫外吸收，灵敏度优于报道的325 nm[1]，同时考虑检测波长越大，容易产生吸收的杂峰越少，故选择340 nm作为检测波长。

2.1.2 流动相的选择

试验过程中分别使用甲醇、乙腈、水、缓冲液不同比例混合作为流动相，根据环氧虫啶和杂质峰的出峰时间、分离效果、峰形以及峰纯度进行综合考虑，当使用乙腈+醋酸铵缓冲液(20 mmol/L，pH= 7.0)=20+80(体积比)时，环氧虫啶色谱峰峰形及峰纯度较好，能显著改善峰形拖尾问题，且与杂质能完全分离，保留时间在4.6 min，与报道12.9 min[1]相比分析时间大大缩短，提高了工作效率(图1、图2)。

2.2 特异性试验

本试验采用HPLC-DAD峰纯度分析法来鉴别环氧虫啶。标样、原药和可湿性粉剂中的环氧虫啶HPLC-DAD峰纯度均大于990，有效成分处无其他物质干扰，符合定量分析要求。峰纯度色谱图见图4～图6。

2.3 方法线性关系的测定

按1.4.1节标样溶液的制备方法配制5个不同浓度的有效成分线性相关溶液。在上述操作条件下，待仪器稳定后，按照浓度从低到高的顺序测定每个溶液中环氧虫啶的峰面积，取2次测定的平均结果。以环氧虫啶质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图7)。

从图7可以看出，当环氧虫啶质量浓度在0.079 5 ～0.392 1 mg/mL(进样体积5 µL)，其与相应的环氧虫啶峰面积之间呈现良好的线性关系，计算得回归方程为y=12 018x+3.883 8，相关系数r=1.000 0，完全可以满足定量分析要求。

2.4 方法精密度测定

按1.4.2节试样溶液的制备方法配制5个环氧虫啶原药精密度溶液和5个25%环氧虫啶可湿性粉剂精密度溶液。

以0.197 0 mg/L有效成分线性相关溶液为标样溶液，在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，按照标样溶液、精密度溶液、精密度溶液、标样溶液的顺序进行测定，结果见表1、表2。

表1 环氧虫啶原药中环氧虫啶精密度试验结果

表2 25%环氧虫啶可湿性粉剂中环氧虫啶精密度试验结果

从表1可以看出，环氧虫啶原药中环氧虫啶质量分数测定结果的变异系数为0.363 7%，小于修改 的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67=1.343 4，表明有效成分分析方法精密度的测定结果符合要求。

从表2可以看出，25%环氧虫啶可湿性粉剂中环氧虫啶质量分数测定结果的变异系数为0.556 5%，小于修改的Horwitz公式2 (1-0.51ogC)×0.67= 1.644 1 (C=0.256 93)，表明有效成分分析方法精密度的测定结果符合要求。

2.5 方法准确度测定

称取含0.05 g (精确至0.000 1 g)环氧虫啶的25%环氧虫啶可湿性粉剂于50 mL容量瓶中，再加入环氧虫啶标样0.05 g (精确至0.000 1 g)，按1.4.2节试 样溶液的制备方法配制5个有效成分准确度溶液。

以0.197 0 mg/L线性相关溶液为标样溶液，在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，按照标样溶液、准确度溶液、准确度溶液、标样溶液的顺序进行测定，结果见表3。

从表3可以看出，25%环氧虫啶可湿性粉剂中环氧虫啶平均回收率为99.06%，表明此分析方法具有良好的准确度。

表3 8%叶菌唑悬浮剂回收率试验结果

表3 25%环氧虫啶可湿性粉剂回收率试验结果

3 结 论

本文选取环氧虫啶原药和25%环氧虫啶可湿性粉剂作为试样，通过试验建立了一种测定环氧虫啶含量的液相色谱通用分析方法，并进行了方法学验证。试验结果表明，该方法精密度和准确度高，分离效果好，且更加灵敏高效，具有通用性，为环氧虫啶原药及制剂的分析提供了指导。