50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂 高效液相色谱分析

王昌锦，林炳松，苏君一，康占海，刘细平，陶 婧，徐 妍

(1.北京宇悦生物科技有限公司，北京 100085；2.河北农业大学，河北保定 200020)

呋虫胺(dinotefuran)是一种新烟碱类杀虫剂，其 主要作用于昆虫烟碱乙酰胆碱受体，影响昆虫神经传递系统使害虫麻痹，从而发挥杀虫作用。呋虫胺主要用于玉米、小麦、水稻、果树以及蔬菜的飞虱、粉虱、蚜虫、蝽象、蓟马等害虫的防治[1-2]。氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)是杜邦公司开发的低毒、高效广谱的鱼尼丁受体杀虫剂，对鳞翅目昆虫有良好的控制效果，还能控制鞘翅目象甲科、叶甲科，双翅目潜蝇科、烟粉虱等多种非鳞翅目害虫[3-4]。目前呋虫胺或氯虫苯甲酰胺质量控制分析检测方法主要有液相色谱法或液质联用方法[5-8]，但关于呋虫胺与氯虫苯甲酰胺的混配制剂分析方法尚未见公开报道。基于此，本文建立了利用高效液相色谱技术开展了50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂的质量分析方法研究，旨在为该产品的质量分析提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)，具有紫外检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站：采用岛津UV-1800紫外可见分光光度计(岛津公司)；GD410DP10L型超声波清洗机(深圳市光点超声波设备有限公司)。

1.2 试剂

呋虫胺标准品，质量分数98.3%(北京宇悦生物科技有限公司提供)；氯虫苯甲酰胺标准品，质量分数99.0%(北京宇悦生物科技有限公司提供)；50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂(北京宇悦生物科技有限公司提供)；甲醇(色谱纯)；水：新蒸二次蒸馏水。

1.3 高效液相色谱条件

采用Agilent 1260高效液相色谱仪，具有紫外检测器和自动进样器；色谱柱：采用ZORBAX SB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇+水(体积比70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：245 nm；进样体积：5 μL。采用外标法定量。在该色谱条件下，呋虫胺和氯虫苯甲酰胺的保留时间分别约为1.8 min和3.8 min。混合标样及样品的典型液相色谱图见图1和图2。

1.4 测定步骤

1.4.1 标准溶液的配制

分别称取呋虫胺标准品约0.05 g、氯虫苯甲酰胺标准品约0.01 g (精确至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀备用。

1.4.2 样品溶液的配制

称取 50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂试样约0.12 g (精确至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，超声溶解后，过0.45 μm有机滤膜，备用。

1.4.3 测定

按上述色谱条件，连续注入数针标样溶液，待相邻2针的相对响应值变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样测定。

1.4.4 计算

将测得的2针试样溶液及其前后2针标样溶液中的呋虫胺、氯虫苯甲酰胺峰面积分别进行平均。试样中各有效成分的质量分数X(%)按下式计算。

式中：A1为标样溶液中呋虫胺或氯虫苯甲酰胺峰面积的平均值，mAU·s；A2为试样溶液中呋虫胺或氯虫苯甲酰胺峰面积的平均值，mAU·s；m1为呋虫胺或氯虫苯甲酰胺标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中呋虫胺或氯虫苯甲酰胺的质量分数。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相的选择

以不同比例的甲醇+水、乙腈+水作为流动相，对试样进行分离检测，结果表明，选用乙腈和水作为流动相时分离时间长且峰型不对称，当选用甲醇和水的体积比为70∶30时，峰形对称，分离效果理想，出峰时间适中，故最终选定流动相为甲醇+水(70∶30，体积比)。

2.1.2 检测波长的选择

通过紫外可见分光光度计UV-1800在190～900 nm进行紫外扫描，呋虫胺在210～270 nm有较大吸收，氯虫苯甲酰胺在240～260 nm有较大吸收。考虑溶剂、助剂对吸收的影响，以及呋虫胺、氯虫苯甲酰胺的峰高，最终选定以245 nm为检测波长。

2.2 特异性的测定

本试验方法采用全波长紫外扫描检测峰纯度分析法来鉴别。呋虫胺最小峰纯度相似度为1.000 0，最小峰纯度阈值为0.994 6，最小峰纯度指数为正值。氯虫苯甲酰胺最小峰纯度相似度为1.000 0，最小峰纯度阈值为0.999 9，最小峰纯度指数为正值，说明样品色谱峰中不含有杂质。二者的标样液相色谱峰与试样液相色谱峰出峰时间差均在1.0%以内，如图1和图2所示。制剂中呋虫胺和氯虫苯甲酰胺的峰纯度色谱图如图5和图6所示。

2.3 线性相关性测定

按1.4.1节中方法配制不同质量浓度的标样溶液，在1.3节色谱条件下进样，每个质量浓度重复进样2次，求其峰面积平均值。以质量浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。呋虫胺的线性方程为y=16 345x-88 702(图7)，相关系数(R2)为0.999 8。氯虫苯甲酰胺的线性方程为y=15 612x- 134 932(图8)，相关系数(R2)为0.999 1。

2.4 精密度测定

选取有代表性的50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂试样，在上述色谱操作条件下平行测定5次，结果见表1。可见，呋虫胺的标准偏差为0.078，变异系数为0.19%，氯虫苯甲酰胺的标准偏差为0.094，变异系数为0.93%。

表1 50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂精密度测定结果

2.5 准确度测定

采用标准添加法，在已知质量分数的试样中，加入一定量的呋虫胺、氯虫苯甲酰胺标准品，在上述色谱操作条件下，测得2种有效成分的回收率，结果见表2。可见，呋虫胺的平均回收率为99.94%，氯虫苯甲酰胺的平均回收率为99.75%。

表2 50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂回收率测定结果

2.6 非分析物干扰的试验

准确度的评价通常包含非分析物质的干扰，因有效成分中的任何干扰物均会导致分析方法出现系统误差。分析时应同时测定不带有效成份的空白样品，或证明其无干扰。通过对溶剂(甲醇)、空白样品(不含有效成分的助剂)、原药等按分析方法1.3进行分析，结果表明甲醇、2种原药及助剂对分析均无干扰，因此使用本文的分析方法未受到非分析物干扰而影响测定。

3 结 论

本文采用HPLC建立了50%呋虫胺·氯虫苯甲酰胺悬浮剂中有效成分的质量分析方法，该方法准确度和精密度较高，线性关系良好，操作简便、快速、准确，适于该产品生产过程的质量检测与控制。